胞嘧啶脱氨酶的原核表达和多克隆抗体的制备

目的：在原核系统中表达并纯化大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase,CD)，制备鼠抗大肠杆菌CD多克隆抗体，方法：亚克隆CD基因到原核表达载体pMAL-c2和pBV222中，并转化入大肠杆菌DH5α内，诱导表达并纯化MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果：通过重组质粒的酶切筛选出重组阳性克隆，成功地表达和纯化出MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD成功制备了鼠抗CD多克隆抗体，并用6his-CD和GST-CD重组蛋白进行Western印迹分析，证实了抗体的正确性，结论：应用多克隆抗体可以检测体内外CD基因的表达，为临床前和临床上深入开展CD基因的生物治疗研究提供重要的实验材料。     

骨科学重要新闻

第47届骨科研究年会纪要 第47届骨科研究学会(ORS)于2001年3月4日落幕。其中有1 107篇研究论文发表。现将会议的内容简要介绍如下。 1 人工关节材料 多数与改善超高分子聚乙烯性质的研究有关。Richard等测量超高分     

RP-HPLC法测定转基因贯叶连翘植株中褪黑素

目的 建立测定褪黑素的反相高效液相色谱紫外分析方法，分析并测定通过组培获得的贯叶连翘不同转基因株系及其亲本植株的褪黑素。方法 以Symmetry C18 (150 mm×4.6 mm，5.0 μm)为色谱柱；100 mmol乙酸铵甲醇(80∶20)为流动相，体积流量为0.8 mL/min；检测波长为265.8 nm，灵敏度为2.00 AUFS。结果 褪黑素浓度在20～500 ng/mL线性关系良好(R2=0.999 2)，平均加样回收率为98.09%(n=6)，RSD为2.21%，最小检出量为1.0 ng/mL。褪黑素峰保留时间约为8.8 min。结论 该方法可以简便准确分析不同株系贯叶连翘中的褪黑激素的量；贯叶连翘YXu55(含庆大霉素抗性标记和AANAT-HIOMT基因)转基因株系的褪黑素的量均高于pZP122(仅含庆大霉素抗性标记，不含AANAT-HIOMT基因的空白质粒)转基因株系和未转基因的对照植株；而pZP122转基因株系褪黑素的量跟未转基因的对照植株的量几乎相等。     

抗成长型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

目的：制备抗-戊型肝炎病毒的单克隆抗体，并将其用于分析戊型肝炎病毒不同毒株结构蛋白的抗原表位。方法：采用来自墨西哥株（Mexican strain)的戊型肝炎病毒重组蛋白（p166Mex)免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，经酶联免疫吸附试验（ELISA）法筛选阳性克隆，并将获得的单克隆抗体与戊型肝炎病毒缅甸株（Burma strain)和美国株（USA strain)的重组蛋白（p166Bur,p166US)进行交叉反应测定。结果：最终获得4株能稳定分泌抗-p166Mex的杂交瘤细胞株。即D8G10,E5E12,D4A3,B7E6。其中D8G10，E5E12和B7E6细胞株的培养上清液，还能分别与p166Bur和p166US重组蛋白发生阳性反应。结论：利用已获得的抗-p166Mex单克隆抗体，初步确定3种不同的戊型肝炎病毒重组蛋白（p166Bur,p166US,p166Mex)含有一种共同的抗原表位。     

聚丙烯酰胺水凝胶注射美容的临床与组织学评估

目的　探讨聚丙烯酰胺水凝胶注射后并发症的临床与组织学特点。方法　对 1998年至 2 0 0 3年接诊的 5 2例在外院注射了聚丙烯酰胺水凝胶 ,并引起并发症患者的临床资料进行了总结与组织学研究。为了便于比较 ,另选 12例 1988年～ 1994年期间接受液态硅胶注射的患者取出的组织病理切片与之对照研究。结果　聚丙烯酰胺水凝胶注射后并发症以局部硬结最多见 ,而且多发生在注射后 1～ 2年左右时间里。人体组织对注射的聚丙烯酰胺水凝胶的反应为多核异物巨细胞增生 ,并形成肉芽肿。与液态硅胶比较 ,注射的聚丙烯酰胺水凝胶引起组织的淋巴细胞反应弱 ,材料周围的纤维包膜较薄。机体内长期存留的聚丙烯酰胺水凝胶可能会引起局部组织变性反应。结论　聚丙烯酰胺水凝胶作为软组织填充剂的安全性需要进一步研究。     

Ⅰ型胶原膜、胞外基质提取物膜体外构建人工真皮能力比较

比较Ⅰ型胶原与胞外基质(extracellularmatrix,EM)提取物冻干后形成的膜(EM膜)在体外构建人工真皮的能力,以选择一种更有利于人工真皮形成的支架材料。方法分别使用小牛真皮部分提取的Ⅰ型胶原蛋白和胞外基质提取物冻干后制备基质网架,植入皮肤成纤维细胞,形成人工真皮。用扫描电镜观察I型胶原膜和EM膜的表面形态结构;选取不同的时间点,对种植于两种支架材料上的细胞进行计数,并利用间接ELISA方法检测人工真皮复合物中的细胞Ⅰ型胶原分泌情况,通过统计学的分析手段,对细胞的生长情况做出判断;用组织学方法观察人工真皮的形成情况。结果扫描电镜观察结果,两种膜在外观形态上无明显差异;细胞在EM膜上的增殖速度较Ⅰ型胶原膜快;ELISA分析显示,EM-细胞复合物中的成纤维细胞能够分泌更多的Ⅰ型胶原;与Ⅰ型胶原膜相比,EM在培养液中的降解更为缓慢,种植后的成纤维细胞在EM膜上生长旺盛,细胞层次明显多于前者,形成了较为明显的真皮样组织。结论EM膜适于成纤维细胞的生长,体外降解速率慢,是一种较Ⅰ型胶原膜更为理想的真皮支架材料。     

戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同

目的：制备戊型肝炎病毒(HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白(p166Bur和p166Mex)的单克隆抗体(McAbs)，用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法：将免疫BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得分泌抗-p166Bur和抗-p166Mex McAbs的杂交瘤细胞株，然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEV ORF2编码蛋白p166的免疫反应性。结果：获得4株杂交瘤细胞株，即分泌抗-p166Bur McAbs的2G2、2B1以及分泌抗-p166Mex McAbs的D8G10和E5E12，其中2B1分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合，而其余3株分泌的McAbs既能与Ⅰ、Ⅱ基因型HEV的p166重组蛋白发生反应，也能与Ⅲ、Ⅳ基因型的p166蛋白反应。结论：HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。     

输血反应与临床处理

输血是临床治疗的重要组成部分 ,是改善和维持体内环境平衡的重要措施之一。但是输血可传播某些疾病 ,也可引起不良反应。临床上常见的是输血免疫反应 ,免疫反应有即发反应和迟发反应 ,本文只讨论即发反应 ,即发反应是在输血当时或输血后 2 4小时内发生的反应 ,主要有以下几种。1　发热反应较常见 ,在输血期间或输血后 1～ 2小时内发生。主要表现为寒战、发热、头痛、心慌。引起发热反应的主要原因有 :(1)热原反应 ,血内有致热原 ;(2 )免疫反应 ,与多次输入ＨＬＡ不相合的白细胞、血小板有关 ;(3)溶血性输血反应和细菌污染性输血反应等早期…     

Lenke5型青少年特发性脊柱侧凸腰椎与骨盆参数的相关性

背景:目前对于Lenke5型主腰弯脊柱侧凸患者腰椎与骨盆的研究仅局限于冠状面及矢状面,尚未明确侧弯与骨盆间的三维关系。目的:分析Lenke5型主腰弯脊柱侧凸患者腰椎侧弯对骨盆的影响,研究腰椎与骨盆三维空间位置的相关性。方法:回顾性分析上海交通大学医学院附属第九人民医院3D打印接诊中心2019年1月至2023年9月收治的60例Lenke5型主腰弯脊柱侧凸患者的影像学数据,包括Cobb角、冠状骨盆倾斜、腰椎前凸角、左右骨盆髋骨宽度比值、脊柱旋转角度、骨盆倾斜、骶骨斜率、骨盆入射角、冠状畸形角比率、矢状畸形角比率、C7铅垂线与骶骨中垂线的距离、椎体顶点平移、冠状骶骨倾角,将信息汇总为数据库,运用SPSS 22.0软件采用Spearman相关性分析和线性回归分析Lenke5型主腰弯青少年特发性脊柱侧凸患者腰椎与骨盆的相关数据。结果与结论:①Cobb角与冠状畸形角比率、椎体顶点平移距离、脊柱旋转角度呈高度正相关关系(r=0.91,r=0.841,r=0.736);②冠状畸形角比率与椎体顶点平移距离呈高度正相关关系(r=0.737),与C7铅垂线到骶骨中垂线的距离呈中度正相关关系(r=0.514),与矢状畸形角比率呈中度负相关关系(r=-0.595);③腰椎前凸角与矢状畸形角比率呈高度正相关关系(r=0.942),与冠状畸形角比率呈中度负相关关系(r=-0.554);④Cobb角与冠状骨盆倾斜角、冠状骶骨倾角呈中度正相关关系(r=0.522,r=0.534),C7铅垂线到骶骨中垂线的距离与冠状骨盆倾斜角呈中度正相关关系(r=0.507);椎体顶点平移距离与冠状骨盆倾斜角、冠状骶骨倾角呈中度正相关关系(r=0.507,r=0.506),腰椎前凸角与骶骨斜率、骨盆入射角呈中度正相关关系(r=0.512,r=0.538);矢状畸形角比率与骶骨斜率、骨盆入射角呈中度正相关关系(r=0.614,r=0.621);⑤结果发现腰椎与骨盆相对位置在水平面、矢状面、冠状面上息息相关,当腰椎出现侧凸、旋转时,骨盆的相对位置也会变化进行代偿,这表明矫正脊柱侧凸的同时,也不能忽略骨盆的矫正。     

半边止痒汤坐浴治疗混合痔术后肛周湿疹湿热下注证临床研究

目的 观察半边止痒汤坐浴治疗混合痔术后肛周湿疹湿热下注证的临床疗效。方法 将94例混合痔术后肛周湿疹湿热下注证患者按照随机数字表法分为2组,对照组47例予曲安奈德益康唑乳膏外用治疗,治疗组47例予半边止痒汤坐浴治疗。2组均治疗2周后统计近期疗效,并于治疗结束后3个月统计远期疗效,比较2组治疗前及治疗2周后中医证候(包括瘙痒、渗液、皮损、口渴、小便短赤、大便干燥及舌脉)评分、特应性皮炎评分(SCORAD)、心理弹性量表(CD-RISC)评分、皮肤病生活质量指数(DLQI)评分及血清总免疫球蛋白E(IgE)水平变化情况。结果 治疗组近期总有效率95.74%(45/47),远期总有效率91.49%(43/47),对照组近期总有效率78.72%(37/47),远期总有效率61.70%(29/47),治疗组近期疗效及远期疗效均优于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较,2组治疗后中医证候瘙痒、渗液、皮损、口渴、小便短赤、大便干燥及舌脉评分均降低(P<0.05),且治疗组治疗2周后中医证候各项评分均低于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较,2组治疗2周后SCORAD评分及D...