弘扬仲景学术,开拓伤寒学新思路--评《聂氏伤寒学》

<伤寒论>由1800年前汉代医学家张仲景撰写,它开辟了中医临床治疗学的先河,千百年来为中华民族的医疗保健建立了丰功伟业,是中医四大经典之一、中医临床之基础.但在漫长的历史长河中,人类生活环境有了很大的发展,世界文明有了很大进步,人类疾病谱也有了很大变化,过去没有的疾病现在出现了,过去已有的疾病则与现在不同了.因此,应用<伤寒论>理论辨识外感、杂病,亦应结合现代疾病谱的变化,深入研究<伤寒论>的精神实质.     

子宫颈癌HLA-DRB1基因型的初步研究

宫颈癌是严重危害妇女健康的一种疾病,世界上每年大约有50万例新增病例.现已明确,宫颈癌是一种与人乳头状瘤病毒(HPV)感染明确相关的肿瘤,90%以上的宫颈癌HPV呈阳性[1].     

肿瘤细胞中的c-myc与p16启动子重新甲基化

目的探讨基因启动子区重新甲基化对肿瘤细胞生长的影响,寻找肿瘤防治新靶点。方法用S 腺苷甲硫氨酸使c-myc和p16启动子甲基化,MTT法测定肿瘤细胞生长状态;免疫荧光染色检测基因表达的变化。结果药物处理后,c-myc表达显著降低（P<0.05）,而p16表达无明显变化（P＞0.05）;肿瘤细胞的生长受到抑制。结论SAM能够通过下调癌基因的表达来抑制肿瘤细胞的生长,提示其在肿瘤治疗方面的应用前景。     

子宫颈癌HLA-DRB1基因型的初步研究

宫颈癌是严重危害妇女健康的一种疾病,世界上每年大约有50万例新增病例.现已明确,宫颈癌是一种与人乳头状瘤病毒(HPV)感染明确相关的肿瘤,90%以上的宫颈癌HPV呈阳性[1].     

常染色体显性先天性白内障一家系致病基因的连锁分析

背景先天性白内障约1／3的病例是由遗传所致,已发现遗传性白内障有着极为明显的遗传异质性,了解先天性白内障的致病基因对其基因治疗极为重要。目的分析一个具有常染色体显性遗传特点的先天性白内障家系的临床表型特征,进行已知致病基因的筛查定位。方法对遗传性先天性白内障一家系共16名成员眼部进行详细的临床检查,包括6例患者,确定为本家系白内障患者的临床表型。收集其中11名家系成员的血液样本提取DNA,包括3名正常家系成员及其配偶、5例患者。利用连锁分析进行排除定位,并采用Schuelke报道的新方法,只合成普通引物及一种荧光标记的通用引物M13,进行聚合酶链反应（PCR）,对连锁区域内的候选基因进行基因序列分析。结果本家系的白内障遗传方式符合常染色体显性遗传特征。基因连锁分析表明,在D22S315得到最高LOD值为1．20,在D16S3068得到LOD值为0．6。CRYBB2基因所有编码区及外显子与内含子交界处未发现基因序列突变。结论本家系初步排除了CRYBB2基因与此家系先天性白内障的相关性。对这个家系的基因定位需要更进一步的全基因组扫描,以发现致病基因在染色体上的可疑区间。连锁分析中进行微卫星位点的PCR扩增时,利用合成荧光标记的通用引物M13,可以显著降低成本,并取得同样的实验结果。     

人类端粒酶逆转录酶mRNA选择性剪接的研究进展

端粒酶的激活是细胞永生化和恶性转化的关键事件之一,而端粒酶的激活需要端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达。hTERT基因转录后的选择性剪接是调节端粒酶活性的重要机制之一。转变hTERTmRNA的剪接模式为肿瘤治疗提供了一个新的方案。     

糖尿病大鼠玻璃体腔注射缺氧诱导因子-1α siRNA对血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)小干扰RNA(siRNA)对糖尿病大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达的抑制作用,及其用于糖尿病新生血管性疾病治疗的可行性。

