哺乳动物细胞灌流培养技术的开发与应用

<正>动物细胞培养始于20世纪初,发展至今已成为生物、医学等领域广泛采用的技术方法。同微生物细胞相比,动物细胞表达蛋白质因具有蛋白空间折叠和糖基化修饰等功能而备受青睐[1-2]。近年来,蛋白药物的上市和带来的巨大经济效益,掀起了哺乳动物细胞培养的热潮。对于倍增时间长、对外界环境敏感、培养难度大的动物细胞,如何完善其培养工艺,提高细胞蛋白表达量,并有效投入大规模生产,成为国内外研究的热点。     

ErbB信号与蛋白激酶B在快速起搏所致猴心衰心肌细胞损伤中的作用

为了研究ErbB受体与蛋白激酶B在心力衰竭发生机制中的作用，建立快速起搏诱导恒河猴心力衰竭模型。采用颈总动脉插管技术，测定左心室最大压力上升速度(LVdp/dt_max)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室收缩末期压(LVSP)等血流动力学指标；采用电化学发光免疫测定法观察脑钠肽(BNP)含量；采用RT-PCR方法测定ErbB₂、蛋白激酶B(PKB)、Bcl-xl mRNA表达水平；采用Western blotting检测蛋白激酶B活性(phospho-PKB，即磷酸化蛋白激酶B蛋白水平)及凋亡相关基因Bcl-xl的蛋白水平。快速起搏诱导心力衰竭模型恒河猴心肌收缩能力显著下降，心衰标志物脑钠肽水平明显上升(P<0.05)。与对照组比较ErbB₂，PKB及Bcl-xl mRNA表达水平明显下降(P<0.05)，同时心肌组织蛋白激酶B活性显著下降，Bcl-xl蛋白水平也明显下降(P<0.05)。快速起搏所致猴心衰心肌细胞损伤的机制可能与ErbB₂、下游蛋白激酶B、凋亡抑制基因Bcl-xl表达水平下降及蛋白激酶B活性下降有关。     

美罗培南治疗药物监测的HPLC方法探索及其临床采样流程建立

目的：建立HPLC法测定人血浆中美罗培南的血药浓度，结合其稳定性研究制定临床采样流程，并应用到治疗药物监测个体化给药方案设计。方法：血浆样品经甲醇沉淀蛋白，取上清加水稀释后进样分析；色谱柱为Venusil HILIC（4.6 mm×250 mm，5.0 μm）；流动相为50 mmol·L^-1磷酸二氢钾含0.05%甲酸-乙腈（30：70，V/V）；流速0.8 mL·min^-1；检测波长为299 nm；柱温40℃；分别考察美罗培南全血、溶血样本在不同温度、不同采血管等条件下的稳定性。结果：美罗培南在0.38~71.30 μg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.999 9），定量下限为0.38 μg·mL^-1，低、中、高浓度的萃取回收率在101.87%~107.89%，日内、日间RSD均小于2.81%；以EDTA-K2为最佳的临床采血管，EDTA-K2管和肝素钠管中的美罗培南能在室温（19~22℃）下稳定4 h；溶血样本在2~6℃冰箱存放7 h稳定，但相对于EDTA-K2管和血浆质控，肝素钠管会使美罗培南检出率偏高；血浆样本在室温（19~22℃）、2~6℃冰箱内6 h、-40℃冻存20 d、-40℃反复冻融3次均稳定。结论：建立的TDM临床采样流程充分考虑了临床采样的实际情况并能确保美罗培南药物的稳定性及分析检测结果的准确性，可满足临床血药浓度监测需求。     

基于蒙特卡洛模拟评价头孢噻肟/他唑巴坦对产ESBL肠杆科细菌不同给药方案研究

目的:探讨头孢噻肟/他唑巴坦对产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)分布情况,评估头孢噻肟/他唑巴坦不同给药方案下％fT＞MIC≥50％达标率,为该药临床给药方案的筛选及优化提供参考.方法:采用微量肉汤稀释法测定头孢噻肟单药、头孢噻肟/他唑巴坦(他唑巴坦固定质量浓度4...     

