黄芪多糖对小鼠慢性肾功能衰竭保护作用的机制研究

目的　探讨黄芪多糖（APS）对慢性肾功能衰竭小鼠的保护作用及其潜在分子机制。方法　雄性Balb/c小鼠采用5/6肾切除建立慢性肾功能衰竭模型,随机分为模型组和黄芪多糖干预组（APS组）,另设假手术组,每组10只。术后正常喂养7周,APS组给予黄芪多糖100 mg/（kg·d）灌胃,余组均给予等体积生理盐水。4周后收集粪便、尿、血液、肾脏与结肠组织样本,测定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量;组织固定包埋切片后予以HE、天狼星红染色进行病理分析;Western blot、免疫组织化学染色检测紧密连接蛋白-1家族（Claudin-1、Occludin-1、ZO-1）及p-NF-κB表达水平;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清中白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的浓度;实时荧光定量PCR检测长链非编RNA（lncRNA）Arid2-IR及IL-1β、IL-6、TNF-α的表达变化以及各组小鼠粪便的菌群变化。结果　APS组小鼠血Scr、BUN、24 h尿蛋白较模型组下降;HE染色显示APS组肾脏、结肠组织病理损伤均较模型组改善;天狼星红染色可见APS组纤维化程度明显改善;Western blot、免疫组织化学染色结果可见APS组结肠组织紧密连接蛋白-1家族表达量升高及肾组织p-NF-κB蛋白表达量较模型组明显下降;ELISA结果显示APS组血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平较模型组明显下降;实时荧光定量PCR结果可见APS组肾组织中lncRNA Arid2-IR、IL-1β、IL-6和TNF-α的相对表达水平较模型组明显下降,同时APS组乳酸杆菌、双歧杆菌的表达量较模型组增高,而大肠杆菌的表达量较其下降。结论　黄芪多糖可能通过调控lncRNA Arid2-IR/NF-κB信号轴调节小鼠肠道菌群,从而修复肠道屏障损伤,维持正常肠道生理环境,改善慢性肾功能衰竭。     

肾纤维化相关关键候选基因的生物信息学筛选

目的 基于生物信息学方法分析肾纤维化小鼠模型的转录组测序数据并加以体内验证,寻找关键候选基因.方法 从GEO数据库下载转录组数据,挖掘单侧输尿管梗阻(UUO)2 d和UUO 8 d模型组中差异表达明显的基因,利用R软件包对筛选出的差异表达基因进行基因功能富集分析;采用加权基因共表达网络分析(WGCNA)方法构建共表达模块,并对基因进行Cytoscape可视化分析,制作蛋白相互作用网络图(PPI);对中枢基因结合文献和功能分析,筛选出与肾纤维化进程相关度较大的基因行Real-time PCR mRNA水平检测,采用蛋白质印迹技术、免疫组织化学进行蛋白水平分析.结果 筛选出从急性肾损伤(AKI)进展至慢性肾脏病(CKD)病程中差异表达的1503个基因,基因集富集分析(GSEA)结果显示,这些基因主要富集在上皮细胞转分化与炎症应答信号通路等;通过WGCNA构建的4个基因共表达模块,筛选出与肾纤维化关系密切的20种中枢基因,从中挑选出的6个核心基因验证结果显示,RELB、υCAM1和Pdlim13种基因随着肾纤维化程度的加重,表达水平均明显上调(P<0.05).结论 RELB、υCAM1和Pdlim1可作为肾纤维化相关关键候选基因,为寻找CKD的早期诊断和治疗靶标提供新线索.