模糊数学方法用于职业危害因素的综合评价

模糊数学方法用于职业危害因素的综合评价徐新云（湖南省劳动卫生职业病研究所，长沙４１０００７）用模糊数学方法进行综合评价时，首先要确定评判等级，各评判因素在不同等级中的取值，以及各评判因素的权重系数三方面内容。本文将评判等级定为优、良、一般、差、很差５...     

DEHP对CHO细胞凋亡基因和癌基因表达水平的影响

目的探讨DEHP对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)的细胞毒性和凋亡基因癌基因表达水平的影响。方法不同剂量DEHP对CHO细胞进行染毒24 h和48 h,应用CCK8试剂盒测定DEHP对CHO细胞的半数抑制浓度IC50,荧光定量PCR检测凋亡基因(Bcl-2、caspase-8、caspase-9)和癌基因(c-fos、k-ras、p53)表达水平改变。结果DEHP染毒CHO细胞24 h的IC50为612μM,染毒48 h的IC50为336μM。DEHP较高剂量(150μM和300μM)染毒条件下,凋亡基因Bcl-2表达水平比对照组显著降低,300μM DEHP染毒时caspase-8和caspase-9表达水平比对照组显著增加;150μM和300μM DEHP染毒条件下c-fos表达水平增加;300μM DEHP染毒条件下k-ras基因表达水平升高;p53表达水平无明显变化。结论 DEHP可通过激活caspase通路引起CHO细胞凋亡,也引起癌基因表达水平升高。     

3β-HSD基因高表达细胞株建立及其对DEHP致凋亡影响研究

目的构建3β-HSD高表达细胞株,研究3β-HSD高表达对塑化剂DEHP致凋亡的影响。方法根据GenBank上3β-HSD基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒载体pLVX-CMV-ZSgreen-PGK-Puro,然后转染至MCF-7细胞中,对细胞株进行鉴定。用不同剂量DEHP对3β-HSD高表达细胞和MCF-7细胞染毒24h,在基因和蛋白表达水平上检测Bax、Caspase-3、Caspase-8的变化。结果基因测序验证本文构建的3β-HSD基因高表达载体基因序列与GenBank中的序列一致,荧光定量PCR结果显示3β-HSD基因表达水平升高105倍,western blot结果显示3β-HSD蛋白表达水平升高80%。DEHP染毒MCF-7细胞后,Bax、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平比对照组分别升高28%~54%、13%~49%、21%~70%,BAX、CASPASE-3、CASPASE-8蛋白表达水平比对照组分别升高28%~61%、40%~48%、31%~84%。DEHP染毒3β-HSD高表达细胞后,Bax、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平比对照组分别升高39%~75%、22%~30%、32%~45%,BAX、CASPASE-3、CASPASE-8蛋白表达水平比对照组分别升高8%~33%、19%~32%、10%~21%。结论本文成功构建3β-HSD基因高表达细胞株;DEHP可引起MCF-7细胞和3β-HSD高表达细胞凋亡基因及蛋白发生改变,本文结果提示3β-HSD基因在一定程度上促进DEHP的致凋亡作用。     

带TAP标签的癌蛋白SET真核载体的构建及其表达

背景与目的: 为研究三氯乙烯诱导的差异蛋白SET在肝细胞L-02中的相互作用,构建带串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1/SET-TAP。 材料与方法: 从L-02肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增SET基因,从质粒中扩增得到TAP基因,采用重叠PCR法将基因SET与TAP连接成SET-TAP,双酶切后纯化序列定向克隆至pcDNA3.1/zeo(+)并转化E.coli DH 5α ,取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,重组质粒瞬时转染L-02肝细胞进行表达,Real Time-PCR和Western blotting检测融合蛋白的表达。 结果: 经双酶切和DNA测序鉴定,证实pcDNA3.1/SET-TAP真核表达载体构建成功,将该载体转染L-02细胞后,融合蛋白在肝细胞中获得高效表达。 结论: 该结果为研究SET在三氯乙烯致肝细胞毒性的蛋白质相互作用以及三氯乙烯致机体损伤的机制奠定了基础。     

ICP-AES和ICP-MS法测定血中微量元素

目的 :调查学生的不明病症的病因。方法 :采用微波消解法处理样品 ,运用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP- AES)和质谱法 (ICP- MS)测定了学生血中微量元素。结果 :与正常学生相比 ,患病学生血中重金属含量差异无显著性 ,而血中钙、铁、钾、镁含量偏低差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :学生的不明病因与营养不良有很大的关系     

