抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10的新型单克隆抗体的制备及其临床应用

目的 制备抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP-10)特定抗原肽的单克隆抗体,为建立结核病临床早期诊断的免疫学方法奠定物质基础.方法 设计并合成结核分枝杆菌CFP-10第53 ～ 66位氨基酸(14肽AAVVRFQEAANKQK)作为特定的抗原肽序列,经免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测、多次有限稀释亚克隆建立能稳定分泌抗结核分枝杆菌特异抗原肽单克隆抗体的杂交瘤细胞系,纯化该单克隆抗体,进行免疫球蛋白亚型分析,并鉴定分析该单克隆抗体在蛋白质免疫印迹法(Western blotting)、免疫沉淀法和ELISA检测中的应用效果.共检测结核分枝杆菌培养上清样本38份,非结核分枝杆菌培养上清样本20份,结核性胸水样本32份,非结核性胸水样本24份以及健康对照血清样本20份.结果 单克隆抗体免疫球蛋白亚型分析显示该杂交瘤细胞系产生的抗体类型为IgG1和κ型.该抗结核分枝杆菌CFP-10特异性单克隆抗体可成功用于Western blotting和免疫沉淀法分析.ELISA定量检测显示,该特异性抗体检测结核分枝杆菌的敏感性为78.6％ (55/70),特异性为92.2％ (59/64).结论 CFP-10特定抗原肽单克隆抗体用于结核分枝杆菌检测有较高的敏感性和特异性,可用于结核病的早期诊断.     

活性氧簇与糖尿病肾病

活性氧簇(ROS)是高血糖引起肾脏病变的重要介导因素。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶途径和线粒体途径及晚期糖基化终末产物均参与高血糖状态下ROS的产生。ROS可激活蛋白激酶C(PKG)，而PKC通过活化蛋白激酶K，转录因子如核因子-κB、活化蛋白-1来达到对糖尿病时肾脏的损伤。抗氧化剂可能对糖尿病肾病的防治有作用。     

糖尿病肾病分期证候分布特点研究

目的 观察糖尿病肾病(DN)中医证候分布规律,为进一步研究该病的病因病机及证候特点提供依据.方法 将180例DN患者分为Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ3期,按照量表的制作方法,制定DN中医证候问卷,对患者进行了分层、横断面调查,对所得数据进行频数统计.结果 Ⅲ期以气虚证、阴虚证表现多见,兼有内热证、血瘀证、痰湿证表现;Ⅳ期在Ⅲ期基础上出现了血虚证、阳虚证表现,还可兼见水湿证、痰湿证、内热证、热结证、血瘀证的表现.Ⅴ期本虚更甚,还可兼有气滞证、郁热证、湿浊证、血瘀证、热结证等多种表现.结论 DN中医证候具有本虚标实的特点,随着病情进展,标实证候趋于多样,血瘀、湿邪贯穿病程始终.     

基于“症”的2型糖尿病中医证候聚类分析

目的:探索2型糖尿病中医证候分布规律和方法,为进一步研究该病的病因病机及证候特点提供依据。方法:按照量表的制作方法,制定糖尿病(糖尿病肾病)中医证候问卷,对180例2型糖尿病患者进行了调查,对所得数据进行频数统计和聚类分析。结果:出现频率大于50%的症状条目中,本虚证表现以气虚和阴虚证为主,标实证表现以内热和痰湿为主;进一步对症状条目进行聚类分析,得到2型糖尿病的7个证候类型。结论:2型糖尿病本虚证中,气虚证和阴虚证,阴虚证和阳虚证并见,也有单纯气虚证或单纯阴虚证。标实证中,热证普遍存在,也兼有血瘀证。从症状出发,运用聚类分析进行中医证候研究的方法具有可行性。     

糖尿病肾病分期证候分布与聚类分析探索

目的:基于疾病分期,探索糖尿病肾病(DN)中医证候分布规律和研究方法,为进一步研究该病的病因病机及证候特点提供依据。方法:按照量表的制作方法,制定DN中医证候问卷,对180例患者进行了分层、横断面调查,对所得数据进行频数统计和聚类分析。结果:Ⅲ期以气虚、阴虚表现多见,兼有内热、血瘀、痰湿;Ⅳ期在Ⅲ期基础上出现了血虚、阳虚,还可兼有热结、湿浊表现。V期本虚更甚,还可兼有气滞、郁热等多种表现。对症状条目进行聚类分析,得到8种证候组合。结论:DN中医证候具有本虚标实的特点,血瘀证贯穿病程始终,证素组合多样,应用聚类分析方法具有可行性。     

活性氧簇与糖尿病肾病

活性氧簇(ROS)是高血糖引起肾脏病变的重要介导因素.还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶途径和线粒体途径及晚期糖基化终末产物均参与高血糖状态下ROS的产生.ROS可激活蛋白激酶C(PKC),而PKC通过活化蛋白激酶K,转录因子如核因子-κB、活化蛋白-1来达到对糖尿病时肾脏的损伤.抗氧化剂可能对糖尿病肾病的防治有作用.     

肾消方对糖尿病肾病大鼠肾脏NADPH氧化酶表达的影响

目的：探讨肾消方对糖尿病肾病大鼠肾脏NADPH氧化酶表达的影响。方法：单肾切除加链脲佐茵素（STZ）腹腔注射制作糖尿病肾病动物模型。实验分正常组、模型组、西药对照组和肾消方组,两给药组分别予以中药肾消方和厄贝沙坦干预治疗16周,检测大鼠血糖、血脂、肾功变化,WesternBlot测定大鼠肾组织NADPH氧化酶亚单位p22phox蛋白表达,化学比色法测定肾皮质内Cu,Zn-SOD含量,光镜观察肾脏病理变化。结果：糖尿病肾病大鼠血糖、血脂、SCr、BUN、24小时尿蛋白、肾脏p22phox蛋白表达显著增高,而肾皮质内Cu,Zn-SOD活性降低;厄贝沙坦和肾消方能从不同程度上逆转糖尿病大鼠上述各项指标的变化,但二者无显著差异。结论：肾消方通过显著降低糖尿病大鼠肾脏氧化应激水平,减轻氧化应激对肾组织的损伤,保护肾脏。     

Association of Chinese medicine constitution susceptibility to diabetic nephropathy and transforming growth factor-β1 (T869C) gene polymorphism

Objective  

To explore the association of Chinese medicine constitution susceptibility to diabetic nephropathy (DN) and transforming growth factor (TGF)-β1 (T869C) gene polymorphism.     

益气温阳化瘀法对糖尿病肾病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的影响

目的:探讨益气温阳化瘀法之肾消方对糖尿病肾病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的影响。方法:单肾切除加链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制作糖尿病肾病动物模型。分别予以中药肾消方和厄贝沙坦干预治疗16周,测定大鼠肾组织PKC活性,检测24 h尿蛋白排出量(Upro),肾脏常规染色光镜观察病理变化。结果:16周时单肾糖尿病大鼠肾组织出现肾小球硬化病理改变,Upro明显升高,细胞膜PKC活性(mPKC)明显升高,细胞浆PKC活性(cPKC)明显降低,mPKC和cPKC比值(M/C)明显升高。肾消方和厄贝沙坦干预治疗显著降低Upro,降低mP-KC和M/C,升高cPKC(P<0.01),改善肾组织病理改变。结论:肾消方对单肾切除STZ糖尿病大鼠具有肾保护作用,可通过抑制PKC的活性进而延缓DN的发生。