《金匮要略》线上线下混合式教学模式建设历程与体会

《金匮要略》的学科属性决定了其教学应是传统与现代教学模式的融合。湖南中医药大学《金匮要略》线上线下混合式教学历经10年建设,边建设边实践,通过实践来验证并改进教学模式,多维度线上资源与多元化线下课程有机融合为整体,教学实践初见成效。构建更科学与全面的形成性评价模式是下一步的重要建设任务。     

左归降糖方对2型糖尿病MKR小鼠脑NF-κB信号通路炎症因子的影响

目的 探讨左归降糖方对高脂饮食2型糖尿病转基因MKR小鼠脑组织NF-κB信号通路炎症因子的影响.方法 30只MKR小鼠随机分为MKR组、MKR高脂组和左归降糖方组;高脂饲料饲养MKR鼠加重体内糖脂代谢紊乱,左归降糖方组干预治疗高脂饮食MKR鼠4周,测定小鼠空腹血糖、血清胰岛素和血脂浓度,RT-PCR检测小鼠脑组织IKB、TNF-α和MCP-1基因mRNA表达变化.结果 与普通MKR小鼠比较,高脂饮食MKR小鼠空腹血糖、血清胰岛素、总胆固醇水平升高,甘油三酯水平下降,脑组织TNF-α和MCP-1基因mRNA表达水平均增加;左归降糖方降低高脂饮食MKR小鼠空腹血糖、血清胰岛素、总胆固醇以及甘油三酯水平,同时降低脑组织TNF-α、MCP-1基因mRNA表达水平.结论 左归降糖方可通过抑制高脂饮食MKR小鼠脑组织NF-κB信号通路的激活来降低炎症损伤,对脑组织具有保护作用.     

左金丸抗幽门螺杆菌感染的分子网络调控机制研究

目的基于网络药理学和生物信息学方法探究左金丸抗幽门螺杆菌(Hp)感染的分子网络调控机制。方法通过中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)检索左金丸化学成分,筛选并预测其入血活性成分和作用靶点,检索疾病数据库中与Hp感染相关的作用靶点,构建左金丸成分靶点与疾病靶点的交互网络,获得左金丸抗Hp的特征性基因;通过DAVID6.8数据库对上述特征性基因进行GO功能富集和KEGG通路富集分析;利用Cytohubba筛选出左金丸抗Hp感染的关键靶点。结果通过TCMSP筛选、预测得到左金丸32个入血活性成分和197个作用靶点。GO分析共得到199条富集结果,其中生物过程包含炎症反应、RNA信号转录、信号传导等152条,细胞组分包含细胞核、细胞外基质、蛋白复合物等19条,分子功能包含细胞因子活性、DNA结合、ATP结合等28条。KEGG分析结果显示,Jak-STAT信号通路、T细胞受体信号通路、细胞周期信号通路、Wnt信号通路等65条通路与左金丸抗Hp感染密切相关。经Cytohubba筛选得到CXCL8、IL10、IL4、VEGFA、MMP9等10个关键基因。结论左金丸抗Hp感染具有多成分、多靶点、多通路协同作用的特点,可为其活性成分研究和抗Hp药效及机制研究提供依据。     

左归双降方对葡萄糖、胰岛素、低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的干预作用

目的 观察左归双降方提取液对葡萄糖(Glu)、胰岛素(Ins)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)联合诱导下血管内皮细胞损伤的干预作用与作用机理。方法 以人脐带静脉内皮细胞株 ECV-304 为受试对象,以不同浓度的Glu、Ins、ox-LDL 联合作用 24 h,建立了一种糖尿病血管并发症的体外内皮细胞损伤模型,并在此基础上观测左归双降方提取液(ZGSJF)对该细胞损伤模型的调节作用。各试验组细胞继续培养 48 h 后分别检测细胞活性及其细胞培养液中的内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)以及细胞粘附因子(ICAM-1)的含量。结果 细胞继续培养 48h 后,模型组较正常组细胞活力明显下降(P<0.01),ET-1 及 ICAM-1 含量明显升高(P<0.01),NO 含量明显下降(P<0.01)。而不同剂量的 ZGSJF 给药后能显著改善细胞活力(与模型组比较,P<0.05),降低 ET、ICAM-1 及升高 NO 含量(与模型组比较,P<0.01),且显著优于对照药达美康。结论 左归双降方对血管内皮细胞具有一定的保护作用,而这一作用可能是通过促进内皮细胞分泌舒张性因子 NO、减少血管收缩因子 ET-1 的分泌、抑制与炎症反应相关的细胞粘附过程等途径,从而改善糖尿病合并高血压的血管损伤。     

