四君子汤调控肝癌癌旁组织NF-κB p65的O-GlcNAc糖基化修饰抑制肝细胞癌进展的机制

目的 探究四君子汤通过调控肝癌癌旁组织核因子-κB p65（NF-κB p65）的O-连接的β-N-乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）糖基化修饰,干预肝癌发展的分子机制。方法 建立原位肝癌小鼠模型,将24只C57BL/6小鼠,随机分为4组,每组6只,分别为正常组、模型组、四君子汤低剂量组（10 g·kg^-1）、四君子汤高剂量组（25 g·kg^-1）,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平和p65的磷酸化修饰水平;免疫沉淀法（IP）检测p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测癌旁组织中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9） mRNA表达水平;观察各组小鼠肿瘤数量,称量肝脏质量;检测各组小鼠的旷场运动情况和抓力,分析小鼠的气盛衰度。结果 与正常组小鼠肝组织比较,模型组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平显著下降（P<0.01）;p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平显著下降（P<0.01）;p65的磷酸化水平显著升高（P<0.01）;IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著升高（P<0.01）;肝脏质量显著升高（P<0.01）;小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数显著下降（P<0.01）,气盛衰度显著下降（P<0.01）。与模型组小鼠比较,四君子汤低剂量组和四君子汤高剂量组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平明显升高（P<0.05, P<0.01）;p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平明显上调（P<0.05,P<0.01）;p65的磷酸化水平显著下降（P<0.01）;四君子汤低剂量组IL-6、TGF-β₁、VEGFA mRNA水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;四君子汤高剂量组中IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.01）,直径>3 mm肿瘤数量显著减少（P<0.01）,小鼠肝脏质量明显降低（P<0.05）,小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数明显升高（P<0.05,P<0.01）,气盛衰度显著升高（P<0.01）。结论 四君子汤可以抑制小鼠原位肝癌的进展,该作用可能是通过增加肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平,增加癌旁组织中p65的O-GlcNAc糖基化修饰,抑制p65的磷酸化修饰,最终抑制下游IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9的表达而实现。     

α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响

目的 探索α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响.方法 MTT法检测细胞存活率,CompuSyn软件获取相互作用指数(CI)并筛选出最佳协同组合.流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和细胞周期蛋...     

大柴胡汤通过调控p38 MAPK/IL-6/STAT3信号通路抑制肝癌的作用机制

目的 探讨大柴胡汤抗小鼠肝癌的体内外活性及潜在作用机制。方法 取对数生长期Hepa1-6细胞,培养1、2、4、8 d后,用噻唑蓝（MTT）比色法、结晶紫染色法检测大柴胡汤（0、125、250、500、1 000 mg·L^-1）对小鼠肝癌细胞（Hepa1-6）增殖活性的影响。通过肝内注射1×10⁶个Hepa1-6细胞建立小鼠肝癌原位模型,随机分为空白组,模型组,大柴胡汤低、中、高剂量组（0.21、0.625、1.875 g·kg^-1）,灌胃给药,每日1次;5-氟尿嘧啶（5-FU）组,（25 mg·kg^-1）腹腔注射,隔日注射,连续给药14 d后处死小鼠,取肝,用4%多聚甲醛（PFA）固定,苏木素-伊红（HE）染色检测大柴胡汤抑制肝癌的活性。运用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）、Cytoscape3.7.2 软件、STRING平台、DAVID平台数据库对大柴胡汤和肝癌靶基因进行关键靶基因的筛选及蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络构建、京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大柴胡汤对Hepa1-6细胞及小鼠肝脏中白细胞介素-6（IL-6）mRNA的影响。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、信号转导与转录活化因子3（STAT3）相关通路蛋白的表达。结果 MTT比色法、结晶紫染色结果显示,与空白组比较,大柴胡汤组（500、1 000 mg·L^-1）第4、8天时能够显著性地抑制Hepa1-6细胞增殖（P<0.05）,呈浓度和时间依赖性;体内实验结果显示,大柴胡汤给药14 d后,与模型组比较,大柴胡汤组（1.875 g·kg^-1）的肿瘤细胞多呈高分化,异型不明显,坏死区少见。网络药理学结果显示大柴胡汤作用于肝癌的核心基因,以调控肝癌微环境为主如IL-6、白细胞介素-1β（IL-1β）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等;信号通路以肝癌生长、分化、免疫和炎症为主,如MAPK、STAT3等。在Hepa1-6细胞中,与空白组比较,大柴胡汤（1 000 mg·L^-1）第1、2、4、8天能抑制IL-6 mRNA表达（P<0.05）。与模型组比较,大柴胡汤组（0.625、1.875 g·kg^-1）处理的小鼠肝脏中IL-6 mRNA表达下降（P<0.05）。体外实验显示,与空白组比较,大柴胡汤（1 000 mg·L^-1）第4、8天和大柴胡汤（500、1 000 mg·L^-1）能够抑制Hepa1-6细胞中细胞外信号调节激酶（ERK1/2）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和STAT3的磷酸化表达（P<0.05）,呈时间和浓度依赖性;体内实验结果显示,与模型组比较,大柴胡汤组（0.625、1.875 g·kg^-1）能显著性地抑制p38 MAPK和STAT3的磷酸化（P<0.05）。结论 大柴胡汤通过调控p38 MAPK/IL-6/STAT3信号轴,从而达到抑制肝癌的活性。     