方法：以pSilencer2.1-U6neo为质粒载体,构建HIF-1α.siRNA 重组质粒。选取雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠54只,随机分为正常对照组(15只)和实验组(39只)。实验组采用尾静脉注射链尿佐菌素(STZ)的方法建立糖尿病大鼠模型,造模成功后将实验组随机分为糖尿病组(15只)、基因治疗组(12只)和空载体组(12只)。正常对照组及糖尿病组大鼠均不做转染; 基因治疗组和空载体组分别转染HIF-1α.siRNA 重组质粒和pSilencer空载体质粒。行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)观察视网膜组织形态,并采用免疫组织化学法检测VEGF蛋白的表达。分别于干扰后24、48、72h,1wk时计算VEGF蛋白的抑制效率。采用单因素方差分析和LSD-t检验进行统计学分析。

结果：HIF-1α.siRNA 重组质粒经酶切、测序鉴定,确定为目的序列。HE染色显示：正常对照组大鼠视网膜各层细胞排列整齐,细胞形态基本正常。糖尿病大鼠视网膜各层细胞排列紊乱,内界膜不完整,新生血管芽、新生血管簇呈垂直状突破内界膜生长。免疫组织化学染色显示：VEGF阳性表达为细胞浆出现棕黄色颗粒,主要位于神经节细胞层。正常对照组VEGF蛋白呈弱阳性表达,而DR对照组和空载体组表达明显增强,基因治疗组较DR组和空载体组表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF蛋白抑制率24、48、72h和1wk时分别为：27.4%、40.6%、47.5%、64.5%。

结论：HIF-1α.siRNA重组质粒能够抑制糖尿病大鼠视网膜中VEGF蛋白的表达,可能成为一种治疗糖尿病性新生血管疾病的新方法。     

股骨粗隆间骨折内固定术式的探讨

对87例股骨粗隆间骨折使用3种不同内固定术式治疗进行回顾性分析,认为股骨近端解剖钢板在治疗股骨粗隆间骨折时手术创伤小,操作简单,角度易调整,固定牢靠,抗旋转,并发症少。     

microRNA146a在干眼中的表达及作用

目的　研究microRNA146a在干眼小鼠模型中的表达及作用。方法　5周龄BALB/c雄性小鼠20只,左眼为正常对照组（20眼）,右眼为干眼组（20眼）。用2 g·L^-1苯扎氯铵诱导小鼠建立中重度干眼模型。造模完成3 d后,采用泪膜破裂时间（break-up time,BUT）和角膜荧光素钠染色（fluorescein staining,FLS）对小鼠进行眼表相关检查;随后随机选取10只小鼠,采用HE染色观察正常对照组和干眼组角膜和结膜的组织结构差异,结膜PAS染色后计数杯状细胞的量并对比;剩余10只小鼠分别提取角膜与结膜组织的总RNA,采用实时荧光定量PCR检测microRNA146a、白细胞介素（interleukin,IL）-1、IL-6、IL-8以及IL-1受体相关激酶1（IL-1 receptor-associated kinase 1,IRAK1）和肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor receptor associated factor-6,TRAF6）的相对表达量。结果　完成干眼造模3 d后,干眼组BUT为 （3.640±0.493）s,明显低于正常对照组的（10.645±0.583）s,差异有统计学意义（P<0.05）;干眼组角膜FLS评分为（14.650±0.860）分,明显高于正常对照组的（1.233±0.927）分,差异有统计学意义（P<0.05）。小鼠角膜和结膜组织HE染色结果显示:与正常对照组相比,干眼组角膜上皮欠平整,细胞数量增多,角膜基质层胶原纤维排列紊乱,成纤维细胞活化;干眼组小鼠结膜上皮细胞数量增多,排列欠规整,并伴有缺损。小鼠结膜PAS染色结果显示:干眼组结膜杯状细胞数量为（9.500±4.506）个,相较于正常对照组的［（29.667±8.756）个］明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示:干眼组角膜和结膜中microRNA146a、IL-1、IL-6、IL-8的相对表达量相较于正常对照组均升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。相较于正常对照组,干眼组角膜中IRAK1的相对表达量降低,TRAF6的相对表达量升高,而干眼组结膜中IRAK1的相对表达量升高,TRAF6的相对表达量降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　干眼时机体可通过增加microRNA146a的表达,以及其对炎症中靶点的调控作用,从而形成对干眼炎症反应的负反馈调节机制。