StAR基因高表达对DEHP致MCF-7细胞凋亡作用的影响

目的：构建类固醇合成急性调节蛋白（StAR）基因高表达载体,建立StAR基因高表达细胞,研究StAR基因高表达对邻苯二甲酸二-（2-乙基己）酯（DEHP）毒性作用的影响。方法：根据GenBank提供的StAR基因cDNA序列设计引物,PCR扩增StAR基因并将其克隆到慢病毒载体中,构建StAR基因高表达MCF-7细胞,通过基因测序、荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞。用不同剂量DEHP染毒MCF-7细胞和StAR基因高表达MCF-7细胞24 h,检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Caspase-8在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：基因测序证明构建的StAR基因高表达载体序列正确,荧光定量PCR检测StAR基因转染细胞比正常MCF-7细胞StAR mRNA表达水平升高591.9倍（P < 0.01）,Western blot实验结果显示,StAR基因转染细胞比正常MCF-7细胞StAR蛋白表达水平升高190%（P < 0.01）。不同剂量DEHP染毒StAR基因高表达细胞后,荧光定量PCR结果显示,StAR基因高表达细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平较对照组（0 mmol/L DEHP）显著升高,差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。Western blot实验显示,StAR基因高表达细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平比对照组显著升高,差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。结论：本实验成功构建了StAR基因高表达细胞,DEHP处理后StAR基因高表达细胞的凋亡相关基因表达水平较MCF-7细胞升高,提示StAR基因具有促进DEHP致细胞凋亡作用。     

职业性砷中毒

砷是一个古老的毒物 ,其应用在我国至今有两千多年的历史。砷危害无论是职业接触或环境污染 ,对人类都可造成严重的影响。现就职业性砷中毒问题综述如下。1　砷的理化性质和职业接触砷广泛存在于自然界 ,多以硫化物形式存于多种金属的矿石中 ,含量一般为 1 2 %～ 9 8%。重要的矿石有信石[(Ａｓ)Ｓ]、雄磺 (Ａｓ4 Ｓ4 )、雌磺 (Ａｓ2 Ｓ3)、黄铁矿 (ＦｅＡｓＳ)。砷元素有灰、黄和黑色三种不同异形体 ,相对原子质量 74 92 ,密度5 73ｋｇ/ｍ3(14℃ ) ,熔点 817℃ ,沸点6 15℃ ,可升华 ,不溶于水。砷在潮湿的空气中易被氧化生成三氧化二砷(Ａ…     

DNA氧化性损伤修复酶MTHl及0GGl和MUTYH及其交互作用

化学物质在机体内诱导产生活性氧自由基能攻击:DNA,主要生成8-羟基鸟嘌呤(7,8.dihydr0-8-oxoguanine,8-oxo-Gua),它可导致DNA链空间构象的改变,在DNA复制过程中引起G:C-T:A颠换,形成点突变,该点突变被认为与肿瘤的发生发展、机体细胞的老化和某些退行性疾病均有密切的关系[1].     

毒物危害程度的综合分级方法探讨

毒物危害程度的综合分级方法探讨湖南省劳动卫生职业病防治研究所徐新云本文拟就评价毒物危害程度的指标及分级方法进行初步探讨。评价毒物危害程度的指标选择１９８５年我国颁布了中华人民共和国国家标准——《职业性接触毒物危害程度分级》ＧＢ５０４４—８５。该标准提...     

p38MAPK基因对PM2.5染毒HK-2细胞部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨p38MAPK基因对PM_2.5染毒人肾上皮细胞（HK-2）部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法：根据GenBank提供的p38MAPK mRNA序列,设计合成干扰序列,将重组慢病毒载体转染HK-2细胞,构建p38MAPK基因沉默细胞株。分别采用实时荧光定量PCR （qPCR）和Western blot法检测p38MAPK mRNA和蛋白的表达水平鉴定沉默效果。用50 μg/mL的PM_2.5混悬液分别染毒正常HK-2细胞和p38MAPK基因沉默细胞24 h,利用荧光定量PCR和Western blot检测癌基因c-myc,c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2的mRNA和蛋白的相对表达水平。结果：qPCR和Western blot检测结果显示,与正常HK-2细胞比较,p38MAPK基因沉默细胞中p38MAPK mRNA的表达下降了58.50%,p38MAPK蛋白表达水平下降了51.33%（P<0.01）。PM_2.5混悬液对HK-2细胞和p38MAPK基因沉默HK-2细胞染毒后,qPCR检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM_2.5染毒组中c-myc、c-fos、Caspase-8和Casepase-9基因表达分别升高39.89%、15.12%、19.47%和15.45%,p53和Bcl-2基因表达分别下降21.54%和31.77%,差异均具有统计学意义（P<0.05）;与正常HK-2细胞PM_2.5染毒组比较,p38MAPK基因沉默HK-2细胞PM_2.5染毒组中c-myc、c-fos、p53、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达分别下降了84.55%、63.55%、34.49%、37.19%和54.97%,差异均具有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM_2.5染毒组中的c-myc和Caspase-8蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;与正常HK-2细胞PM_2.5染毒组比较,p38MAPK基因沉默HK-2细胞PM_2.5染毒组中的c-myc、Caspase-8和Bcl-2蛋白表达减少（均为P<0.05）。结论：成功构建了p38MAPK基因沉默细胞株,PM_2.5可引起HK-2细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平升高,p38MAPK基因可能参与PM_2.5对HK-2细胞的毒性作用过程。