冬凌草甲素调控miR-200c/EZH2轴抑制黑色素瘤细胞上皮-间质转化的机制研究

目的 探究冬凌草甲素调控微小RNA200c(miR-200c)/组蛋白甲基化转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)轴抑制黑色素瘤细胞(A375细胞)上皮-间质转化(EMT)的影响机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对A375细胞活力的影响;将A375细胞分为对照组、冬凌草甲素组、mimic control组、miR-200c mimics组、冬凌草甲素+inhibitor control组、冬凌草甲素+miR-200c inhibitor组,qRT-PCR检测miR-200c、EZH2 mRNA表达情况;免疫印迹法检测EZH2及EMT相关蛋白表达情况;黏附实验检测A375细胞黏附能力;Transwell实验检测A375细胞侵袭及迁移能力;荧光素酶报告基因实验检测miR-200c与EZH2的靶向关系;构建移植瘤裸鼠模型,检测肿瘤质量;免疫组化法分析EMT相关蛋白表达情况。结果 A375细胞存活率随冬凌草甲素浓度的增加以剂量依赖性显著降低(P<0.05),由于40μmol/L冬凌草甲素接近半数抑制浓度,因此选取40μmol/L冬凌草甲素进行后续实验;与对照组相比,冬凌草甲素...     

酸性肽对大鼠脑内谷氨酸和酸性肽含量的影响

目的研究大鼠口服酸性肽后脑内谷氨酸和酸性肽的含量变化。方法通过纸电泳、茚三酮显色、分光光度法和标准曲线法测定脑内谷氨酸和酸性肽的含量。结果正常对照组大鼠脑内的谷氨酸含量(mg/g脑组织)为0.7101±0.1347。服用酸性肽1、2、3、4、5h后各组大鼠脑内谷氨酸的含量(mg/g脑组织)分别为1.2591±0.1446,1.0595±0.1195,0.8798±0.1158,0.7400±0.0992,0.7600±0.0992。正常对照组大鼠脑内的酸性肽的含量(mg/g脑组织)为1.7789±0.2078。服用酸性肽1、2、3、4、5h后各组大鼠脑内酸性肽的含量(mg/g脑组织)分别为1.4662±0.1511,3.8377±0.2778,3.2253±0.2733,1.8701±0.1822,1.7398±0.1822。结论大鼠口服酸性肽后1~2h内能升高脑内的谷氨酸水平,并且在3~4h内能升高脑内的酸性肽水平。     

抗肿瘤分子Apoptin在肿瘤治疗中的应用(综述)

凋亡素(Apoptin)是来自鸡贫血病毒的小分子蛋白质,能选择性地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无毒副作用,其诱导凋亡的作用不依赖抑癌基因p53亦不被抗凋亡蛋白Bcl-2所抑制,Bcl-2增高甚至能够增强其凋亡诱导效应.Apoptin的这些抗肿瘤特点使其广泛应用于肿瘤治疗.目前,Apoptin用于肿瘤治疗的主要形式有Apoptin基因治疗肿瘤、Apoptin蛋白质治疗肿瘤、Apoptin基因或蛋白与其他疗法联合治疗肿瘤.     

小肽的分离方法及其肠道吸收研究进展

小肽(二肽和三肽)可以被肠道完整地吸收。小肽在肠道的吸收载体是肽载体Ⅰ型,与游离氨基酸相比,小肽具有转运速度快、耗能低、不易饱和等独特的吸收特点,使其成为目前研究的一个热点。开发小肽,研制新药,关键是分离小肽。目前分离小肽的方法主要有毛细管电泳、高效液相色谱法、柱层析法、毛细管电泳-电喷雾-质谱联用、纸电泳法等。     

