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目的:建立Bre1及Rad6的表达和纯化方法,构建Bre1-Rad6的复合物,寻找复合物的结晶条件,为使用X射线晶体学的方法解析复合物的结构奠定基础。方法:使用大肠杆菌表达系统表达蛋白质;使用共纯化的方法组装复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物。结果:建立了来源于Lodderomyces elongisporus的Bre1(LeBre1)氮端与Rad6相互作用的结构域(RBD)和Rad6(LeRad6)在大肠杆菌中大量表达的方法;通过使用共纯化的方法,成功组装了LeBre1 RBD-Rad6复合物,并进一步通过两步凝胶过滤层析纯化的方法精细纯化,获得了纯度超过95%的蛋白复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物,在18℃通过对1 000多个结晶条件的筛选,确定了复合物的两种结晶条件,进一步对该条件优化,获得了质量相对较好的晶体。结论:成功的构建了LeBre1 RBD-Rad6复合物的表达、纯化和结晶的方法,为使用X射线晶体学方法解析复合物的结构奠定了基础。 相似文献
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儿童长期上气道阻塞或功能紊乱可以引起张口呼吸,产生腺样体面容,严重时导致阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OASHS),严重影响儿童的生长发育和认知.腺/扁桃体肥大是儿童上气道阻塞的主要原因,其病理性肥大的生长规律和转归长期困扰着治疗方法的选择.本文讨论了儿童上气道阻塞对颌面部及全身生长发育的影响、不同治疗方法的选择及最... 相似文献
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目的在细胞水平探索补肾活血方干预高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞损伤的研究。方法在体外实验中采用高糖高脂刺激小鼠脑微血管内皮细胞。实验分组为:空白对照组、模型组[25 mmol/L葡萄糖(HG),200μmol/L棕榈酸(PA)]、补肾活血方30、60、120 mg/L组。CCK-8细胞增殖实验方法检测补肾活血方对高糖高脂诱导的细胞存活率的影响;采用试剂盒检测各组细胞部分氧化应激因子[活性氧(ROS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、一氧化氮(NO)、血管内皮生长因子(VEGF)]、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)和部分炎症因子[IL-6、细胞黏附因子1 (ICAM-1)、TNF-α、转化生长因子β1(TGF-β_1)]的含量变化。采用实时荧光定量PCR法检测iNOS和TNF-αmRNA表达。结果 (1)与空白对照组(100%±2.3%)比较,模型组细胞的细胞存活率显著降低(62.6%±0.5%,P0.01);与模型组比较,补肾活血方30、60、120 mg/L组细胞的存活率显著升高[(70.5%±4.0%),(76.3%±2.8%),(80.5%±2.7%),P0.05,P0.01]。(2)与空白对照组比较,模型组细胞的部分氧化应激因子(ROS、iNOS、NO、VEGF)、MMP-2、MMP-9、TIMP-1以及炎症相关因子(IL-6、ICAM-1、TNF-α、TGF-β_1)含量显著上升(P0.05,P0.01)。与模型组比较,补肾活血方30、60、120 mg/L组作用后各检测因子的表达降低(P0.05,P0.01)。(3)荧光定量PCR结果显示,与空白对照组比较,模型组iNOS和TNF-αmRNA表达均增加(P0.01),与模型组比较,BSHX 120 mg/L组iNOS mRNA表达及BSHX 60、120 mg/L组TNF-αmRNA表达均降低(P0.05,P0.01)。结论高糖高脂能够促进ROS、iNOS、NO、VEGF、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和部分炎症因子等相关指标的表达,使细胞活力降低,而补肾活血方可以改善高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞的损伤。 相似文献
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远志和石菖蒲始载于《神农本草经》,均能使人"不忘",久服可"轻身延年",常相须配伍作为"对药"使用,是益智和改善记忆类方剂的核心药物组合。目前,中医临床认为远志和石菖蒲改善记忆或益智的原理为补不足、化痰通九窍,其传统理论证据尚足,但其改善记忆的现代物质基础和作用机制仍未被完全阐明。本文通过检索近10年国内(中国知网)外(Pubmed数据库)远志、石菖蒲及其化学成分对神经系统作用的药理药效学作用机制的相关文献,对远志改善记忆的主要物质基础—远志皂苷、寡糖酯、山酮,石菖蒲改善记忆的主要物质基础—α-细辛醚,β-细辛醚,丁香酚,两者配伍后活性物质的质和量的改变,以及单药和对药配伍后改善记忆的机制—抗氧化清除自由基,调控胆碱能系统,清除β淀粉样蛋白(Aβ),降低Tau蛋白磷酸化水平,改善细胞凋亡率,调节突触可塑性进行系统整理、分析、总结,针对目前的研究现状指出可能存在的不足,以期为进一步探索远志和石菖蒲相须配伍发挥"1+1 2"作用的机制提供思路。 相似文献
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