新型冠状病毒RBD区重组流感病毒的拯救及初步鉴定北大核心CSCD

目的利用流感反向遗传技术,以B型流感病毒B/Yamagata/16/88株作为骨架,表达新型冠状病毒(SARSCoV-2)S蛋白的受体结合域(RBD),构建以B型流感病毒为载体的新型冠状病毒疫苗候选株。方法基因合成新冠病毒参考株S蛋白上的RBD基因片段(318-541aa),对B型流感病毒B/Yamagata/16/88/的NS1片段进行设计改造并插入RBD序列,构建重组质粒NS110-RBD。将NS110-RBD与其余7个骨架株重组质粒共转染293T细胞和MDCK细胞,拯救表达新型冠状病毒RBD区重组流感病毒,对拯救出的毒株进行形态学、分子生物学鉴定及病毒滴度和Western blot检测。结果成功拯救出重组流感病毒株并命名为rIBV-NS110-RBD。PCR鉴定RBD目的基因大小正确,测序表明拯救病毒株的序列正确,在透射电镜下观察到拯救病毒株的病毒粒子具有流感病毒粒子的典型特征。经测定,拯救株rIBV-NS110-RBD在MDCK细胞上的病毒滴度为10^(5.5) TCID_(50)/ml,在鸡胚上的病毒滴度为10^(6.5) EID_(50)/ml,血凝效价最高达2_(5);Western Blot检测到RBD的表达,其分子质量为35ku。结论成功拯救出高表达新型冠状病毒RBD蛋白的高血凝效价的重组流感病毒株,该病毒具有流感病毒粒子的典型特征,为以B型流感病毒为载体作为新型冠状病毒疫苗的研发提供了新思路。     

雷公藤多苷对慢性肾脏病大鼠血管内皮损伤的保护作用及其机制

目的:探讨雷公藤多苷(GTW)对慢性肾脏病(CKD)大鼠血管内皮损伤的保护作用,并阐明其作用机制.方法:将60只大鼠随机分为对照组、模型组和低、中及高剂量GTW组,每组12只.采用腺嘌呤诱导CKD大鼠模型.低、中和高剂量GTW组大鼠分别灌胃给予3.0、6.0和9.0 mg·kg-1 GTW,对照组和模型组大鼠给予等体积...     

扶正除疫颗粒抗甲型H1N1流感病毒感染作用评价

目的 评价扶正除疫颗粒抗甲型H1N1流感病毒感染的效果。方法 将112只小鼠随机分为正常对照组、病毒模型组、达菲对照组、扶正除疫组,每组28只。正常对照组和病毒模型组以生理盐水灌胃,每次0.4 ml/只;达菲对照组以达菲水溶液0.025 g/(kg·d)灌胃,扶正除疫组以扶正除疫颗粒水溶液12 g/(kg·d)灌胃,均每日1次,共连续灌胃7天。给药第3天,除正常对照组外其余3组以H1N1亚型季节性流感病毒鼠肺适应株FM1-6-E2滴鼻造模,攻毒剂量为5LD50,50μl/只,造模后1h各组继续给药。从攻毒后感染之日起,每组取10只,连续观察14天,观察小鼠死亡情况;各组余18只于攻毒后3天、6天、9天计算肺指数,检测病毒滴度,观察肺组织病理变化。结果 病毒模型组10只小鼠全部死亡;达菲对照组和扶正除疫组死亡率均为0。攻毒后第9天,达菲对照组、扶正除疫组与病毒模型组比较,肺指数明显降低(P<0.05或P<0.01);攻毒后第3天、6天,达菲对照组、扶正除疫组与病毒模型组比较,肺组织病毒滴定度明显降低(P<0.05或P<0.01)。达菲对照组与扶正除疫组小鼠肺脏病理变化较为轻微,炎症反应程度明显弱于病毒模型组。结论 扶正除疫颗粒对小鼠感染甲型H1N1流感病毒后具有死亡保护作用,对流感病毒在宿主体内复制有抑制作用。     