ER-α36在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的:研究ER-α36(estrogen receptor-alpha 36)在乳腺癌组织中的表达状态及在乳腺癌发生、发展和临床预后中的作用。方法:选取河南省肿瘤医院乳腺科及郑州大学第一附属医院乳腺科2010年3月-2013年3月间653例乳腺癌组织,用RT-PCR技术和免疫组化技术检测组织中ER-α36、ER-α66、PR和Her-2的表达,分析ER-α36的表达与上述指标及临床病理特征之间的关系。结果:ER-α36的总体表达率是40%（261/653）。在Her-2阳性组织中的表达率63%（78/124）,显著高于阴性组35%（183/529）,P<0.05。在ER-α66/PR/Her-2三阴性组织中的表达率66%（69/104）,显著高于非三阴性组35%（192/549）,P<0.05。在ER-α66阳性和阴性样本中及在PR阳性和阴性样本中的表达率,差异没有统计学意义(P>0.05)。在III+IV期乳腺癌组织中的阳性表达率54%（165/305）,明显高于I+II期28%（96/348）,P<0.05。在淋巴结转移阳性乳腺癌组织中的表达率55%（184/335）,显著高于无转移组织24%（77/318）,P<0.05。结论:ER-α36可能在乳腺癌的发生、发展及淋巴结转移过程中具有重要作用,并与Her-2的表达、乳腺癌分期及淋巴结转移有关,有望成为新的肿瘤标记物及临床诊治的新靶点。     

冬凌草甲素逆转黑色素瘤细胞顺铂耐药的作用及机制

目的：探讨冬凌草甲素（Ori）逆转人黑色素瘤细胞顺铂（DDP）耐药的作用及其机制。方法：分别将黑色素瘤DDP耐药细胞A375/DDP和M14/DDP分为对照组、2μmol/L Ori组、4 mg/L DDP组和2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组。CCK-8法、Transwell实验、Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞术分别检测各组细胞的增殖活力、侵袭和迁移能力及凋亡水平,透射电子显微镜观察自噬小体,免疫荧光染色法观察微管相关蛋白轻链3(LC3)点状结构,WB法检测A375/DDP细胞自噬相关蛋白Beclin-1、p62、LC3Ⅱ和LC3Ⅰ的表达。结果:与4 mg/L DDP组相比,2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著下降（均P<0.01）,凋亡水平显著升高（P<0.01）。4 mg/L DDP组细胞中可见大量自噬小体以及LC3点状染色,但2μmol/L Ori+4 mg/L DDP组仅可见少量。与对照组相比,4 mg/L DDP组细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达水平均显著升高（均P<...     

甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义

目的 :探讨甲基化特异性聚合酶链反应 ( MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值。方法 :选取 5 6例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液( BALF)及痰标本 ,其中 32例为肺癌 ,2 4例为良性肺部疾病。标本经一般处理 ,PCR扩增后 ,产物经电泳 EB染色 ,紫外灯下观察。结果 :32例肺癌组织标本中 ,1 4例 ( 4 3.8% )在 p1 6基因启动子区域呈现异常甲基化 ,其中 9例 ( 64.3% )在相应的 BALF中检出甲基化存在 ,5例 ( 35 .8% )在相应的痰标本中也检出甲基化存在。良性肺部疾病 2 4例 ,其中肺囊肿 1 0例 ,肺结核 1 4例 ,无论在手术切除标本还是 BALF和痰标本中均未检出 p1 6基因甲基化存在。结论 :MSPCR技术对肺癌患者 BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性 ,是一项很有潜力的肺癌早期诊断新技术。     

增力祛疲口服液对游泳致疲劳大鼠骨骼肌和血液生化指标的影响

目的 :探讨增力祛疲口服液抗运动性疲劳作用的现代机制。方法 :选用游泳训练导致大鼠运动性疲劳模型 ,用生化测定和细胞化学分析的方法 ,研究大鼠骨骼肌中糖原、SDH、LDH、LPO、Ca+ + 、K+ 的含量变化以及血清睾酮 (T)、皮质醇 (C)、T/C值、SOD活性、MDA含量的变化 ,观察增力祛疲口服液对其变化的影响。结果 :与正常组比较 ,对照组大鼠骨骼肌组织糖原含量、Ca+ + 、K+ 含量和血清T含量、SOD含量及T/C比值显著降低 ,而骨骼肌组织中LDH活性增强、LPO含量增加 ,血清中MDA和C含量显著增加 ,(P <0 .0 5 ) ;与对照组比较 ,实验组大鼠上述指标均显著改善。结论 :该药有利于骨骼肌组织疲劳后的功能恢复 ,有增强抗疲劳的良好作用 ,其机理与改善骨骼肌的新陈代谢和提高清除自由基的能力有关。     

