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实验室细胞培养中,支原体污染是一个普遍存在的问题,据文献报道污染率高达90%’‘’。由于受污染的支原体可干扰细胞的DNA,RNA和蛋白质的合成,消耗培养液中的氨基酸,从而影响细胞的正常生长,严重者可导致细胞死亡,因此,清除污染的支原体,具有重要的意义。检测支原体的方法有多种,但基于本实验室条件,我们采用了培养法和DNA荧光染色法检测杂交瘤细胞株污染的支原体。由于要彻底清除污染的支原体相当困难,实际工作中应预防为主,一旦发现有支原体污染就应废弃。而对某些建株困难的重要细胞株,则须设法清除污染的支原体。目… 相似文献
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应用鼠-鼠杂交瘤技术,以CD33+转染细胞为免疫原制备出一株CD33单克隆抗体(单抗)命名为HIM3-4(IgG1).经第五届国际人类白细胞分化抗原会议进一步正式命名为CD33单抗.本文首次在国内报道,以基因转染细胞作为免疫原成功地制备针对其因表达产物的单抗. 相似文献
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脾脏内注射iASPP-SV真核表达质粒免疫Ba1b/c小鼠3d后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞(NSl)进行常规融合。应用原核表达的iASPP-SV全长及iASPP-SV片段His-tag融合蛋白进行间接酶联免疫吸附方法筛选阳性克隆,并对亚克隆后的阳性杂交瘤细胞株所制备的腹水进行了初步生物学特性鉴定。结果获得了6株可稳定分泌特异性抗人癌蛋白iASPP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并可以应用于Western Blot、免疫组织化学等实验。因此,本研究成功制备了抗人癌蛋白iASPP的单克隆抗体。 相似文献
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双特异性单克隆抗体(BsAb)是在单克隆抗体(mAb)基础上研制成的一种新型抗体,其特点是一个BsAb分子可同时识别两种不同的抗原决定簇。采用BsAb再导向效应细胞治疗肿瘤,是近年来较有希望的一种特异性免疫疗法〔1〕。另外,也可用于免疫学检测和基础研究,实用性强。BsAb的制备有杂交瘤细胞融合技术、化学交联法和基因工程技术。我们采用杂交瘤技术,成功地研制出2株分泌CD3/CD22BsAb的四源杂交瘤细胞,并对其进行了特异性鉴定及再导向生物学活性的测定。1材料和方法1.1材料杂交瘤细胞株HIT3a(CD3,IgG2a)和HIB… 相似文献
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为了降低鼠源抗人CD3单抗的免疫原性.增加其在人体内的生物活性及治疗作用,使该抗体能更广泛更有效地长期多次用于人体治疗肿瘤、器官移植排斥反应及自身免疫性疾病。本文采用PCR技术从分泌抗CD3单抗的杂交瘤细胞HIT3a的mRNA中分离克隆了抗体的轻重链可变区基因的cDNA。以此轻重链可变区cDNA为特异探针从HIT3a基因文库中分离带有调控序列的功能性轻重链可变区基因,并将其插入到含有人k轻链及人71重链恒定区基因的哺乳动物表达载体中成功地构建了抗人CD3人/鼠轻重链嵌合抗体基因,为研制人抗CD3入/鼠嵌合抗体完成了关键性的第一步。 相似文献
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采用B细胞杂交瘤技术,将T细胞系CEM免疫的,BALA/c小鼠脾细胞与小鼠NS1骨髓瘤细胞融合,以间接免疫荧光法筛选,获得一株CD38单抗,命名为HI157。 经琼脂双向免疫扩散方法测定,HI157单抗的Ig亚类为IgG2a。组织分布结果表明,HI157主要分布于胎儿胸腺细胞、脐血单个核细胞和激活的T、B细胞表面。与胎儿 相似文献