调强放疗联合同期亚叶酸钙方案对食管鳞癌IGF-1、血管内皮生长因子的影响

目的分析调强放疗联合同期亚叶酸钙（CF）方案对食管鳞癌胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子水平变化及预后的影响。方法选取2015年1月~2018年1月我院肿瘤科收治的110例食管鳞癌患者,随机分为放疗组（采用调强放疗进行治疗）与放化疗组（采用调强放疗联合同期CF方案化疗进行治疗）,55例/组,比较两组患者治疗后近期疗效、血清肿瘤标记物、毒副反应以及生存情况的变化情况。结果放化疗组治疗后近期疗效和放疗组差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗后胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子、鳞状细胞癌抗原、癌胚抗原水平明显降低(P < 0.05),放化疗组低于放疗组(P < 0.05);两组毒副反应发生率差异无统计学意义(P>0.05);放化疗组2年、3年生存率明显高于放疗组(P < 0.05),两组中位无进展生存时间、总生存时间差异均有统计学意义(P < 0.05)。结论调强放疗联合同期CF方案化疗治疗食管鳞癌患者近期疗效较好,可降低血清肿瘤标记物水平,不增加毒副反应发生,提高患者生存率,延长患者生存时间。     

狂犬病病毒弱毒疫苗株反向遗传操作系统的建立

目的构建狂犬病病毒弱毒疫苗株SRV9全长cDNA感染性克隆,并建立其反向遗传操作系统。方法通过DNAStar对狂犬病病毒SRV9株全长基因组序列进行分析,利用单一的酶切位点,将SRV9全长cDNA分为4段,根据每段重叠区域的酶切位点拼接全长,分别连入pCI和pCDNA3.1(+)载体,并通过PCR方法分别在全长序列的3′端和5′端引入核酶HamRZ和HdvRZ序列,构建全长真核表达质粒pCI-SRV9和pD-SRV9。同时构建能表达狂犬病病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)、糖蛋白(G)和聚合酶蛋白(L)的4个辅助质粒。分别将pCI-SRV9或pD-SRV9与辅助质粒通过脂质体共转染BSR细胞,拯救重组病毒。结果两种质粒表达系统均可拯救到有感染活性的病毒粒子,但pD-SRV9表达质粒的拯救效率(8/8)较pCI-SRV9表达质粒拯救效率3/30高;重组病毒与母本野生病毒的体外生长动力学曲线相一致,相同培养时间的病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了狂犬病病毒弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,为进一步研究狂犬病病毒致病机理、筛选新型狂犬病疫苗或开发基于狂犬病病毒载体的其他疾病疫苗奠定了基础。     

SARS-CoV-2细菌样颗粒对小鼠的免疫原性及攻毒保护效果评价

目的 本研究以C57BL/6N小鼠为模型,评价SARS-CoV-2细菌样颗粒(Bacterium-Like Particles, BLPs)的免疫原性和攻毒保护效果,为新型冠状病毒感染(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)疫苗研发提供新思路。方法 使用SARS-CoV-2细菌样颗粒Trim-RBD-GEM分别在第0、21 d滴鼻免疫C57BL/6N小鼠,在第7、14、21、28、35 d采小鼠血,分离血清,采用ELISA检测特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。在免疫后第35 d使用50 LD₅₀的C57MA14毒株对C57BL/6N小鼠进行攻毒,记录攻毒后14 d内小鼠体重变化及存活情况;在攻毒后第3 d取小鼠的鼻甲骨和肺脏组织,测定鼻甲骨和肺脏组织中的病毒滴度和病毒载量。另取肺脏组织,使用4%多聚甲醛固定后制作病理切片并染色,观察肺脏组织病理变化,免疫组化法检测病毒蛋白的表达。结果 Trim-RBD-GEM滴鼻免疫小鼠后诱导产生特异性抗体,IgG、IgG1和IgG2a抗体水平均显著升高。从攻毒后第1 d开始Trim-RB...     