LncRNA LUCAT1介导的miR-199b-5p/MAPKAPK3轴在甲状腺乳头状癌发展中的调控作用及机制

目的 探究lncRNA LUCAT1对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响,并进一步探究miR-199b-5p/MAPKAPK3轴在其中发挥的作用。方法 RT-qPCR检测甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中LUCAT1、miR-199b-5p和MAPKAPK3表达;生物信息学预测miR-199b-5p与LUCAT1或MAPKAPK3的潜在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-199b-5p与LUCAT1或MAPKAPK3结合。将TPC-1细胞分为sh-NC组、sh-LUCAT1组、sh-LUCAT1+inhibitor NC组、sh-LUCAT1+miR-199b-5p inhibitor组和sh-LUCAT1+miR-199b-5p inhibitor+sh-MAPKAPK3组;Western blot检测各组细胞MAPKAPK3蛋白表达水平;CCK-8实验检测各组细胞增殖活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;Western blot方法检测各组细胞EMT相关蛋白表达水平。结果 甲状腺乳头状癌组织中LUCA...     

他汀类药物和贝特类药物在治疗混合性高脂血症的临床应用

收集相关文献报道,综述他汀类药物和贝特类药物临床治疗混合性高脂血症的应用价值。众多学者认为,他汀类药物和贝特类药物在治疗混合性高脂血症时有重要的临床意义。在治疗混合性高脂血症时无论是单一用药还是联合用药,都具有较好的临床效果,提倡临床联合使用。     

多黏菌素B治疗药物监测LC-MS/MS方法探索及临床初步应用

目的 建立液质联用法(LC-MS/MS)测定人血浆中多黏菌素B(polymyxin B,PMB,主要活性成分PMB1和PMB2)的血药浓度,结合其全血稳定性研究制定临床采样流程,并应用到治疗药物监测(TDM)个体化给药方案设计.方法 血浆样品经乙腈(含甲酸6.67％)蛋白沉淀,取上清加水稀释后进样分析;色谱柱为Shim...     

miRNA-451/MIF在帕金森病小鼠认知功能障碍中的保护作用

目的 研究miRNA-451/MIF通路在帕金森病(PD)认知障碍中的作用及机制,为PD认知障碍提供治疗新思路和方法。方法 腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)构建PD小鼠模型,通过脑立体定向注射干预PD小鼠模型脑组织中miRNA-451表达,采用Morris水迷宫对小鼠进行认知行为学评估,qPCR、免疫组化、尼氏染色检测干预前后脑组织miRNA-451/MIF分子表达、多巴胺能神经元细胞存活、海马区细胞形态。结果 MPTP腹腔注射会引起小鼠认知行为受损(P<0.01),脑组织内miRNA-451表达增加(P<0.01),认知更差的小鼠miRNA-451表达更多(P<0.05)。人为降低miRNA-451表达后可以改善MPTP腹腔注射引起的认知功能受损(P<0.05),增加脑组织内MIF表达(P<0.05)并且缓解黑质多巴胺能神经元细胞受损(P<0.01),减少海马区神经元细胞的受损。结论 miRNA-451/MIF可能参与PD认知障碍的发生及发展,干预miRNA-451/MIF表达可为治疗PD认知障碍提供新方法和新策略。     

四川省人群健康状况及重点慢性病流行现况

<正>为了解四川省人群死亡及重点慢性病发病、患病的情况,更好地为政府制定慢性病防控相关政策提供依据。在四川省长期开展了死亡登记、肿瘤发病登记、心脑血管事件报告监测、伤害监测、成人慢性病与营养监测、慢性阻塞性肺疾病监测的工作,通过医院报送和人群抽样调查的方法收集居民死亡、发病和患病信息,并对流行现况进行了分析。2015年四川省人群粗死亡率647.98/10万,人均期望寿命76.42岁,慢性病死亡构成呈上升趋势;2013年成人高     

可诱导高拷贝的正交琥珀抑制性tRNA筛选质粒的构建

为筛选获得对大肠杆菌氨酰合成酶具有高度正交性的琥珀抑制tRNA,建立了一种基于可诱导高拷贝质粒的筛选系统。利用乳糖操纵子对oriL复制子进行调控,有IPTG存在时使其携带的琥珀抑制性tRNA大量转录。正交性不高的琥珀抑制性tRNA大量转录时导致宿主菌死亡,只有携带高正交性的琥珀抑制性tRNA的克隆可以存活,从而达到筛选目的。利用这一筛选质粒,构建了琥珀抑制性tRNA突变文库,并进行了筛选,获得了与大肠杆菌氨酰tRNA合成酶具有高度正交性的突变体,并利用含琥珀抑制突变的半乳糖苷酶突变体进行了验证,证实利用可诱导高拷贝的筛选质粒可筛选出高正交性的琥珀抑制性tRNA突变体。