丹参多酚酸盐通过AMPK/Sirt1/PGC-1α信号通路诱导膜性肾病大鼠足细胞自噬的机制

目的：通过观察丹参多酚酸盐对膜性肾病(MN)大鼠肾组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、沉默信息调节因子(Sirt1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)蛋白的表达及细胞自噬和凋亡的情况,探讨其治疗MN的可能的分子机制。方法：80只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,盐酸贝那普利组(10 mg·kg^-1),丹参多酚酸盐低、中、高剂量组(16.7、33.3、66.7 mg·kg^-1),通过尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法造模。造模成功后,各组按照相应比例剂量连续给药4周后留取24 h尿、血清和肾组织,尿液用于检测24 h尿蛋白定量(24 h UTP)、血清用于检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。采用光镜、电镜、免疫荧光法观察肾脏病理学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织磷酸化(p)-AMPK、AMPK、p...     

基于mTORC1/p70S6K通路探讨大黄泄浊方对慢性肾衰竭大鼠自噬和凋亡的影响

目的 观察大黄泄浊方对5/6肾切除大鼠mTORC1/p70S6K信号通路蛋白的影响,进一步研究其在保护肾脏功能可能的作用机制。方法 随机将90只雄性SD大鼠分为假手术组与造模组,其中假手术组15只,造模组75只。造模组大鼠采用5/6肾切除方法建立慢性肾衰竭模型,造模成功后,将75只大鼠随机分为模型组、尿毒清颗粒组(2.60g·kg^-1)、大黄泄浊方低剂量组(6.825g·kg^-1)、大黄泄浊方中剂量组(13.650g·kg^-1)和大黄泄浊方高剂量组(27.30g·kg^-1),每组均为15只。连续给药8周后,检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、β2-微球蛋白(β2-MG)含量;Masson染色光镜下观察肾组织的病理形态改变;免疫组织化学(IHC)检测Bcl-2、cleaved-caspase3、BAX、Beclin-1、LC3、P62蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测p-mTORC1、mTORC1、p-p70S6K、p70S6K蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠β2...     

丹参多酚酸盐减轻糖尿病肾病小鼠肾纤维化的机制研究

【目的】 探讨丹参多酚酸盐对小鼠糖尿病肾病的干预作用及机制。【方法】 将60只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、贝那普利组、丹参多酚酸盐组,每组15只。除正常组,其他组别采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）的方法复制糖尿病肾病小鼠模型。造模成功后随机分为模型组、贝那普利组、丹参多酚酸盐组,丹参多酚酸盐组、贝那普利组分别灌胃相应的药物,正常组和模型组灌胃等体积蒸馏水,共4周。给药结束后,检测24 h尿蛋白定量（UTP）,血清空腹血糖（FBG）、尿素氮（BUN）、血清肌酐（SCr）,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测小鼠肾组织中超氧化歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,分别采用过碘酸六胺银（PASM）染色和Masson 染色法观察肾脏病理学变化,采用蛋白免疫印迹（Western Blot）法分别检测小鼠肾脏组织中p-Smad2/3、Smad2/3、Smad7蛋白表达水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测小鼠肾脏组织中Smad7、Smad2/3、TGF-β1 mRNA表达水平。【结果】 与正常组比较,模型组FBG、UTP均显著增加（P <0.05）,肾脏组织可见明显病理改变,肾脏组织中的MDA 含量显著升高,SOD、GSH-Px 活性下降,p-Smad2/3/Smad2/3比值,Smad2/3、TGF-β1 mRNA表达水平明显升高,Smad7蛋白与mRNA表达水平明显下降（均P < 0.05）;与模型组比较,丹参多酚酸盐组、贝那普利组UTP降低（P < 0.05）,受损的肾组织得到改善,肾组织中MDA含量下降,SOD、GSH-Px活性升高,p-Smad2/3/Smad2/3 比值,Smad2/3、TGF-β1 mRNA 表达水平显著降低,Smad7 蛋白与 mRNA 表达水平升高（均 P <0.05）。【结论】 丹参多酚酸盐可明显改善糖尿病肾病小鼠肾功能,其机制可能与抑制氧化应激反应和调控TGF-β1/Smad信号通路,从而减轻肾纤维化有关。     

