肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体制备、鉴定及初步应用

目的制备本课题组报告的肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。方法以本课题组前期构建的人MBP-Kinectin融合片段重组质粒为基础,原核表达和亲和层析大量纯化MBP-Kinectin融合蛋白,并免疫新西兰兔制备多克隆抗体;用间接ELISA法测定抗体效价,用Western blot鉴定抗体的特异性。同时用Kinectin多克隆抗体检测Kinectin在正常成人肝细胞HL-7702和人肝癌细胞株SMMC-7721内的表达。结果通过免疫新西兰兔获得抗Kinectin抗体,ELISA测定纯化的Kinectin抗体效价最高为1∶12 800,Western blot结果显示Kinectin抗体具有较好的特异性。免疫细胞化学和western blot检测发现Kinectin蛋白在肝癌细胞株内的表达显著高于正常成人肝细胞株。结论制备的抗Kinectin抗体具有较高的效价和特异性,能满足Western blot和免疫细胞化学检测Kinectin蛋白的要求,为进一步深入研究Kinectin在肝癌发生发展中的作用奠定基础。     

健康中国视域下立足“六元并举”探讨高职药学生健康科普能力的构建

<正>在《“健康中国2030”规划纲要》(以下简称纲要)中提到^[1],要普及健康生活,加强健康教育,提高全民健康素养,同时,还指出要加大学校健康科普的教育力度,将健康教育纳入国民教育体系,把健康教育作为所有教育阶段素质教育的重要内容,建立学校健康教育推进机制,构建相关学科教学与教育活动相结合、课堂教育与课外实践相结合、经常性宣传教育与集中式宣传教育相结合的健康教育模式,加大力度培养健康教育师资^[2]。可见,纲要非常注重健康科学知识的普及,     

Kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏树突状细胞对T细胞分化格局的改变

背景:Kinectin作为树突状细胞瘤苗可运用于肝癌临床免疫治疗.目的:检测kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏的树突状细胞刺激T细胞亚群的分化情况.方法:运用免疫组化法检测kinectin-麦芽糖结合蛋白孵育的树突状细胞刺激增殖的T细胞中CD4+、CD8+ T细胞亚群活化情况,同时设立麦芽糖结合蛋白组、非致敏树突状细胞组及普通培养T细胞组作为比较.结果与结论:Kinectin-麦芽糖结合蛋白致敏树突状细胞刺激的T细胞组CD8+T细胞明显高于麦芽糖结合蛋白孵育树突状细胞刺激的T细胞组、非致敏树突状细胞刺激组及普通培养T细胞组(P < 0.05);各组CD4值之间、CD4/CD8值之间比较,差异无显著性意义(P > 0.05).经Kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏的树突状细胞能有效刺激自体CD8+ T淋巴细胞的增殖,Kinectin-麦芽糖结合蛋白作为肝癌相关抗原可通过致敏树突状细胞发挥较明显的抗肿瘤功能.     

肝癌相关抗原Kinectin蛋白致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株杀伤作用的检测

目的 探讨肝癌相关抗原Kinectin基因重组蛋白Kinectin-MBP(MBP,麦芽糖结合蛋白)致敏树突状细胞(DCs)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株的杀伤作用.方法 体外基因工程的方法表达、纯化Kinectin-MBP.从正常人外周血中分离单个核细胞(PBMC),重组人粒细胞-巨噬细胞集落因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增DCs,并通过形态学、流式细胞术鉴定DCs.DCs经Kinectin-MBP致敏后,ELISA检测细胞上清液中IL-12和IFN-γ的含量;将致敏DCs与自体T淋巴细胞混合培养后,MTT法检测T细胞增殖的能力;同时诱导T细胞增殖转化为CTL,以此CTL为效应细胞,Kinectin表达阳性的肝癌细胞株bel-7404为靶细胞,LDH 4 h释放法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用.结果 体外重组蛋白技术成功表达、纯化出Kinectin-MBP.PBMC经rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导,可成功培养出DCs.DCs经Kinectin-MBP致敏后上清液中IL-12和IFN-γ的分泌量明显增高,且刺激自体T细胞增殖的能力也显著增强;同时Kinectin-MBP致敏的DCs能明显诱导CTL的增殖,此CTL对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株有较明显的杀伤作用,其杀伤率在效靶比为25∶1时达最高峰[为(65.00±1.47 )％],显著高于其他对照组(均P ＜0.001).结论 体外诱导扩增的DCs经肝癌相关抗原Kinectin-MBP致敏后具有较强的刺激自体T细胞增殖的能力,且在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株具有较强的杀伤效应.该实验为将Kinectin蛋白运用于以DCs为基础的肝癌临床免疫治疗奠定了基础.     

Kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏树突状细胞对T细胞分化格局的改变

背景：Kinectin作为树突状细胞瘤苗可运用于肝癌临床免疫治疗。 目的：检测kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏的树突状细胞刺激T细胞亚群的分化情况。 方法：运用免疫组化法检测kinectin-麦芽糖结合蛋白孵育的树突状细胞刺激增殖的T细胞中CD4⁺、CD8⁺ T细胞亚群活化情况,同时设立麦芽糖结合蛋白组、非致敏树突状细胞组及普通培养T细胞组作为比较。 结果与结论：Kinectin-麦芽糖结合蛋白致敏树突状细胞刺激的T细胞组CD8⁺T细胞明显高于麦芽糖结合蛋白孵育树突状细胞刺激的T细胞组、非致敏树突状细胞刺激组及普通培养T细胞组(P < 0.05);各组CD4值之间、CD4/CD8值之间比较,差异无显著性意义(P > 0.05)。经Kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏的树突状细胞能有效刺激自体CD8⁺ T淋巴细胞的增殖,Kinectin-麦芽糖结合蛋白作为肝癌相关抗原可通过致敏树突状细胞发挥较明显的抗肿瘤功能。     

小钻木脂素类化合物戈米辛R的体外抗炎机制研究

目的 通过脂多糖(LPS)诱导活化小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7建立炎症模型,探讨小钻木脂素类化合物戈米辛R对炎症细胞增殖及炎症因子分泌的影响,评价其抗炎活性及机制。方法 采用MTT比色法检测经LPS诱导的RAW264.7细胞存活率并计算半数抑制浓度(IC₅₀);采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子含量;利用RT-PCR法检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IκB-α、NF-κB p65的mRNA表达量;Western blot法检测细胞IκB-α及NF-κB p65蛋白表达量。结果 与LPS模型组比较,戈米辛R可显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞增殖;降低细胞分泌TNF-α、IL-1β及IL-6的含量;升高LPS所致降低的IκB-α mRNA的表达量同时降低LPS引起升高的TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA表达量;升高IκB-α并降低NF-κB p65的蛋白表达量,显示出良好的剂量依赖性,具有统计学差异(P<0.05)。结论 戈米辛R可通过抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB p65的mRNA和NF-κB p65蛋白的表达,增加IκB-α mRNA和IκB-α蛋白的表达,减少致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的释放,从而发挥显著抗炎活性。     

双环境模式在高职高专组织胚胎学教学中的应用

目的构建教学和学习在环境中的双环境模式,提高医学高职高专组织胚胎学教学质量,激发学生学习兴趣。方法以综合手段构建双环境模式,采用对比法比较实验班和对照班理论、实训考核成绩,学生学习积极性及对该课程的欢迎程度。结果实验班理论和实训考核成绩高于对照班,学生学习积极性、课程欢迎程度均优于对照班,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论双环境模式能提高学生学习成绩,调动其学习积极性。     

广西融水苗族儿童青少年头面部发育指标分析

目的:探讨广西融水苗族儿童青少年头面部形态特征.方法:采取分层随机抽样方法,对广西融水苗族自治县1 597名7～16岁乡村苗族青少年(男生798例,女生799例)头面部的9项指标进行测量、比较,并计算相关的指数,根据头面部各项指数数值大小进行头型、面型的分型.结果:该地区苗族青少年头面部9项指标均随着年龄的增长而增大,各年龄组的性别间差异有统计学意义;苗族青少年的头型:头指数以圆头型(34.33 %)和特圆头型(33.08 %)多见;头长高指数以高头型(93.93 %)多见;头宽高指数以中头型(38.07 %)和阔头型(33.56 %)多见;形态面指数以阔面型(38.70 %)和中面型(28.55 %)多见.结论:广西融水苗族儿童青少年的头型和面型与广西壮族、侗族青少年比较有其民族特征.     

动力素kinectin基因mRNA在7404肝癌细胞株的表达及意义

目的研究动力素作为肝癌相关抗原其在肝癌细胞株中的表达情况,评价其作为分子肿瘤标记以及肿瘤免疫治疗特异性靶位的可能性。方法运用RT-PCR技术检测国内建株的肝癌细胞株BEL-7404 kinectin基因(D2剪接区)mR-NA的表达,并与肝癌组织、相应癌旁肝组织、正常肝组织比较。结果肝癌细胞株BEL-7404中kinectin基因(D2选择剪接区)呈强阳性表达,肝癌组织中也呈较强的阳性表达,癌旁肝组织则表达呈弱阳性。结论 kinectin基因可作为肝癌诊断的辅助分子标记,并具有作为肝癌免疫治疗特异性靶位的潜在价值。