DEN诱发大鼠肝癌过程中肝组织基因表达谱的演变

目的:揭示肝癌诱发过程中肝组织基因表达谱的演变,为中医药防治原发性肝癌提供参考.方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,分别于诱癌的第4周、8周、16周、20周(肝癌形成)切取肝(合肝癌)组织,常规提取RNA,Affymetrix Rat 230A GeneChip及技术检测大鼠肝组织基因表达的差异和演变.结果:在芯片的15710个基因中,正常组有9225个基因表达,诱癌4周表达增至9396个,8周增至9872个,16周增至10496个,20周有10420个.在肝癌诱发过程中,存在大量基因表达的消长以及高表达基因数的增加,其中部分已知基因的结果.结论:DEN诱发大鼠肝癌过程中基因组变化是十分复杂的,而且文献追踪表明,国内外对在这些基因的功能及其与肝癌发生、发展的关系大多不明确.因此,如何逐一找到那些起着关键作用的基因,进一步阐释其在肝癌的发生、发展和转归中的作用,及其与中医证候演变和相应治法的关系,是今后中医基础理论实验研究的重要方向.     

气虚证大鼠肾上腺下调的基因筛选

目的 筛选气虚证大鼠肾上腺下调的基因.方法 采用16周龄Wistar大鼠、自发性高血压大鼠(SHR大鼠)、自发性糖尿病大鼠(GK大鼠),运用标准化大鼠诊法,及 Gene Chip Rat Exon1.0 ST Array等技术,检测正常Wistar大鼠、正常气虚Wistar大鼠、SHR气虚和气盛大鼠、GK气虚和气盛大鼠等肾上腺基因表达谱,进而以倍数法筛选3个气虚证肾上腺一致性下调的基因.结果 ①3个气虚证同时下调的高表达基因有22个,主要包括参与代谢、运输类的Cyp11b3、Hsd3b6、Psmb4、Atpif1、Clic4、Gnai3、Ndufc2、Txnl1;参与信号转导、转录调控类的Jak2、Rhoa、Commd3、Tsc22d1、Polr2g、Capza2.②3个气虚证同时下调中等表达基因有10个,包括参与代谢、运输类的Glyat、Hpd、Slc22a2、Slc7a13;参与转录调控及信号转导类的Pcna、Cbx3、Umod、Serpine1、Emd、MGC108823等.③部分生物学功能不明确的基因,包括Calm2、Papd4、Myd116、Spg21、Emcn、Dhx40、LOC681219、RGD1359616等.结论 气虚证Wistar、SHR与GK大鼠肾上腺组织下调表达的基因主要涉及代谢、运输、调控转录、信号转导等生物学过程的紊乱.     

2060例原发性肝癌中医证候分布规律的临床流行病学调查研究

采用统一辨证标准和资料处理方法的大样本临床流行病学调研方案，临床调查原发性肝癌2060例。结果表明，原发性肝癌病机复杂，其常见证候分布依次为肝血瘀阻、脾气虚、肝郁气滞、脾虚湿阻、肝胃不和、脾胃湿热、肝阴虚、肾阴虚等；肝癌各期的征候分布互有异同。研究结果提示，肝血痰阻、脾虚气滞是肝癌的根本病机；肝癌的特点是肝脾同病，治疗应肝脾同治。     

同病异证H22肝癌小鼠肿瘤组织细胞凋亡通路基因差异表达的特征

目的:观察昆明种H22肝癌小鼠邪毒壅盛证与气虚证肿瘤组织细胞凋亡通路基因表达特征,探讨中医同病异证发生的物质基础。方法:采用小鼠计量化辨证方法,筛选出瘤早期邪毒壅盛证与气虚证同病异证H22肝癌小鼠,采用Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array检测肿瘤组织细胞凋亡通路相关基因表达的特征。结果:依据KEGG数据库细胞凋亡通路,筛选出芯片数据中匹配的33个基因,发现(1)TNF-α和IL-1依赖的细胞凋亡信号通路总体上不利于邪毒壅盛证小鼠肿瘤细胞的凋亡;(2)IL-3依赖的细胞凋亡信号通路总体上反似有利于邪毒壅盛证小鼠肿瘤细胞凋亡;而(3)线粒体介导的细胞凋亡信号通路,邪毒壅盛证小鼠一致表达下调,提示不利于其细胞凋亡。结论:邪毒壅盛肝癌小鼠肿瘤细胞恶性增殖程度高,可能与线粒体介导的细胞凋亡信号通路系列相关基因表达轻度抑制有关。     

正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴相关基因转录的特征

目的:观察正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴与睾酮合成调节相关基因的转录特征。方法:采用小鼠标准化诊法和辨证方法,筛选出正常气虚小鼠与正常小鼠,采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测其下丘脑-垂体-睾丸轴有关基因的转录水平。结果:与正常对照小鼠比较,正常气虚小鼠下丘脑Gnrh1表达略增;垂体上Gnrh受体上调,但Cga、Fshb和Lhb下调;睾丸Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b1、Hsd3b6等与睾酮合成相关酶一致上调。结论:正常小鼠出现气虚证时,垂体促性腺激素表达量略减,而睾丸合成睾酮的系列关键酶的表达活跃,这构成了正常气虚证小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴的特征。     