加味升降散对早期糖尿病肾病患者肾小管功能的影响

目的：观察加味升降散对早期糖尿病肾病（DN）患者肾小管功能的影响及其作用机制。方法：选取2018年3月至2019年10月河北省中医院肾内科门诊及住院部收治的早期DN患者92例作为研究对象,中医辨证属气阴两虚、浊毒郁热证。用简单随机化法分为对照组和观察组,每组46例。对照组给予基础治疗;观察组在基础治疗上加服加味升降散,疗程均为2个月。记录2组患者治疗前后中医证候积分;临床指标：糖化血红蛋白（HbA1c）,低密度脂蛋白（LDL）,总胆固醇（TC）,尿微量白蛋白排泄率（UAER）,肾小球滤过率（GFR）;肾小管功能标志物：β2-微球蛋白（β2-MG）,肝型脂肪酸结合蛋白（L-FABP）,α1-微球蛋白（α1-MG）;氧化应激指标：NADPH氧化酶4（NOX4）,超氧化物歧化酶（SOD）,总抗氧化能力（T-AOC）。结果：治疗后,观察组总有效率为92.68%,对照组为81.40%,差异有统计学意义（P<0.05）;2组患者中医证候积分、HbA1c、TC、LDL、UAER均较前下降,且观察组下降更为显著（均P<0.05）;2组患者治疗前后GFR变化不明显,α1-MG、β2-MG、L-FABP水平均较前降低,且观察组下降更显著（均P<0.05）;2组患者NOX4表达受到抑制,T-AOC、SOD水平回升（均P<0.05）,观察组患者NOX4表达的下降以及T-AOC、SOD水平的回升更显著（P<0.05）;2组患者均未出现不良反应。结论：加味升降散能够改善早期DN患者临床症状,调节氧化-抗氧化失衡,减轻氧化应激,缓解肾小管损伤。     

降脂通络软胶囊调控SIRT1/FoxO3通路对膜性肾病大鼠细胞凋亡的影响

目的:通过观察降脂通络软胶囊对膜性肾病(MN)大鼠肾组织中沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/叉头转录因子O3(FoxO3)蛋白表达及足细胞凋亡的影响,探讨其治疗MN的可能分子机制.方法:将60只雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只,随机选取1组作为正常组,其余5组分别为模型组、盐酸贝那普利(西药)组(10 mg...     

微小RNA-193a调控Wilms瘤基因1促进小鼠糖尿病肾病足细胞凋亡

目的 探讨微小RNA（miR）-193a对糖尿病肾病（DN）足细胞凋亡的影响及作用机制。 方法 通过体外高糖培养足细胞和体内小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制DN模型,将细胞或60只小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、miR-193a抑制阴性对照组、miR-193a抑制组、miR-193a过表达阴性对照组和miR-193a过表达组。使用流式细胞术、免疫组织化学、免疫荧光、TUNEL、Real-time PCR和Western blotting检测DN小鼠和小鼠足细胞凋亡情况。 结果 DN小鼠和高糖诱导的小鼠足细胞中Nephrin、Podocin表达减弱,细胞凋亡率显著升高,miR-193a高表达,小鼠肾脏和足细胞中cleaved-Caspase-3和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著下降,而miR-193a 抑制剂(inhibitor)可改善这一过程。DN小鼠和高糖培养的小鼠足细胞中Wilms瘤基因1（WT1） mRNA和蛋白表达水平显著降低,miR-193a inhibitor干预后WT1蛋白表达显著升高。上调WT1可降低miR-193a对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡的影响。双荧光素酶报告实验证实了miR-193a和WT1之间的靶向关系。 结论 MiR-193a下调WT1的表达,促进DN足细胞凋亡。     

益肾通络方对MN大鼠miR-514a-5p/TNFSF15信号通路的影响及机制

目的:基于miR-514a-5p/肿瘤坏死因子超家族成员15(TNFSF15)信号通路探讨益肾通络方抑制膜性肾病(MN)大鼠肾小球足细胞凋亡的分子机制.方法:80只SD大鼠采用预免疫和尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法建立MN大鼠模型,并使造模成功的MN大鼠随机分为模型组,益肾通络方高、中、低剂量组(2...     

大黄泄浊方对慢性肾衰竭大鼠炎症及SOCS3/TLR4通路的影响

目的：观察大黄泄浊方对慢性肾衰竭(CRF)大鼠信号传导抑制因子3(SOCS3)/Toll样受体4(TLR4)通路的干预作用,探讨其减轻肾组织炎症反应的分子机制。方法：取雄性SD大鼠90只,随机留取15只为假手术组,剩余75只为造模组,行5/6肾切除术复制CRF大鼠模型,模型复制成功后,随机分为模型组,大黄泄浊方低、中、高剂量(6.825、13.65、27.3 g·kg^-1)组、尿毒清颗粒组(2.6 g·kg^-1),分别予相应剂量的药物灌胃,连续灌胃8周。给药结束后,苏木素-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色观察大鼠肾脏组织病理形态改变;检测大鼠血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血尿酸(UA)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织中SOCS3和TLR4 m RNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测信号传导抑制因子3(SOCS3)、TLR4、核转录因子...     

