表观遗传、环境与疾病

1999年,Wolffe 和 Matzke[1]首次提出了当前广为认可的表观遗传定义,它包含三个要点：DNA 序列不变,表型改变,这种改变是可遗传的。经典遗传学信息提供了各种蛋白（包括表观遗传学修饰蛋白在内）、RNA 的结构信息,而表观遗传学信息则提供何时、何处合成何种蛋白及 RNA 的指令,从而严密地控制着蛋白及 RNA 的功能。表观遗传学赋予生物灵活而又强大的适应环境的能力,与人体的发育和疾病密不可分。     

CTCF是一种细胞类型特异性表达的核内定位蛋白因子

目的 探讨CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)在细胞核内的定位以及该基因表达水平的细胞类型特异性.方法 通过蛋白质印迹技术对乳腺癌细胞MCF-7的不同细胞组分中CTCF蛋白的含量进行了分析;应用蛋白质免疫荧光技术,通过共聚焦显微镜分析系统对CTCF在MCF-7单细胞中的定位进行了分析;然后通过蛋白质印迹技术和RT- qPCR技术分别对CTCF在正常外周血白细胞、MCF-7以及淋巴瘤细胞Jurkat和Ramos等不同类型细胞中的表达水平进行了分析.结果 蛋白质印迹和蛋白质免疫荧光技术的分析结果表明CTCF主要分布在细胞核内.蛋白质印迹和RT-qPCR技术的分析结果表明CTCF在这些不同细胞类型中的表达水平各不相同,与正常细胞相比较,CTCF在肿瘤细胞中的表达水平明显增高;在不同类型的肿瘤细胞中的表达水平也存在着很大的差异性.结论 CTCF是一种细胞核内特异定位的蛋白因子,CTCF的表达水平具有细胞类型特异性.     

应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体

目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a（＋）中的抗性基因序列;再利用同尾酶（isocaudarner）策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a（＋）中,并进行共表达鉴定。结果获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a（＋）;构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a（＋）,且两基因能够在同一载体上协同表达。结论成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a（＋）,并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。     

非霍奇金淋巴瘤的Rituximab治疗

Rituximab是用于治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)的单抗药物.Rituximab单独使用对B细胞NHL总有效率为40%～50%;和化疗药物联用有效率达90%以上.毒性作用轻微,是临床治疗B细胞NHL的安全有效的新药.现综述Rituximab用于治疗各种类型NHL的临床试验以及与其他药物联用的临床试验.     

非霍奇金淋巴瘤的Rituximab治疗

Rituximab是用于治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)的单抗药物。Rituximab单独使用对B细胞NHL总有效率为40％～50％；和化疗药物联用有效率达90％以上。毒性作用轻微，是临床治疗B细胞NHL的安全有效的新药。现综述Rituximab用于治疗各种类型NHL的临床试验以及与其他药物联用的临床试验。     

Rituximab的作用机理与抗药机理

Rituximab是一种有效的治疗非霍奇金淋巴瘤的单抗药物,它定向作用于CD20抗原,主要通过ADCC、CDC和直接效应杀伤肿瘤细胞.绝大多数肿瘤细胞都对ADCC有一定程度的敏感性,其强度决定于Fc段的种类与Fc受体的类型.CDC可能是Rituximab在体内杀伤肿瘤的最主要机制,不同肿瘤细胞对于CDC的敏感性大不相同,并与Rituximab的临床疗效相关.CDC的强度受补体调节蛋白影响.Rituximab的直接效应主要是诱导凋亡等.Rituximab还通过致敏肿瘤细胞协助增强传统细胞毒性药物的疗效.细胞因子对改善Rituximab的疗效也有一定作用.肿瘤细胞对Rituximab的耐受现象广泛存在.这与细胞类型、肿瘤细胞所处的部位以及之前接受的治疗等多种因素有关.对于Rituximab的作用机理与抗药机理仍需更多研究.     

肽核酸钳制PCR技术在结肠癌K-Ras基因突变检测中的优化

目的优化建立一种敏感、简便、稳定地检测结肠癌患者K-Ras基因突变的方法。方法构建K-Ras基因第二外显子12、13密码子的野生型及突变型质粒,通过优化PCR及肽核酸与特异性引物的浓度关系,达到有效模板浓度低的样品K-Ras基因突变的检测。结果成功构建K-Ras基因第二外显子12、13密码子的野生型和突变型质粒。肽核酸钳制PCR条件优化包括：（1） 最佳复性温度为58℃和60℃;（2） 有效模板浓度为10-6pg／μl;（3） 引物浓度与肽核酸浓度的最佳比例为20∶1。在K-Ras突变型质粒与野生型质粒浓度比为1∶100时即可检测到突变。结论肽核酸钳制PCR技术较传统的测序方法更为敏感,可以应用于有效模板浓度低的样品,为结肠癌个体化治疗前相关基因检测的有效方法。     

CLIP相关技术的研究进展

在真核生物基因表达的转录后调节中,RNA结合蛋白（ RBP）起着关键作用,很多RBP的异常与人类疾病的发生密切相关。自2000年的RNA免疫沉淀和芯片分析方法（ RNA immunoprecipitation with differential display or microarray analysis , RIP-ChIP）出现以来,人们开始就RBP与RNA相互作用进行了系统而广泛的研究。经过改良和发展,基于体内实时紫外交联免疫沉淀法（ ultraviolet crosslinking and immunoprecipitation , CLIP ）、交联免疫沉淀cDNA文库高通量测序法（ high-throughput sequencing of CLIP cDNA library , HITS-CLIP）、光催化核糖核苷增强交联和免疫沉淀法（ photoactivatable-ribonucleoside-enhanced crosslinking and immunprecipitation , PAR-CLIP）以及提高个别核苷酸分辨率交联和免疫共沉淀法（ individual nucleotide resolution CLIP , iCLIP）等RIP-ChIP衍生方法相继产生,使用这些方法,可以解析RBP的RNA识别特异性,而且通过与高通量测序技术结合,可以实现转录组尺度的RBP的靶序列的鉴定,分辨率也得到极大提高。该文就RNA与蛋白的相互作用的基本原理及其研究进展、相关技术存在的问题以及发展趋势进行简要综述。