氨甲酰磷酸合成酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的:制备抗人氨甲酰磷酸合成酶(CPSI)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定与应用.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备 mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化及免疫荧光染色的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原,借助免疫捕获的方法用抗体来分离复合物.结果:获得3株可稳定分泌抗人CPSI mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgGl(K),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化、免疫荧光染色、免疫沉淀实验和复合物的分离.结论:成功制备了抗人CPSI的mAb,为CPSI的研究提供了有力的工具.     

双黄升白冲剂对化疗引起骨髓抑制的临床研究及小鼠骨髓超微结构的观察

目的：观察中药双黄升白冲剂对肿瘤化疗患者的升白疗效及对小鼠骨髓造血微环境的作用。方法：选择主要为复治的非小细胞肺癌及乳腺癌、胃癌、肠癌患者，随机分为4组。治疗1组（28例）为化疗同时服用双黄升白冲剂；治疗2组（27例）为WBC＜4×10^9/L始用双黄升白冲剂；对照1组（３３例）为化疗同时服用茜Ｚhuo双酯，对照２组（２４例）为ＷＢＣ＜４×１０^９／Ｌ始用茜Ｚhuo双酯，并做实验研究电镜观察小鼠骨髓超微结构。结果：升白疗效总有效率治疗１组为７５.００％，治疗２组为８８.８９％；对照１组为５４.５５％，对照２组为５８.３３％，治疗组与对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０.０１）。双黄升白冲剂对小鼠骨髓有良好的保护、改善造血微环境的作用。结论：中药双黄升白冲剂对化疗后骨同须受抑制肿瘤患者具有明显的保护和治疗作用。     

烯脂酰辅酶A水解酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备小鼠抗人烯脂酰辅酶A水解酶(enoyl CoA hydratase,ECHS1)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA、Western blot、免疫沉淀、免疫组化和间接免疫荧光等方法对mAb进行特异性鉴定,通过Uni-ZAP XR正常成人肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原.结果:获得1株可稳定分泌抗人ECHS1 mAb 的杂交瘤细胞株BGB095.该mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),可用于ELISA检测、Western blot、免疫沉淀、免疫组化等实验.结论:成功制备了抗人ECHS1的mAb,为代谢疾病和肿瘤的研究提供了有力的工具.     

Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌术后胸壁复发25例

目的探讨乳腺癌术后胸壁复发的原因,寻找降低乳腺癌术后胸壁复发的有效措施。方法对25例乳腺癌（Ⅰ、Ⅱ期）术后胸壁复发的患者进行回顾性分析。结果Ⅰ、Ⅱ期的复发者分别占总复发人数的32％和68％,T1、T2的复发者分别占32％和68％,Her-2表达阳性与Her-2表达阴性的复发者分别占71％和29％,术后接受放疗的患者胸壁复发者为24％,低于未接受放疗者。结论原发灶大、分期晚以及Her-2过表达,可能是乳腺癌术后胸壁复发的主要原因。术后放射治疗可能是预防和治疗胸壁复发的有效措施。     

二羰基／L-木酮糖还原酶单克隆抗体的鉴定与应用

目的：抗人二羰基／L-木酮糖还原酶（dicarbonyl／L-xylulose reductase,DCXR）的单克隆抗体（mAb）的初步鉴定与应用。方法：通过免疫荧光染色法对DCXRmAb进行亚细胞定位,通过免疫沉淀法对DCXRmAb进行初步应用研究。结果：DCXRmAb定位于肝脏的线粒体,通过免疫沉淀法该mAb可以从线粒体总蛋白中去除相应的蛋白DCXR。结论：成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具。     

抗二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(Dicarbon-yl/L-xylulosereductase,DCXR)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Westernblot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果获得1株可稳定分泌抗人DCXRmAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Westernblot、免疫组化和免疫沉淀实验。结论成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具。     

线粒体蛋白质组学研究进展

0 引言 线粒体拥有自己的DNA(mtDNA),可以进行转录、翻译和蛋白质合成. 根据人类的基因图谱,估计大约有1000～2000种线粒体蛋白,大约有600多种已经被鉴定出来. 线粒体蛋白质只有2%是线粒体自己合成的,98%的线粒体蛋白质是由细胞核编码、细胞质核糖体合成后运往线粒体的,线粒体是真核细胞非常重要的细胞器,在细胞的整个生命活动中起着非常关键的作用. 线粒体的蛋白质参与机体许多生理、病理过程,如ATP的合成、脂肪酸代谢、三羧酸循环、电子传递和氧化磷酸化过程. 线粒体蛋白质结构与功能的改变与人类许多疾病相关,如退行性疾病、心脏病、衰老和癌症.     

抗尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2单克隆抗体的制备与鉴定

本研究制备抗人尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2（UDP-glucose pyrophosphorylase2）的单克隆抗体（mAb）并进行初步鉴定。将正常成人肝组织匀浆离心并分离肝脏胞浆总蛋白,用肝脏胞浆总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,通过间接ELISA法、Western blot及免疫组织化学的方法对单克隆抗体进行特性鉴定,通过Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗体特异性。结果表明：通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人UGP2mAb的杂交瘤细胞系BAD062,其分泌的单克隆抗体的Ig亚类（型）为IgG2b（κ）,Western blot结果显示该抗体可以特异地识别分子量为56kD的蛋白;应用单克隆抗体BAD062对人肝脏cDNA表达文库（Uni-ZAPXR）进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为UGP2。结论：单克隆抗体BAD062特异地识别抗原UGP2,该抗体可用于ELISA检测、Western blot、免疫组织化学实验,为UGP2的研究提供了有力的工具。     

抗丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2,PDC-E2)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法 将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原.结果 获得1株可稳定分泌抗人PDC-E2 mAb 的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ), 该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验.结论 成功制备了抗人PDC-E2的mAb,为PDC-E2的研究提供了有力的工具.