慢病毒载体介导 CDK2 基因沉默对黑素瘤B16-F1细胞生物学行为的影响

目的:探讨由慢病毒载体pUL介导的pUL-CDK2-shRNA3 (CDK2-shRNA)沉默CDK2基因后对小鼠黑素瘤B16-F1细胞恶性生物学行为的影响,初步探索其作用机制.方法:利用重组慢病毒载体CDK2-shRNA转染B16-F1细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,DAPI染色、AnnexinV-FITC/PI双染流式术检测细胞凋亡情况,流式术检测细胞周期变化,细胞黏附实验、transweU小室实验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞周期信号通路上RB蛋白(成视网膜细胞瘤蛋白)、pRB蛋白、细胞周期相关转录因子E2F1及侵袭迁移相关蛋白基质金属酶-2(MMP-2)、基质金属酶-9(MMP-9)的表达水平.结果:与空白对照组和阴性对照组相比,CDK2-shRNA组细胞相对增殖率、细胞黏附率、细胞侵袭和迁移能力均显著下降(均P＜0.05).细胞凋亡率显著增加(均P＜0.05);G1期细胞显著增加而S期和G2期显著降低(P＜0.05).细胞周期相关蛋白pRB、E2F1明显降低而RB显著升高(P＜0.05),细胞侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9明显降低(P＜0.05).结论:慢病毒载体pUL介导的shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞恶性生物学行为有显著的抑制作用,其机制主要与细胞周期和细胞侵袭迁移相关蛋白表达变化有关.     

CDK2基因沉默联合达卡巴嗪对B16-F1黑素瘤的生长抑制作用

目的 探讨CDK2基因沉默后对达卡巴嗪(DTIC)治疗B16-F1黑素瘤抑瘤效应的影响.方法 实验设对照组、CDK2-shRNA组、DTIC组、CDK2-shRNA+ DTIC组,MTT法检测各组细胞生长抑制情况,计算药物相互作用指数(CDI值),AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况.建立C57 BL/6小鼠B16-F1细胞移植瘤模型,分组实验,持续观察18d,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况.结果 与对照组相比,CDK2-shRNA组、DTIC组、CDK2-shRNA+ DTIC组在72h的细胞相对存活率分别为(40.6±2.8)％、(45.2±3.7)％、(28.7±2.1)％,细胞凋亡率分别为(25.1±3.3)％、(15.6±2.2)％和(45.6±3.5)％,细胞相对存活率显著降低(F=458.04,P＜ 0.05)而细胞凋亡率显著升高(F=115.46,P＜0.05),其中CDK2-shRNA+ DTIC组比DTIC组的细胞相对存活率显著降低(P＜0.01),而细胞凋亡率显著升高(P＜0.01);两药相互作用指数(CDI值)＜0.7.治疗第6天,对照组、CDK2-shRNA组、DTIC组及CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤体积分别为(185.44±68.97) mm3、(83.91±14.33)mm3、(123.70±20.85) mm3、(34.54±10.72) mm3.从治疗的第6天开始,与对照组相比,CDK2-shRNA组、DTIC组及CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤生长速度明显降低(F=11.819,P＜0.05),而CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤生长速度明显低于DTIC组(P=0.04);与对照组相比,CDK2-shRNA组、DTIC组、CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤生长抑制率分别为52.2％、41.2％、86.4％,组织细胞凋亡指数分别为(32.93±3.72)％、(21.62±3.54)％、(63.29±4.74)％,组织细胞凋亡指数显著升高(F=222.25,P＜0.05),其中CDK2-shRNA+ DTIC组的组织细胞凋亡指数显著高于DTIC组(P＜0.01).结论 沉默CDK2基因的表达可以增加DTIC对黑素瘤的生长抑制作用,二者体外有协同效应,通过增加肿瘤细胞的凋亡是其机制之一.