降糖益肾方对MKR鼠2型糖尿病肾病早期的保护作用

目的探讨滋阴益气、补肾活血解毒法组方(降糖益肾方)对MKR转基因小鼠2型糖尿病肾病早期的保护作用。方法15周龄MKR鼠24只,根据性别和空腹血糖分层,随机分为3组,即模型组、中药组[降糖益肾方16.72g/(kg·d)]、西药组[格列喹酮4.33mg/(kg·d)+贝那普利1.44mg/(kg·d)],同期另设C57BL/6野生型小鼠为正常组。用药组分别给予相应剂量药物灌胃,模型组和正常组给予等容量蒸馏水灌胃。30d后,同步观察各组小鼠的空腹血糖、尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白(ELISA法)的含量,电镜观测肾脏病理改变。结果给药30d后,降糖益肾方能显著降低MKR鼠空腹血糖、尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白的排泄,与给药前比较,P0.01;与模型组比较,P0.01。电镜结果显示:降糖益肾方组肾小球基底膜增厚减轻,系膜区基质堆积减少。结论降糖益肾方能显著改善MKR鼠空腹血糖、降低尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白的含量、改善肾脏的病理损害,从而延缓MKR鼠肾脏病变的进一步发展。     

转化医学用于张崇泉学术经验传承探讨

目的：探寻名老中医学术经验的传承模式与其经验方的推广应用模式。方法采用转化医学的研究模式,结合中医学特点,采用从临床到基础（实验）再到临床的研究方式,以前瞻性与回顾性相结合的临床研究方法,运用现代信息技术和手段,采用数据挖掘方法,系统整理张老调补五脏法治疗冠心病、血管性痴呆等老年病的学术经验。结果阐明了张老调补五脏法的理论渊源,提供了张老调补五脏法治疗老年病的理论支撑和临床依据。结论转化医学的研究模式可用于学术经验的总结。     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞凋亡及Caspase-12表达的影响

目的 探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及内质网应激凋亡因子Caspase-12 mRNA和蛋白表达水平的变化及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用.方法 将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组,25 mmol/L葡萄糖,10％空白血浆)、高糖组(B组,200 mmol/L葡萄糖,10％空白血浆)、左归降糖益肾方含药血浆组(C组,200 mmol/L葡萄糖,10％含药血浆),4-苯基丁酸含药血浆组(D组,200 mmol/L葡萄糖,10％含药血浆).培养48 h后,采用免疫荧光细胞化学法、流式细胞术检测足细胞凋亡情况;Western blot法、RT-PCR法分别检测Caspase-12蛋白或mRNA表达水平的变化.结果 与A组比较:在高糖状态下B组足细胞凋亡率、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与B组比较:C组、D组足细胞凋亡率,Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与C组比较:D组足细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P＜0.05);但Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 Caspase-12表达上调,是足细胞凋亡的分子机制之一;10％左归降糖益肾方含药血浆可能通过降低Caspase-12的表达水平,从而保护足细胞.     

茵陈蒿汤对MKR鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病的作用

目的 探讨茵陈蒿汤对MKR鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病的作用机制。方法 8周龄MKR小鼠40只高脂喂养8周后,随机分为模型组、茵陈蒿汤原方剂量组（17.16 g·kg^-1）,茵陈蒿汤教材剂量组（4.68 g·kg^-1）,二甲双胍+辛伐他汀组［（65+2.6）×10^-3 g·kg^-1）］,同龄MKR鼠10只作为空白组,FVB鼠10只分别作为正常组。各组灌胃给药8周后,测定小鼠肝脏湿重,口服糖耐量（OGTT）,血清炎性因子白细胞介素-6（IL-6）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,血脂和肝功能的变化,透射电镜和苏木素-伊红（HE）染色对肝脏组织形态进行观察,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏组织Toll样受体4（TLR4）,髓样分化因子88（MyD88）,核转录因子-κB（NF-κB）蛋白表达变化。结果 与模型组比较,给药组小鼠肝湿重指数显著降低（P<0.01）,OGTT较模型组明显有所改善（P<0.05）,血清中IL-6,TNF-α含量显著降低（P<0.01）,形态学改变上,茵陈蒿汤对肝细胞结构有保护作用,减少肝细胞脂肪样变性;茵陈蒿汤可以明显下调T2DM合并NAFLD模型小鼠肝脏组织TLR4,MyD88,NF-κB蛋白含量（P<0.05）,且对于TLR4,NF-κB的下调,茵陈蒿汤原方剂量明显优于茵陈蒿汤剂量（P<0.05）。结论 茵陈蒿汤能降低炎症因子水平,肝组织TLR4,MyD88,NF-κB的表达水平,改善肝脏病理损伤,干预MKR鼠T2DM合并NAFLD疾病状态,具有一定保护肝功能,降低血脂以及延缓肝脏炎症反应的作用。     

参苓白术散调控TLR4/NF-κB通路抑制LPS诱导心肌细胞炎性损伤的机制

目的 基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)信号通路探讨参苓白术散含药血清对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导H9C2心肌细胞炎性损伤的调控机制。方法 将分化完全的H9C2心肌细胞分为空白血清组、模型组、参苓白术散含药血清组、TLR4抑制剂（TAK-242）组,每组6个复孔。除空白血清组外,其余各组以10μg·m L-1 LPS处理细胞,构建心肌细胞炎症损伤体外模型。空白血清组、模型组及TAK-242组以10%空白血清进行培养,参苓白术散含药血清组用10%含药血清培养,均培养24 h。采用CCK-8法测定各组细胞增殖情况;采用ELISA法及免疫荧光法检测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)含量及蛋白表达水平;采用Western blot法检测TLR4、NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(degradation of proteinκB-α, IκBα)...