健脾益气法下调大鼠肝癌有关新基因的克隆

目的研究健脾益气治法下调DEN诱导大鼠肝癌高表达基因cDNA序列的克隆,为进一步揭示健脾益气法防治原发性肝癌的分子机制奠定基础。方法在课题组以往大范围揭示出健脾益气法下调大鼠肝癌高表达基因谱的基础上,采用电子克隆与RT-PCR相结合的方法,筛选健脾益气法明显下调的17个ESTs片段的全长cDNA序列。结果成功克隆出14个ESTs片段的含完整编码区全长或近全长cDNA序列,经Blast对比,有7个基因为新基因,已向GenBank申报,并实现登录,命名为健脾益气药物下调大鼠肝癌ZH1、ZH3、ZH8、ZH12、ZH14、ZH16、ZH17基因。结论本研究在充分利用生物信息学资源的基础上,成功克隆出7个健脾益气法能明显调控的新基因cDNA序列,为今后进一步深入研究这些新基因的功能,以及深入探讨健脾益气法防治肝癌的作用机制奠定基础。     

3种不同中医治法对大鼠肝脏癌细胞半乳糖凝集素表达的影响

目的 观察3种不同中医治法对大鼠肝癌半乳糖凝集素(GAL-3)表达的调控差异以及GAL-3在人肝癌细胞增殖中的作用,以探讨肝癌治疗的新靶点.方法 将72只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、喃氟啶组(喃氟啶8.33 mg/100g)、清热解毒组(清热解毒方1.5 g/100g)、活血化瘀组(活血化瘀方1.27g/100g)、健脾理气组(健脾理气方1.75g/100g),每组12只,除正常组外,其余各组大鼠采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌,各组均给药6周,检测各组大鼠肝癌组织(正常组取肝组织)GAL-3的表达.根据人GAL-3基因编码区设计2个siRNA靶点,并构建重组质粒转染SMMC-7721人肝癌细胞株,分为空白组、阴性组、GAL-3 RNAi组,实时定量PCR检测各组GAL-3 mRNA的表达,MTT法检测各组转染后24 h、72h、144h细胞增殖.结果 模型组GAL-3基因表达显著增加,健脾理气组能下调其表达;转染72h后GAL-3 RNAi组GAL-3 mRNA表达量明显降低;转染144h后,GAL-3 RNAi组肝癌细胞的生长增殖得到了明显的抑制(P＜0.01).结论 GAL-3基因在肝癌组织中高表达,健脾理气方能显著下调该基因表达.     

不同气虚证小鼠甲状腺G蛋白通路及相关基因转录特征

目的:观察不同气虚证小鼠甲状腺G蛋白信号通路及功能激素基因表达的特征.方法:采用小鼠计量化四诊和辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,观察正常小鼠、肿瘤气虚证荷瘤小鼠甲状腺G蛋白信号通路及相关基因表达特征.结果:不同气虚小鼠垂体TSH与甲状腺TSH受体(TSHR)表达量均增加,但正常气虚证小鼠甲状腺G蛋白通路的腺苷酸环化酶(AC)和蛋白激酶A(PKA)未见相应的表达量增加;而肿瘤气虚证小鼠则相应增加、活跃,发生响应,Ras基因亦如是.结论:正常气虚小鼠甲状腺G蛋白通路中大多基因表达不活跃可能是其部分物质基础,而荷瘤小鼠气虚证系因实致虚,因此表现与正常气虚证不同,即甲状腺尚处于代偿状态.     

原发性肝癌的中医药证治研究概况

原发性肝癌（以下简称肝癌）起病隐匿,进展迅速,疗效差,生存期短,流行面广,是严重危害人类健康的主要恶性肿瘤之一。我国医务工作者在长期防治肝癌的实践中,积累了丰富的经验,取得了可喜的成绩,及时对肝癌证治的发展给予综述研究,分析利弊,将有利于进一步深入肝...     

中医不同治法对成纤维细胞生长因子在大鼠肝癌中表达的影响

目的:观察成纤维细胞生长因子(FGF)在二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌组织中的表达及不同中医治法的作用。方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,随机分为正常组、模型组、喃氟啶组、抑癌扶正行气活血法组、清热解毒法组、行气活血法组、健脾扶正法组,应用Affymetrix Rat230A GeneChip及相关技术检测各组肝脏(含肝癌)FGF基因表达的差异。结果:Rat230A芯片中有24个FGFs、3个FGFRs、1个FGFBP,其中肝癌表达增加者15个,减少者13个。FGF13芯片读数(肝癌形成/正常肝脏)为10.8,FGF7芯片读数(正常肝脏/肝癌形成)为13.1。近10年有关FGFs文献857篇,涉及肝癌者仅49篇,仅3个基因(FGF1、FGF2及FGFR3)涉及。结论:FGFs基因在大鼠肝癌中的表达有一定意义,不同治疗方法对其表达水平存在差异。