利用酵母菌捕获寄生虫分泌蛋白

哺乳动物蛋白经内质网膜离开细胞进入分泌途径,此蛋白在N末端包含一个被称为信号序列的特异的核心疏水肽基团。蛋白通过内质网膜转动是共翻译且分泌的信号序列,Ⅰ型跨膜蛋白通常由一种信号肽酶加工。一种非断裂的信号序列,可能是从N-末端凹陷,允许其他拓扑形式的跨膜蛋白进入内质网膜,锚定膜蛋白。编码分泌蛋白的寄生虫     

一氧化氮经钙信号转导途径诱导弓形虫速殖子凋亡

目的:为探讨胞浆Ca^2 是否为一氧化氮（Nitric Oxide,NO)诱导弓形虫速殖子凋亡的重要信号分子。方法：采用脱氧核苷酸末端转移酶（TdT)介导的缺口末端标记法（TUNEL）、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡以及应用Fura-2荧光负载技术测定胞浆游离钙浓度[Ca^2 ]i。结果：NO供体亚硝基铁氧化钠（Na2Fe(CN)5NO,SNP)诱导弓形虫速殖子凋亡过程中胞浆[Ca^2 ]i明显升高。NO清除剂，N－乙酰半胱氨酸能明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡及SNP诱导的速殖子胞浆[Ca^2 ]i升高，而不含NO的SNP为似物，铁氰化钾[K3Fe(CN)6]不能诱导速殖子凋亡及其胞浆[Ca^2 ]i升高。胞外钙螯合剂EGTA，和L型电压依赖性钙通道阻滞剂异搏定，完全或部分抑制SNP引起的速殖子胞浆[Ca^2 ]i升高，胞内钙螯合剂BAP－TA／AM及胞外钙螯合剂EGTA明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡。结论：证明NO的供体SNP诱导弓形虫速殖子凋亡主要通过促进胞外钙内流，胞浆[Ca^2 ]i升高所致。     

弓形虫影响前列腺素E2合成的细胞内信号调节途径

目的　探讨弓形虫感染巨噬细胞过程中花生四烯酸 (AA)及前列腺素E₂ (PGE₂ )的产生及其相关的细胞内信号调节途径。　方法　构建刚地弓形虫 小鼠巨噬细胞侵染模型 ,应用气相色谱、酶联免疫吸附测定 (ELISA)、逆转录 聚合酶链反应 (RT-PCR)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)检测钙离子调节剂乙二醇双 ( 2-氨基乙醚 )四乙酸 (EG-TA)、钙离子螯合剂 (BAPTA/AM )、钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪 (TFP)及蛋白激酶C (PKC)抑制剂 1-( 5-磺酰基 ) 异喹啉-2-甲基-哌嗪盐酸盐 (H7)对弓形虫诱导的AA、PGE₂ 含量及促细胞分裂剂诱导性环加氧酶-2 (COX-2 )mRNA和蛋白质表达水平的影响。　结果　EGTA、BAPTA/AM及TFP均可抑制弓形虫诱导的巨噬细胞AA和PGE₂ 合成 ;PKC抑制剂H7可明显抑制弓形虫和脂多糖 (LPS)诱导的巨噬细胞PGE₂ 合成 ,并伴随着COX-2mRNA和蛋白质表达呈剂量依赖性减少。　结论　弓形虫侵染巨噬细胞过程可能通过钙信号转导途径调节COX-2底物AA的含量和PKC依赖的COX-2代谢途径调节PGE₂ 的合成。     

集束化护理在肝癌TACE术后患者疼痛管理中的应用效果

目的：研究集束化护理在肝癌患者经导管肝动脉化疗栓塞术（ TACE）术后疼痛管理中的应用效果。方法选取2012－10～2014－07间收入我院的肝癌TACE患者60例,将其随机分为观察组和对照组,每组各30例。对照组采用常规护理方式进行护理,观察组采用常规护理方式及集束化护理方法进行疼痛管理,并对两组的护理效果进行比较。结果与对照组相比,术后观察组的NRS（数字疼痛评分法）疼痛评分显著降低（P＜0.05）,生活质量显著提高（P＜0.05）。结论集束化护理可以有效缓解经导管肝动脉化疗栓塞术治疗的肝癌患者术后疼痛,提高其生活质量,值得临床推广应用。     

