补阳还五汤通过miR-148a-3p抑制大鼠星形胶质细胞凋亡而减轻脑缺血再灌注损伤

目的：探究补阳还五汤是否通过激活微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)靶向调控胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）而抑制大鼠氧糖剥夺/复氧复糖（OGD/R）星形胶质细胞凋亡。方法：取对数生长期的大鼠星形胶质细胞系CTX TNA2,随机分为5组：空白对照组（CON组）、模型组（OGD/R组）、补阳还五汤含药血清（BYHWDS）组、miR-148a-3p抑制物组（inhibitor组）和BYHWDS+inhibitor组,每组每种检测重复3次。除CON组外,其余各组氧糖剥夺6 h后复氧复糖24 h,并于复氧复糖的同时给予相应药物处理（但转染于造模前操作）。采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;MTS法检测各组细胞活力变化;qRT-PCR检测miR-148a-3p、GFAP mRNA和caspase-3 mRNA的表达水平;Western blot检测GFAP、Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9和cleaved caspase-9蛋白水平;annexin V-FITC/PI染色检测CTX TNA2细胞的凋亡情况;免疫荧光双...     

补阳还五汤通过AMPK/mTOR/ULK1信号通路调控自噬减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的探讨补阳还五汤抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路机制。方法用改良线栓法建造大鼠左侧脑缺血模型,各组大鼠每24 h给药1次,共3次。再灌注72 h后观察大鼠神经损伤情况和脑梗死体积改变;尼氏染色法和TUNEL染色法观察神经细胞形态、数量以及凋亡情况;Western blot检测自噬蛋白和AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路相关蛋白表达情况。结果补阳还五汤改善大鼠神经功能缺陷,减少脑梗死体积和神经细胞凋亡,减轻脑组织病理损伤;抑制AMPK磷酸化活化,解除AMPK对下游mTOR和ULK1的抑制,促进二者磷酸化激活,抑制细胞自噬。AMPK激动剂Metformin提高细胞自噬水平,同时逆转了补阳还五汤抗大鼠脑缺血/再灌注损伤作用。结论补阳还五汤介导AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路对脑缺血/再灌注损伤大鼠发挥神经保护作用。     

补阳还五汤对脊髓损伤大鼠脊髓组织 Caspase －3表达的影响

目的：观察补阳还五汤对脊髓损伤（SCI）后大鼠脊髓神经细胞凋亡相关蛋白 Caspase －3及 mRNA表达的影响,初步探讨补阳还五汤抑制脊髓神经细胞凋亡的作用机制。方法Wistar 大鼠40只,随机分为正常对照组、SCI 模型组、补阳还五汤组和阳性药物对照（MP）组,每组10只。各组分别于建立 SCI 模型后1、7、14、21、28 d 观察大鼠后肢运动功能恢复情况并进行 BBB 功能评分,观察大鼠 SCI 模型建立及恢复情况,并于第28天处死各组大鼠,采用 real －time PCR 法检测脊髓组织 Caspase －3 mRNA 的表达情况,Western blot 法检测脊髓组织 Caspase－3蛋白的表达情况。结果大鼠麻醉清醒后,SCI 模型组大鼠损伤平面以下完全瘫痪。 BBB 评分结果显示：术后第1～28天,与正常对照组比较,SCI 模型组 BBB 评分明显降低（P ＜0．05）;术后第7～28天,与 SCI 模型组比较,补阳还五汤组和 MP 组大鼠 BBB 评分明显增高（P ＜0．05）;补阳还五汤组和 MP 组大鼠 BBB 评分差异无统计学意义。 Real －time PCR 和 Western blot 结果显示：与正常对照组比较,SCI 模型组 Caspase －3蛋白及 mRNA 表达明显升高（P ＜0．05）;与 SCI 模型组比较,补阳还五汤组和 MP 组大鼠脊髓组织 Caspase －3蛋白及 mRNA 表达明显降低（P ＜0．05）。补阳还五汤组和 MP 组大鼠脊髓 Caspase －3蛋白及 mRNA 表达差异无统计学意义。结论补阳还五汤可改善 SCI 大鼠后肢运动功能,通过下调 Caspase －3的表达,从而抑制 SCI 大鼠脊髓神经细胞的凋亡,对脊髓神经细胞有保护作用。     