氨磷汀减轻头颈部恶性肿瘤放疗损伤的临床观察

目的探讨氨磷汀联合三维适形放疗对头颈部恶性肿瘤放疗损伤的影响。方法 216例头颈部恶性肿瘤患者随机分为治疗组和对照组。每组108例,行三维适形放疗治疗,总剂量50～72Gy分28～40次5.6～8周完成。治疗组放射治疗前静脉点滴氨磷汀注射剂。结果治疗组有效率为75.0%,对照组有效率为58.3%,两组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组患者的生活质量评分提高率明显高于对照组,两组差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组黏膜炎、口干、吞咽困难、血液系统毒性、神经系统毒性发生率均明显低于对照组,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论氨磷汀可减轻头颈部恶性肿瘤放疗损伤,提高患者生存质量,并不影响临床疗效。     

乳晕皮肤菱形切除乳晕缩小术

目的:寻求一种乳晕缩小术的新方法。方法:自2007年6月～2011年6月应用乳晕皮肤菱形切除行乳晕缩小术。女性35例,年龄19～33岁,平均26.7岁,乳晕单纯性增大,不伴有巨乳症或重度乳房下垂。在乳晕内设计3～4个菱形切口,切除切口内乳晕皮肤后,在整个乳晕区皮下做潜行分离,将菱形皮肤切口行"十"形缝合,以缩小乳晕。结果:临床应用于35例乳晕单纯性增大的患者,术后随访6～12个月,效果满意,无明显瘢痕,无并发症发生。结论:本方法对于单纯性乳晕增大的治疗是一种理想的、简单易行的手术方法,术后效果满意,可以达到"无痕"的效果。     

儿茶粉治疗小儿泄泻效良

1药物组成儿茶50g。2制用方法上药研细未装成各用。根据患儿体重，按350mg～400mg／kg·日，重者可增至500mg？kg·日，分3次～4次温开水运服。脱水严重者可配合口服补兰液或静脉补液，一般治疗3天。3治疗结果临床以排便次数、粪便社状正常，排便无不适感为治愈；排便次数较治疗前减少，粪便性状转调为好转；治疗前后无明显变化为无效。结果：共治168例，治愈145例，好转20例，无效3例。治愈率为86．3％。总有效率为98．2％。疗程3天。儿茶粉治疗小儿泄泻效良@高科学$山东省蒙阴县孟良崮医院!276225@高玉伟$山东省蒙阴县人民医院泄泻／中医…     

禽流感病毒免疫血清对实验感染小鼠的紧急预防效果研究

目的 评价H5N1亚型禽流感病毒免疫血清对实验感染小鼠的紧急预防保护效果.方法 给30只小鼠腹腔注射0.2 ml/只禽流感病毒免疫血清,注射后1～19 d内每天采3只小鼠血清测定血凝抑制(HI)抗体效价,测定免疫血清在小鼠体内的消长规律;给10只小鼠腹腔注射1.5 ml/只禽流感病毒免疫血清,检测免疫血清对小鼠的安全性;将70只小鼠按数字表法随机分为7组,分别为正常对照组、病毒对照组以及免疫血清高剂量早期组、高剂量中期组、高剂量晚期组、中剂量组、低剂量组.每组10只,分别在攻毒前8 d,4 d和1 d时腹腔注射血清0.2 ml/只、0.1 ml/只、0.05 ml/只禽流感病毒免疫血清,然后给小鼠滴鼻感染10个半数致死量(LD50)病毒,攻毒后连续观察14 d,计算小鼠存活率和平均存活天数,比较各实验组小鼠肺指数及肺脏病毒感染滴度.结果注射0.2 ml免疫血清小鼠HI抗体效价在1～15 d时为26,在17 d以后开始下降;1.5 ml免疫血清注射小鼠全部存活,没有发病;在攻毒前8 d、4 d和1 d时给小鼠腹腔注射0.2 ml免疫血清,小鼠存活率分别为80%、100%和100%,平均存活天数分别为13.1 d、14.0 d和14.0 d,在攻毒前1 d给小鼠腹腔注射0.1 ml和0.05 ml免疫血清,小鼠存活率分别为100%和50%,平均存活天数分别为14.0 d和11.7 d,各实验组小鼠肺指数(O.0096±0.0033～0.0145±0.0060)均小于病毒对照组(0.0199±0.0025),除低剂量组外,均具有统计学意义(P值0.0022～0.0470,＜0.05),各实验组小鼠肺脏病毒滴度(TCID50)较病毒对照组平均低2个滴度.结论禽流感病毒免疫血清对实验感染小鼠具有较好的紧急预防保护效果,可作为人禽流感紧急预防制剂加以研究开发.