基于PI3K/Akt/HIF-1α信号通路探讨补肾活血汤干预乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松的作用机制

目的 利用网络药理学预测补肾活血汤干预乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松的潜在作用机制,并通过体外细胞模型进行实验验证。方法 首先通过网络药理学筛选补肾活血汤的主要有效化学成分和作用靶点,进一步获取乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松相关的疾病靶点。将二者的共同靶点信息进行基因本体（GO）功能注释和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。其次利用生存分析网站（Kaplan-Meier Plotter）对关键靶点进行生存分析。最后通过体外实验噻唑蓝（MTT）比色法评估细胞增殖抑制活性,蛋白免疫印迹法（Western blot）验证关键靶点及通路,并使用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）评估关键靶点mRNA表达。结果 网络药理学研究共获得补肾活血汤活性成分716个,关键靶点249个,补肾活血汤和乳腺癌内分泌治疗相关骨质疏松的共同靶点135个,其中蛋白激酶B（Akt）1、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）是两个关键靶点,靶点共涉及生物过程531种,细胞组成62种,分子功能162种,参与乳腺癌、内分泌抵抗等细胞信号通路145条;靶点有效地富集在磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt和低氧诱导因子（HIF）-1两条信号通路。体外实验中,MTT比色法显示,与空白组比较,22.5、45、90 g·L^-1及45、90、180 g·L^-1质量浓度的补肾活血汤作用48 h后分别能不同程度的降低人Luminal A型乳腺癌细胞系MCF-7和T47D细胞增殖率和细胞运动能力。将0、15、60 g·L^-1的补肾活血汤干预MCF-7细胞48 h,Western blot实验表明,与空白组比较,不同质量浓度的补肾活血汤作用于MCF-7细胞中磷酸化（p）-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt和HIF-1α蛋白相对表达水平均降低（P<0.05,P<0.01）,且呈浓度依赖性。采用Real- time PCR检测关键靶点HIF-1α的mRNA表达,结果显示,与空白组比较随浓度升高MCF-7细胞中HIF-1α的mRNA表达显著降低（P<0.01）,且呈浓度依赖性。结论 补肾活血汤通过PI3K/Akt/HIF-1信号通路作用于关键靶点Akt1、HIF1A,进而干预乳腺癌内分泌治疗相关的骨质疏松。     

薯蓣皂苷元对非酒精性脂肪肝病模型大鼠mTOR/FASN/HIF-1α/VEGFA表达的影响

研究薯蓣皂苷元对非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)模型大鼠肝组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase, FASN)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A, VEGFA)表达的影响,探讨薯蓣皂苷元对NAFLD大鼠脂质生成和炎症的作用机制。40只雄性SD大鼠,随机选取8只为正常组给予普通饲料喂养,其余32只给予高脂饲料喂养以构建NAFLD模型。造模成功后随机分为高脂饮食组、薯蓣皂苷元低剂量组(150 mg·kg^-1·d^-1)、薯蓣皂苷元高剂量组(300 mg·kg^-1·d^-1)、辛伐他汀组(4 mg·kg^-1·d^-1),每组8只,连续...