黄芪黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的保护作用

目的:研究黄芪黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的作用。方法:取对数期PC12细胞,随机分为5组:正常组、模型组(氧糖剥夺/复氧复糖组)、黄芪黄酮低(0.001 mg/mL)、中(0.01 mg/mL)、高(0.1 mg/mL)剂量组。其中,模型组和黄芪黄酮低、中、高剂量组氧糖剥夺2 h后复氧复糖24 h,黄芪黄酮低、中、高剂量组在复氧复糖的同时予以黄芪黄酮不同剂量处理。用倒置相差显微镜观察PC12细胞的形态变化,MTT法和CCK-8法检测细胞的存活率。结果:正常组细胞状态良好,贴壁生长,细胞突起明显,各个突起之间交织在一起,细胞整体折光性较强,细胞表面光滑;与正常组相比,模型组部分细胞漂浮,突起收缩,细胞折光性差,细胞存活率明显降低(P0.05);与模型组相比,黄芪黄酮低、中、高剂量组细胞状态均有明显好转,突起可见,细胞存活率均有升高(P0.05);与黄芪黄酮低剂量组相比,黄芪黄酮中、高剂量组细胞状态较好,细胞存活率升高(P0.05);黄芪黄酮中剂量组与高剂量组之间差异不明显(P0.05)。结论:黄芪黄酮可改善氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的生长状态,减轻细胞损伤,提高细胞存活率,发挥保护作用,且黄芪黄酮中、高剂量组的保护作用优于低剂量组。     

Notch信号通路对脑缺血大鼠神经干细胞移植后神经再生的影响

目的 探讨抑制Notch信号通路促进脑缺血大鼠神经干细胞（NSCs）移植后神经再生的机制。方法 采用大脑中动脉阻塞MCAO）方法构建局灶性脑缺血模型,体外培养NSCs,移植入纹状体缺血区。将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、移植组（移植神经干细胞）、氮-［氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰］-S-苯基甘氨酸丁酯］（DAPT）+移植组。采用HE染色观察各组大鼠神经元损伤程度,利用免疫组织化学、Western blotting检测各组大鼠脑组织中Notch1、Hes1及Hes5的表达情况。结果 与假手术组相比,模型组神经元损伤严重,出现核固缩和核溶解,Notch1、Hes1及Hes5阳性细胞表达明显增多,Notch1、Hes1及Hes5蛋白表达显著上调（P＜0.05）。与模型组相比,移植组和DAPT+移植组神经元损伤均不同程度缓解,Notch1、Hes1及Hes5阳性细胞均有部分表达,各项蛋白表达均有所降低（P＜0.05）;DAPT+移植组神经元损伤明显恢复,较移植组各项蛋白阳性细胞和蛋白表达进一步降低(P＜0.05)。结论 抑制Notch信号通路可促进脑缺血大鼠神经干细胞移植后的神经再生,其机制主要与下调Notch1、Hes1及Hes5的表达有关。     

bcl-2、bax、caspase-3在细胞凋亡中的作用及其关系

细胞凋亡是细胞在一定的生理或病理条件下,受多种基因精确调控的主动的、程序化的死亡过程,是机体重要的自稳调节机制[1].近年来通过大量实验研究表明,线粒体通路在细胞存亡机制中起着至关重要的作用,而在众多的凋亡调控基因中,bcl-2蛋白家族和胱天蛋白酶(caspase)家族目前最受关注,其中bcl-2基因和bax基因是目前已知的在凋亡调控过程中功能相互对立的一对最重要的调控基因,caspase-3是凋亡过程中最关键的凋亡执行蛋白酶,三者在细胞凋亡过程中的关系已成为凋亡研究中的热点问题,本文将就此做一综述.     

Caspase-3和JNK与脑缺血再灌注后细胞凋亡的关系

缺血性脑血管病是目前神经内科最常见的一种疾病,占全部脑血管疾病的43％～65％,严重威胁人类生命健康,其致残率非常高.对这种疾病的治疗一般是以疏通堵塞的血管改善病变部位的血液供应为主,而当缺血部位的血液供应好转以后就容易发生更加严重的再灌注损伤,其中细胞凋亡发挥着重要的作用.再灌注损伤的发生机制非常的复杂.现就Caspase-3和JNK与脑缺血再灌注后细胞凋亡关系综述如下.     

新形势下高层次中医学人才培养模式思索

当前人才队伍建设滞后的问题已成为制约深化医改的重要因素,通过了解学生思想动态,完善研究生阶段的教学机制,以培养符合岗位胜任力目标、具有中医思维的合格中医人才.根据276名研究生的调研结果,结合医教协同发展的时代背景,提出统一研究生复试入口、优化中医住院医师规范化培训方案、修订中医学术学位研究生培养方案等方面建议,探索构...