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1.
目的 通过规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统敲减人肝癌细胞系Hep12中电压依赖性钙离子通道 α2δ1的表达,观察α2δ1敲减后对肝癌细胞干性的影响。方法 设计3对靶向α2δ1的向导 (sgRNA),长度为20 bp,构建到lenti CRISPRv2-puro载体上,然后在体外检测sgRNA切割活性,利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒,将包装好的病毒感染Hep-12细胞,2 d后加入嘌呤霉素筛选。利用Western blotting验证α2δ1的敲减效果和干性相关基因的表达。通过成球实验检测其体外自我更新能力的变化。结果 测序结果显示,sgRNA成功插入载体质粒;体外切割实验显示,3条sgRNA均有切割活性;Western blotting结果显示,α2δ1基因的表达显著降低,干性相关基因B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1(BMI1)和Nanog的表达显著被抑制;无血清培养基成球实验结果表明,敲减α2δ1导致Hep-12细胞的体外自我更新能力减弱。结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建敲除α2δ1基因的Hep-12细胞系;敲除α2δ1基因后能抑制Hep-12细胞肿瘤干细胞样特性。 相似文献
2.
目的制备snail多克隆抗体,为深入研究其功能和探讨其与肿瘤等疾病的相关性提供工具。方法PCR扩增编码人snail 264个氨基酸的cDNA全长片段,DNA重组入原核表达质粒pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基-β—D-硫代半糖苷(IPTG)诱导表达GST/Snail融合蛋白。经电泳纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔,制备抗血清。通过ELISA、免疫荧光和免疫印迹法鉴定血清特异性和效价。结果成功构建了pGEX-4T-1/snail原核表达载体,转化BL21后可高效表达融合蛋白GST—snail,免疫产生的snail多抗可特异检测snail真核表达载体转染COS-7细胞后snail的表达及定位情况。结论获得了效价和特异性都良好的snail抗体,适合对snail的检测应用。 相似文献
3.
目的检测女性尿液中MMP-2、MMP-9及MMP-9/NGAL复合物的表达,探讨其在乳腺癌高危发病妇女普查筛选中的意义。方法采用明胶酶底物电泳法和Westernblot方法,检测正常女性(n=60)、乳腺良性疾病患者(n=41)、乳腺癌患者(n=127)尿液中MMP-2、MMP-9及MMP-9/NGAL复合物的表达情况。结果MMP-2、MMP-9、MMP-9/NGAL复合物的表达在正常女性尿液中分别为23.33%、15%和13.33%;在乳腺良性疾病患者尿液中分别为43.93%、39.02%和36.59%;在乳腺癌患者尿液中分别为64.56%、76.37%和70.08%。乳腺癌患者尿液中MMP-2、MMP-9和MMP-9/NGAL复合物的表达与正常女性间差异有统计学意义(P<0.001);与乳腺良性疾病患者比较差异也有统计学意义(P<0.01)。乳腺癌患者尿液中MMP-2+MMP-9+MMP-9/NGAL复合物同时表达,与乳腺良性疾病患者比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论1)乳腺癌、乳腺良性疾病和正常女性尿液中MMP-2、MMP-9、MMP-9/NGAL复合物均有表达。但正常女性很少表达MMP-2和MMP-9,极少表达MMP-9/NGAL复合物。2)乳腺癌患者尿液中MMP-2+MMP-9+MMP-9/NGAL复合物的同时表达,对乳腺癌的诊断具有重要意义。对乳腺癌高危发病妇女的普查筛选也具有指导意义。 相似文献
4.
目的:为控制臀部医源性分支杆菌感染。方法:集中收治臀部医源性分支杆菌感染25例,并分析该病的发病原因。结果:细菌培养为“龟分支杆菌脓肿亚型”细胞生长,它属于非结核分支杆菌,对一般抗痨药耐药,药敏试验;无高敏药物,仅对阿米卡星、罗红霉素中度敏感;对红霉素;妥布霉素低度敏感,经长期的联合用药,结合必要的外科治疗,使所有患者得以治愈出院。结论:通过对该病的认识,希望广大医学同仁引以为戒,严格无菌操作,规范医疗程序,防止类似事故发生。 相似文献
5.
目的观察血红素氧合酶-1(HO-1)与雷帕霉素对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的作用。方法原代大鼠VSMCs给予PDGF-BB诱导表型转化。同时给予不同剂量的血红素氧合酶诱导剂氯血红素诱导HO-1的表达,和雷帕霉素共培养24h。结果PDGF-BB20nmol/ml作用原代VSMCs24h后,SM-α-actin与PCNA表达减弱,PCNA表达增强。氯血红素诱导HO-1后可以抑制PDGF-BB诱导的VSMCs表型改变,并且随剂量的增加,抑制强度增加。较低剂量的雷帕霉素可以抑制PDGF诱导的VSMCs表型转化。结论PDGF-BB亚型可以促进原代培养的大鼠VSMCs由收缩表型向合成表型转化,给予氯血红素诱导HO-1表达可以对抗PDGF-BB诱导的大鼠VSMCs表型转化,并呈剂量相关。 相似文献
6.
胰腺癌是一种具有极高死亡率的恶性肿瘤,有氧糖酵解是胰腺癌的一个显著特征.缺氧微环境、低氧诱导因子(hypoxia-inducible factors,HIF)是胰腺癌有氧糖酵解发生的重要影响因素,KRAS、TP53、SMAD4等胰腺癌常见的基因突变通过一系列信号通路调控糖酵解酶的异常表达进而促进胰腺癌有氧糖酵解的发生,... 相似文献
7.
8.
目的:探讨人肺成纤维细胞、上皮细胞间以及与人肺癌细胞的细胞间隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)特性,以进一步了解GJIC在人肺癌发生、发展中的作用.方法:利用预标记荧光染料传输技术研究了人胚肺上皮类型细胞(HLEC)与人肺成纤维细胞HLF、肺癌PG细胞及其Cx43转染子PG/G4间的异源通讯,Cx43免疫荧光染色和Northern杂交分别检测Cx43蛋白和mRNA的表达.结果:尽管这些细胞除PG外都表达Cx43和具有强的同源通讯功能,但人肺上皮细胞HLEC与成纤维细胞间不能建立GJIC,上皮来源的人肺癌PG细胞与正常上皮细胞HLEC通讯功能缺陷;具有强的同源通讯功能的Cx43转染子PG/C4并未建立与上皮细胞间的通讯功能.结论:人肺不同类型细胞间的GJIC存在选择性,细胞癌变后丧失了与其来源一致的上皮细胞间的通讯,Cx43基因表达并不足以建立二种细胞间的GJIC. 相似文献
9.
目的探讨研究临床上通络汤在输卵管阻塞不孕症患者的应用的实际效果。方法本院自2010年2月—2012年7月间所收治的输卵管阻塞致使不孕症患者96例,并给与不同的治疗方式分组进行了治疗效果的对比研究。结果治疗组在痊愈率、总有效率等指标相比差异均有统计学意义(P<0.05),有效体现了治疗组较对照组的显著疗效优势,治疗组的总有效率达到了91.7%。结论自拟中药通络汤治疗输卵管性不孕症与腹腔镜手术有类似的疗效,且同时能够有效避免临床手术创伤,兼具安全、有效以及经济等显著优点,值得临床推广使用。 相似文献
10.