自动痔疮套扎联合外切术治疗重度混合痔的疗效比较

目的探讨自动痔疮套扎联合外切术用于治疗重度混合痔的可行性。方法212例混合痔患者随机分为传统组和改良组,分别行传统内扎外切术和自动痔疮套扎联合外切术,比较两组患者手术时间、术中出血量和平均住院时间;记录术后30d内并发症的发生率。结果改良组患者手术时间明显短于传统组（P〈0．01）,术中出血量明显少于传统组（P〈0．05）,住院时间明显短于传统组（P〈0．05）,改良组在肛门疼痛、切口水肿、尿潴留等并发症的发生率上明显低于传统组（P〈0．05）;改良组患者术后3d内VRS评分显著低于传统组（P〈0．01）。结论自动痔疮套扎联合外切术用于重度混合痔的治疗可大大节省手术时间和住院时间,同时痛苦轻微,较好地保留了直肠和肛门的正常结构和功能,适合在临床广泛开展。     

花生四烯酸及其代谢产物在寄生虫感染中的信使作用

花生四烯及其代谢产物可在细胞外作为第一信使产生细胞效应，亦作为新兴的第二信使在细胞内信息传递中有重要意义。在体内外参与多个病理生理过程，并且在寄生虫侵染宿主的过程中也发挥重要的作用。     

花生四烯酸及其代谢产物在寄生虫感染中的信使作用

花生四烯及其代谢产物可在细胞外作为第一信使产生细胞效应,亦作为新兴的第二信使在细胞内信息传递中有重要意义。在体内外参与多个病理生理过程,并且在寄生虫侵染宿主的过程中也发挥重要的作用。     

惊厥相关动物模型的研究进展

惊厥（seizures）是较为常见的一种小儿多发病,以2个月～6岁问最为多发,小儿惊厥的发病率很高,约5％～6％的小儿曾有过1次或多次惊厥。部分惊厥可演变为颞叶癫痫（temporal lobe epilepsy,TLE）,但其病因复杂,发病机制尚不清楚。因此,惊厥已成为近年来医学研究中的一个热点问题。实验研究中如何针对研究目的选择合适的动物模型显得十分重要。本文通过复习相关文献,对研究中如何选择及建立惊厥动物模型进行综述。     

野生型PTEN基因对胶质细胞瘤侵袭力的影响

目的观察转入野生型PTEN基因的胶质瘤细胞体外侵袭力改变,探索PTEN基因对胶质瘤细胞影响方式.方法构建野生型PTEN基因的pcDNA3.1 Hygro(-)真核质粒载体,并用于转染PTEN基因失活的U251细胞系,采用重组基底膜侵袭模型,观察转染前后细胞侵袭力的改变.结果转染PTEN基因可以明显抑制U251细胞的侵袭力.结论 PTEN基因可通过抑制胶质瘤细胞的侵袭力达到抑制肿瘤生长.     

弓形虫P24基因细胞内定位载体重组质粒的构建

目的　构建编码弓形虫 RH株 P2 4基因的细胞内定位载体并进行其序列测定。　方法　弓形虫 RH株腹腔接种小鼠 ,收集腹水 ,Trizol试剂盒抽提基因组 RNA;根据基因库 P2 4基因序列设计合成引物 ,采用 RT- PCR法扩增编码P2 4的基因片段 ,经低熔点琼脂糖法回收并纯化 ;将 P2 4基因定向克隆到细胞内定位载体 p CMV/ myc系列 :p CMV/myc/ cyto(胞质定位 )、p CMV/ myc/ nuc(核定位 )、p CMV/ myc/ mito(线粒体定位 )及 p CMV/ myc/ ER(内质网定位 )。转化大肠杆菌 TOP10感受态细胞 ,在氨苄青霉素阳性 L B培养基平板上筛选出阳性克隆。重组子经双酶切 ,PCR鉴定 ,最后对重组子进行序列测定。　结果　 RT- PCR方法从弓形虫 RH株扩增 5 72 bp的 P2 4基因片段 ,分别构建重组质粒p CMV/ myc/ cyto- P2 4、p CMV/ myc/ nuc- P2 4、p CMV/ myc/ mito- P2 4和 p CMV/ myc/ ER- P2 4 ,酶切和 PCR鉴定产物大小与预期值相符合 ,序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码 P2 4抗原的基因片段。　结论　成功构建编码弓形虫表面抗原 P2 4基因真核细胞内定位载体重组质粒 p CMV/ myc/ cyto- P2 4、p CMV/ myc/ nuc- P2 4、p CMV/ myc/ mito- P2 4和p CMV/ myc/ ER- P2 4