生理学科实验教学体系改革的实践

教育的核心是素质教育．动手能力的培养和创新意识的培养是素质教育的重要组成部分。高等学校的实验教学功能就是培养学生的科学世界观、动手能力和创新意识。近年来,我们以素质教育为核心,创新能力培养为目标．对生理学科实验教学体系进行了改革。     

卡介苗对致敏后重复抗原攻击的大鼠肺组织环核苷酸磷酸二酯酶活性的影响

环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)是一类催化水解细胞中的第二信使环核苷酸(cAMP和cGMP),使其生物学活性的关键酶,是cAMP和cGMP水解的唯一途径[1].大鼠哮喘发病过程中肺组织PDE活性升高[2].关于PDE活性改变的具体机制目前尚未完全明了.有实验表明PDE活性的改变与IL-4的调节作用有一定关系[3].另有研究表明,卡介苗(BCG)给药可刺激IFN-γ产生,抑制IL-4等细胞因子的产生,减弱炎症的发展[4,5].本实验旨在探明卡介苗给药对大鼠哮喘发病过程中肺组织PDE活性的影响及可能途径.     

侧脑室注射组胺对大鼠哮喘样反应可能有调节作用

目的观察组胺侧脑室注射对抗原攻击致敏大鼠引起的支气管收缩反应及气道炎症的影响。方法致敏大鼠侧脑室注射组胺后测定抗原激发前后的气道阻力和肺动态顺应性。计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和分类计数。病理切片观察肺组织炎症细胞浸润情况。结果组胺(0.1μg.只-1)侧脑室注射明显抑制抗原攻击致敏大鼠所致的气道阻力升高和肺动态顺应性的降低,也明显降低BALF内的白细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的数量(P<0.01,P<0.01),减少气道粘膜下和血管周围的嗜酸性粒细胞浸润。结论组胺侧脑室注射能抑制大鼠支气管收缩反应及气道炎症,提示中枢组胺水平升高可能对大鼠哮喘样反应有调节作用。     

大鼠角叉菜胶胸膜炎渗出白细胞磷脂酶D活性的变化

目的　观察在整体炎症过程中炎症白细胞磷脂酶D(PLD)活性的变化和炎症的关系。方法　采用大鼠角叉菜胶胸膜炎模型 ,以渗出液量和细胞数及渗出液中髓过氧化物酶活性 (中性粒细胞脱颗粒指标 )作为炎症程度。用酶偶联比色法测定白细胞PLD活性。结果　正常大鼠外周血白细胞PLD活性极低 ,为 ( 0 14± 0 0 3) μmol·g-1·min-1。致炎后各时间点胸膜腔渗出白细胞的PLD活性明显升高 ,分别可达 40～ 6 0倍 ,并在 3h达峰值 ,明显早于炎症高峰 ( 12h)。不同剂量 ( 5 0 0 μg和 10 0 0 μg)角叉菜胶可引起致炎 12h明显不同程度的炎症 ,但渗出白细胞PLD活性两者差别不大。低剂量吲哚美辛 ( 2mg·kg-1,ip)和地塞米松 ( 0 1mg·kg-1,ip)均明显抑制致炎 6h大鼠胸膜腔的渗出 ,但渗出白细胞PLD活性与对照组相比差别无显著性。结论　大鼠角叉菜胶性胸膜炎白细胞PLD活性显著升高 ,提示PLD活性升高在该炎症模型中是原发性表现 ,低剂量吲哚美辛和地塞米松的抗炎机制与PLD无关     

TGF-β_1诱导肺切片纤维化模型的建立

目的建立转化生长因子β1(transforming growth fac-tor-β1,TGF-β1)诱导肺切片纤维化模型,为肺纤维化病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法0·4%的琼脂糖充盈肺组织,切片,于肺切片培养的1、3、5、7、9d以LDH漏出值和MTT比色法观察肺切片存活情况。以羟脯氨酸(HYP)为指标从时效和量效两个方面确定TGF-β1诱导肺切片纤维化的亚适时间点和亚适剂量。肺组织进行HE和Masson染色以确定肺纤维化是否形成。结果在本实验条件下,培养的肺切片可存活9d。通过HYP和组织学检查确定TGF-β1诱导肺切片纤维化的亚适时间点和亚适剂量分别为7d和2·5μg·L-1。另外,氢化可的松对TGF-β1诱导肺切片纤维化无明显影响。结论TGF-β1(2·5μg·L-1,×7d)可诱导肺切片纤维化,氢化可的松对此无明显影响。     