丹参多酚酸盐调控Nrf2/HO-1信号通路对膜性肾病大鼠氧化应激的影响

[目的] 基于血清核转录因子2（Nrf2）/血红蛋白氧合酶-1（HO-1）信号通路探讨丹参多酚酸盐对膜性肾病（MN）大鼠氧化应激的影响。[方法] 80只SD雄性大鼠随机选取20只为正常对照组,其余60只大鼠均采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）构建MN模型,MN模型大鼠复制成功后随机分为模型组,盐酸贝那普利组（10 mg/kg）,丹参多酚酸盐分为低、中、高剂量组（16.7、33.3、66.7 mg/kg）。药物灌胃连续 4周,1 次/d,正常组和模型组予以相等体积的生理盐水灌胃。治疗后检测大鼠24 h尿蛋白定量（24 h UTP）。给药结束后,经大鼠腹主动脉取血检测血尿素氮（BUN）,血清肌酐（Scr）,三酰甘油（TG）,总胆固醇（TC）,总蛋白（TP）,白蛋白（ALB）水平;过碘酸-六胺银（PASM）染色观察大鼠肾组织病理形态;免疫荧光检测肾组织免疫球蛋白G（IgG）、补体C3沉积情况;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）表达情况;蛋白免疫印迹法（Western Blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）观察肾组织Nrf2、HO-1蛋白及Nrf2、HO-1 mRNA表达。[结果] 与正常组相比,模型组大鼠肾小球出现体积增大、基底膜增厚、“钉突”形成,沿毛细血管襻有补体C3、IgG弥漫性沉积,24 h UTP、血清TG、TC水平显著升高（P<0.01）,TP、ALB水平显著降低（P<0.01）,BUN、SCr差异无统计学意义;血清中SOD表达显著降低（P<0.01）,MDA表达显著升高（P<0.01）;肾组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.01）。与模型组相比,各治疗组大鼠24 h UTP、血清TG、TC水平显著降低（P<0.05或P<0.01）,TP、ALB 水平显著升高（P<0.01）,但丹参多酚酸盐低剂量组改善不明显;各治疗组肾脏病理损害明显改善;SOD表达水平显著升高（P<0.01）,MDA表达水平明显降低（P<0.01）;Nrf2、HO-1mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.05或P<0.01）。[结论] 丹参多酚酸盐可能通过调控Nrf2/HO-1信号通路,缓解肾组织氧化应激,进而保护肾脏及延缓疾病进展。     

sCD40L及sP选择素在糖尿病下肢动脉病变介入治疗前后的变化及其意义

目的探讨可溶性CD40配体(sCD40L)和可溶性P选择素(sP选择素)在糖尿病下肢动脉病变发生、发展中的作用及其在下肢动脉介入治疗前后的变化及意义。方法选取2型糖尿病合并下肢动脉病变并成功行介入治疗的患者28例作为A组;选取同期确诊为单纯2型糖尿病患者28例为B组;另选健康体检者28名作为C组。3组患者均在相同条件下抽取肘静脉血测定空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血脂、sCD40L及sP选择素水平。A组介入治疗过程中,导管鞘置入后鞘内取血4ml(术前动脉血),导丝、导管跨越狭窄或闭塞动脉后于其远段取血4ml(缺血部位术前动脉血),球囊扩张或支架植入后(缺血改善后)再于该部位取血4ml(缺血部位术后动脉血),于术后24h、7天分别取肘静脉血4ml,均测定sCD40L及sP选择素的水平。对A组于介入治疗前和治疗后1天分别测量踝肱指数(ABI)及TcPO_2以对比疗效。结果术前静脉血sCD40L、sP选择素水平,A组明显高于B、C组(P均0.01),B组明显高于C组(P均0.01),A组术后24h、7天静脉血sCD40L、sP选择素水平高于术前静脉血(P均0.01),而术后7天sCD40L、sP选择素水平明显低于术后24h(P均0.01)。A组术前静脉血与术前动脉血sCD40L、sP水平的差异无统计学意义(P均0.05);缺血部位术后、术前及介入治疗前动脉血sCD40L水平依次降低(P均0.05);缺血部位术前动脉血sP选择素水平明显高于介入治疗前动脉血(P0.01)。3组术前静脉血sP选择素与sCD40L呈正相关(r=0.750,P0.01)。A组术后24h的ABI、TcPO_2水平明显高于术前水平(P均0.01)。结论糖尿病下肢动脉病变患者sCD40L、sP选择素水平明显升高,表明血小板活化可能是下肢动脉硬化形成的原因之一;下肢动脉介入治疗进一步促进血小板活化并加重炎症反应,可能是介入治疗后再狭窄的原因之一。