良方温经汤对寒凝血瘀证大鼠子宫及卵巢糖酵解关键酶表达的影响

探讨寒凝血瘀证与糖酵解的关系,观察良方温经汤干预对寒凝血瘀证大鼠子宫及卵巢组织糖酵解关键酶表达的影响。采用冰水浴法制备大鼠寒凝血瘀证候模型,于造模结束后进行证候量化评分,并依据评分结果随机分为模型组,良方温经汤低、中、高剂量组(4.7、9.4、18.8 g·kg^-1·d^-1),每组10只,另设空白组10只。连续灌胃给药4周后,再次进行证候量化评分;采用激光散斑血流成像技术检测各组大鼠耳廓及子宫微循环变化;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察各组大鼠子宫及卵巢组织病理形态;采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测各组大鼠子宫及卵巢组织丙酮酸脱氢酶激酶1(pyruvate dehydrogenase kinase 1,PDK1)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)mRNA与蛋白表达情况。...     

温经汤对子宫内膜异位症患者异位内膜间质细胞HIF-1α表达及线粒体功能的调控作用

目的 从调控低氧应激及线粒体功能角度探讨温经汤防治子宫内膜异位症（EMT）的作用机制。方法 采用消化法原代培养EMT患者异位子宫内膜间质细胞（ESCs）,实验设正常（Control）组、5%空白血清（5% KBXQ）组、10%空白血清（10% KBXQ）组、5%温经汤血清（5% WJTXQ）组、10%温经汤血清（10% WJTXQ）组。噻唑蓝（MTT）比色法检测不同组ESCs增殖情况,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA及蛋白表达,透射电镜观察ESCs线粒体超微结构,高内涵分析（HCS）法多参数同时检测细胞线粒体功能［线粒体膜电位,线粒体膜电位（MMP）和细胞色素C（Cyt C）表达］及细胞凋亡情况（细胞膜通透性、细胞核荧光强度、细胞核大小及细胞数量）,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）,Bcl-2和剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达。结果 与Control组比较,5% KBXQ和10% KBXQ组细胞活力显著增加（P<0.01）;HIF-1α mRNA及蛋白表达水平无明显变化;透射电镜观察可见线粒体嵴明显,线粒体内外膜清晰;HCS多通道荧光染色显示,MMP及Cyt C表达、细胞膜通透性无显著变化,细胞核呈现均匀淡染;细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达及Bax/Bcl-2值均无明显变化。与Control组及相应体积分数KBXQ组比较,5% WJTXQ及10% WJTXQ组细胞活力显著下降（P<0.01）;HIF-1α mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;线粒体超微结构破坏,部分线粒体肿胀,嵴模糊;MMP显著降低,Cyt C释放量明显增加（P<0.05,P<0.01）;细胞膜通透性显著增加（P<0.01）,并可观察到核固缩、核内DNA凝集、细胞数量下降等凋亡特征（P<0.05,P<0.01）;流式细胞术结果显示,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,与HCS分析结果一致;且cleaved Caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2值明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 温经汤能够下调异位ESCs中HIF-1α表达而改善低氧应激,抑制细胞增殖,降低线粒体生物活性,诱导细胞凋亡,这可能是其防治EMT的作用机制。