以科研案例为引导的《实验中医学》教学改革实践与思考

实验中医学作为中医学新兴发展的一门学科,其教、学、研工作对培养中医药创新型人才起着重要作用。随着国家中医药事业快速发展及其新的定位要求,结合当前大学生认知特点,研究者对《实验中医学》教材进行了修订与再版,其中突出特色是采用科研案例引导相关知识点,并应用至上海中医药大学2013级"5+3"培养模式下的本科生授课中。课后问卷调查显示,学生认为以科研案例为引导的教学,既有助于培养自身采用当代实验方法研究和发展中医药的素质与能力,又可普及当代中医药研究的重大成果,还有利于增强自身对中医药现代化研究的责任感。研究者建议在普通高等中医药院校推广开设《实验中医学》课程。     

木通属植物提取物抗肿瘤作用的研究进展

木通属AkebiaDecne.目前发现5种,其植物在中医药治疗上应用广泛,药用品种主要是木通（五叶木通）Akebia quinate、三叶木通A. trifoliata和白木通A. trifoliate subsp. australis;主要药用部位为其藤茎和果实,具有利尿通淋和疏肝理气等功效。近年来木通属植物也常用于中医药的肿瘤防治,许多研究表明其提取物对胃癌、肝癌等肿瘤细胞的增殖产生抑制作用,而来自木通属植物不同部位提取物的抗癌作用也不尽相同,其抗肿瘤机制包括诱导凋亡、抑制侵袭与转移、阻滞细胞周期、抑制肿瘤细胞血管生成等。对木通属植物的藤茎、果实、种子提取物和其天然产物的抗肿瘤作用研究进行归纳综述,为木通属植物在中医药肿瘤防治方面的应用提供新思路。     

预知子联合雷公藤红素对肝癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用及对NF-κB通路的影响

目的 观察预知子联合雷公藤红素对肝癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用及对核因子（NF）-κB通路的影响,并探讨其作用靶点。方法 皮下接种肝癌SMMC7721细胞建立荷瘤裸鼠模型,将裸鼠随机分为模型对照组、预知子提取物组、雷公藤红素组和联合组,将药物包载于壳聚糖/甘油磷酸钠温敏性凝胶系统,分别于分组后第1、6、11日经皮瘤内注射相应药物,共3次。每2日测量裸鼠体质量和瘤径,第16日称量瘤体及肝、脾、左肾脏器质量,计算瘤指数、抑瘤率及脏器指数;ELISA测定血清肿瘤坏死因子（TNF）-α含量;HE染色观察瘤组织形态变化;Western blot检测瘤组织NF-κB通路相关蛋白表达。结果 与模型对照组比较,各给药组裸鼠体质量、去瘤体质量、瘤体积、瘤质量和瘤指数均呈下降趋势,其中以雷公藤红素组最为显著（P<0.05）,联合组瘤体积和瘤质量显著下降（P<0.05）,各给药组裸鼠肝和左肾质量及指数均显著下降（P<0.05）,预知子提取物组、雷公藤红素组和联合组抑瘤率分别为6.68%、35.08%和22.00%;各给药组裸鼠血清TNF-α含量显著增加（P<0.05）;HE染色显示,各给药组...     

科研案例中德育素材融合至“实验中医学”教学的实践与评价

目的　评价科研案例隐含的德育素材融合至“实验中医学”教学的效果。方法　挖掘以往“实验中医学”教学中科研案例隐含的德育素材,并将其巧妙融入课程专业知识的教学中。设计调查问卷,从“通过案例讲解引申出其中潜在的人文精神的形式可好,是否有助于提高对科学探索的兴趣,对今后的学习、生活和工作态度是否有所触动”“科学家的感人事迹触动学生的10项具体内容及认可度”等方面对教学效果进行评价。结果　肯定授课形式,且认为此形式有助于提高科学探索兴趣的学生均占到95.8%,认为所融入的人文精神对今后学习、生活和工作有所触动的学生占87.5%;对科学家感人事迹触动学生的10项内容持肯定态度的学生占77.1%~89.6%,其中肯定比例最低和最高的分别为“甘于寂寞、默默耕耘、无私奉献的精神”和“尊重他人及其科研成果,同时又具有挑战科研权威的勇气”。结论　将科研案例隐含的德育素材融入“实验中医学”教学的形式和效果均较好,基本达到了教学目标,但仍有提升的空间。     

个性化辅导在实验中医学探究性学习中的实践

通过在实验中医学课程考核方式中引入探究性学习实践,发现学生在理论向科研实践过渡的过程中,暴露出的一系列问题.由此,在学生探究性学习基础上,加入个性化辅导的教学环节,针对每名学生的探究性学习报告,评价其科研设计的优势及薄弱环节、分析问题原因、找到解决思路,帮助学生构建完整的科研思维框架.结果 显示,个性化辅导有助于学生对...     

任务驱动教学法在大学生“科创中阶训练”课程中的应用

在上海新型冠状病毒肺炎严重时期,我校全部课程转为在线授课。据此,我们在中医学九年制屠呦呦班大二学生中尝试采用任务驱动教学法开展“科创中阶训练”课程的在线教学,即教师提出问题(任务)——学生完成任务——师生交流讨论——教师总结的教学形式,取得了较好的效果。调查问卷显示,86.67%的学生认可这种教学形式,66.67%的学生觉得教学内容和进度安排合理;几乎所有的学生认为该课程对激发科研兴趣、形成科研思维、提升科研相关能力、形成创新和开拓精神、促进团队协作等方面具有较大帮助。针对部分学生反映课程安排比较紧、自主探索学习时间偏长的问题,后期将进行相应的优化和改进。