BIO-1211对大鼠支气管收缩和白细胞黏附反应的抑制作用

目的：研究迟缓抗原-4（very late antigen-4，VLA-4）拮抗剂BIO-1211对大鼠支气管收缩和白细胞黏附反应的影响。方法：卵白蛋白致敏大鼠，抗原攻击诱发大鼠支气管收缩反应，采用整体肺功能测定法测定肺阻力（Rt，）和动态肺顺应性（Cdyn）。分离大鼠中性粒细胞，用纤维黏连蛋白（Fn）或血清诱导中性粒细胞产生黏附反应。用组胺和乙酰胆碱诱导豚鼠哮喘反应。结果：给大鼠气雾吸入BIO-1211（1、3、10mg／ml）呈剂量依赖抑制致敏大鼠抗原攻击引起RL的升高和Cdyn降低；BIO-1211（25、50、100、200μg／ml）明显抑制纤维黏连蛋白（Fn）和血清诱导的中性粒细胞黏附反应，其抑制率分别为23．5％、24．6%、61．4％、58．1％和29．99／6、35．9％、35．3％、15．49／6；但BIO-1211（10mg／ml）给豚鼠气雾吸入不能抑制乙酰胆碱和组胺诱导的药物性哮喘。结论：BIO-1211预防致敏大鼠抗原攻击引起的支气管收缩反应，可能与其抑制炎症细胞进入肺组织有关，而对炎症介质无拮抗作用。     

ICR小鼠吸烟诱导肺部炎症模型的建立及其特征

目的：观察ICR小鼠对急性吸烟暴露的敏感性，建立ICR小鼠急性吸烟引起肺损伤的模型。方击：小鼠每天被动吸烟3次，一次暴露两支，持续20min，分别急性吸烟0d、1d、3d、7d，观察小鼠肺组织的支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞计数及分类计数、肺组织干湿重比，肺组织病理切片炎症情况、肺组织TNF—α含量、MMP-12含量，MPO活性，评价该品系小鼠对吸烟的耐受性与敏感性和适宜的暴露时间。结果：随着吸烟天数的增加，肺干湿重比、白细胞计数、MPO、MMP-12均呈时间依赖性上升（P〈0．01），以3d为最高。TNF—α吸烟1d即明显升高，吸烟7d时仍持续高水平。结论：ICR小鼠急性吸烟3d为急性炎症的高峰，之后迁延进入慢性炎症，本品系对于吸烟暴露的耐受性与敏感性均较佳，为急性吸烟建模的良好模型。     

扎普司特和谷胱甘肽翻转豚鼠离体气管对硝普钠的耐受性

上皮完整或去上皮的豚鼠离体气管以300 μmol·L^-1硝普钠(SNP)预处理1 h,使SNP对抗乙醋甲胆碱气管收缩作用的剂量反应曲线右移1.3-1.5 倍, 最大舒张率下降41%-58%,形成SNP气管松弛作用的耐受性. 8-溴环鸟苷酸可模拟SNP在豚鼠离体气管形成的SNP耐受性, 谷胱甘肽(1 mmol·L^-1)及环核苷酸磷酸二酯酶(PDE) Ⅴ抑制剂扎普司特(30 μmol·L^-1)均可部分翻转SNP 的气管松弛作用耐受性,而蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(10 μmol·L^-1)对SNP的耐受性无预防作用.结果表明SNP可产生豚鼠离体气管松弛耐受性, 这可能是由于气管平滑肌中环鸟苷酸(cGMP)积聚而下调鸟苷酸环化酶(GC)活性和上调PDEⅤ活性.     

喘宁软胶囊对嗜酸性粒细胞和肥大细胞的抑制作用

目的 初步探讨喘宁软胶囊的平喘作用机制。方法 采用整体试验观察致敏小鼠抗原攻击后肺灌洗液和周围血中的嗜酸性粒细胞聚集反应，采用离体试验观察致敏大鼠抗原攻击后腹腔肥大细胞脱颗粒反应。结果 喘宁软胶囊2，4，8g/kg和对照药地塞米松2mg/kgig给药显著减少肺灌洗液和周围血中嗜酸性粒细胞的浸润。喘宁软胶囊33.3,66.7mg/L和对照药酮替芬0.333mg/L明显抑制致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒反应。结论 初步证明喘宁软胶囊的平喘作用可能与其抑制嗜酸性粒细胞浸润和稳定肥大细胞膜有关。