补益脾胃元气方药对Aβ诱导的海马神经元JNK及p38MAPK信号通路相关蛋白及其磷酸化表达的影响

目的:通过研究补益脾胃元气类方药人参、大补元煎、洗心汤对β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)诱导的海马神经元JNK(c-Jun N-terminal kinase,JNK)及p38MAPK(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的影响,探讨补益脾胃元气方对Aβ诱导的海马神经元损伤的保护作用及防治阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)的可能机制。方法:通过寡聚肽Aβ_(1～42)诱导海马神经元损伤模拟AD细胞模型;分别以蒸馏水、人参、洗心汤、大补元煎颗粒剂溶液对新西兰家兔灌胃给药,14天后抽取各组脑脊液,与终浓度为25μmol/L的寡聚肽Aβ_(1～42)单独或共同作用于原代海马神经元48小时,分别检测模型组、正常脑脊液对照组、安理申组、人参组、大补元煎组、洗心汤组海马神经元JNK和磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)及p-38MAPK和磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38,p-p38MAPK)的表达水平。结果:对培养至7～8天的成熟原代海马神经元,进行神经元树突标志物微管相关蛋白-MAP2标记,结果显示原代海马神经元在所培养的总细胞中所占比例达到95%以上。免疫荧光实验显示,人参、大补元煎及洗心汤三组补益脾胃元气方药中p-JNK、p-p38MAPK的表达明显降低(P0.05),蛋白印迹实验中三组补益脾胃元气方药中p-JNK、p-p38MAPK的表达同样降低(P0.05)。结论:补益脾胃元气方药可通过抑制JNK和p38MAPK信号通路中关键信号分子p-JNK、p-p38MAPK蛋白的表达,有效拮抗Aβ_(1～42)神经毒性,抑制由Aβ_(1～42)诱导的JNK和p38MAPK信号通路激活所引发的炎症信号通路活性增强及细胞损伤凋亡发生,起到神经保护作用。     

洗心汤对Aβ_(1-42)诱导的海马神经元线粒体功能的影响

目的:观察名方洗心汤对Aβ_(1-42)损伤的海马神经元线粒体的调控作用,探讨名方洗心汤防治阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的可能作用机制。方法:提取Wistar新生鼠海马神经元并培养,分正常对照组,Aβ模型组,低、中、高浓度治疗组;Annexin V/PI法检测细胞凋亡率;JC-1荧光法检测线粒体膜电位;流式细胞仪技术和免疫荧光技术分别检测ROS与Cyt-c的蛋白基因表达。结果:洗心汤含药脑脊液对Aβ_(1-42)诱导所致细胞凋亡具有显著保护作用。结论:名方洗心汤能够修复线粒体功能,从而提高Aβ_(1-42)诱导细胞的存活率。     

高效去除异体组织中脱细胞试剂十二烷基硫酸钠残留的清洗方法

背景：十二烷基硫酸钠是一种常用于同种异体组织脱细胞处理的脱细胞试剂,然而其难以从组织内去除,少量残留即可产生细胞毒性。目的：提出一种高效去除异体组织中脱细胞试剂十二烷基硫酸钠的清洗方法。方法：选择纯水、钾盐溶液和乙醇作为清洗介质,并通过不同介质的排列组合进行清洗,对十二烷基硫酸钠残留量、异体真皮和异体肌腱的组成、结构、力学性能和细胞毒性等方面进行检测,评价清洗效果。结果与结论：总体上,乙醇+氯化钾、体积分数75%乙醇+氯化钾对样品的成分和结构无大影响。首先,十二烷基硫酸钠浸泡处理将异体真皮和异体肌腱的DNA残留控制在50 ng/mg以下之后再进行清洗,异体真皮、异体肌腱中的十二烷基硫酸钠含量分别降低了96.7%和97%;其次,异体真皮、异体肌腱的糖胺聚糖和胶原蛋白含量均无较大变化;此外,异体肌腱在清洗后,其最大拉力、强度和模量高于脱细胞后,与原材料相比无显著性差异;最后,细胞毒性结果显示异体真皮和异体肌腱清洗后的细胞存活率高于80%,细胞毒性分级不大于1级。     

补益脾胃元气方药含药脑脊液对大鼠海马神经干细胞活力与迁移的影响

目的研究补益脾胃元气类方药人参、大补元煎、洗心汤对β淀粉样蛋白诱导的海马神经干细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)活力与迁移能力的影响,探讨其对海马神经元修复和再生的作用。方法从孕14～16 d Wistar大鼠胎鼠分离培养NSPCs并鉴定,并随机分为空白组、Aβ1-42处理组、正常脑脊液对照组、安理申组及补益脾胃元气方药人参、大补元煎、洗心汤保护组,共7组。以25μmol/L Aβ1-42干预NSPCs,与抽取的终体积分数为20%的不同方药含药脑脊液作用第3代神经干细胞48 h。采用CCK-8实验检测各组NSPCs的活力,Transwell实验和划痕实验检测细胞迁移,流式法检测各组细胞内活性氧(ROS)含量。结果免疫荧光染色鉴定NSPCs特异性蛋白SOX2染色为阳性;CCK-8检测结果表明,补益脾胃元气方药各组海马NSPCs活性显著增高(P0.01);Transwell实验和划痕实验检测结果显示,补益脾胃元气方药各组NSPCs迁移能力显著增强(P0.05、0.01);流式法检测ROS含量结果表明,补益脾胃元气方药各组NSPCs内ROS水平显著降低(P0.01)。结论补益脾胃元气方药含药脑脊液对大鼠海马NSPCs活力与迁移能力具有促进作用。还可拮抗Aβ诱导的氧化应激,同时其有效成分易于透过血脑屏障,可能发挥更强的神经保护作用。