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恙虫病东方体山西株56kD蛋白基因DNA疫苗的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
我们构建了恙虫病东方体山西株(Sxh951)56kD蛋白基因DNA疫苗(pc-DNA3.1-Tsa56),该重组质粒转染的COS7细胞经IFA和WB染色均为阳性,表明该重组质粒能够在哺乳动物细胞中表达。为了探讨该DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果,将6周龄:BALB/c鼠随机分成5组,每组10只。每只小鼠两只后腿肌肉多点注射0.25% 相似文献
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应用Ⅰ-ELISA检测猪包虫病特异抗体的研究魏文进,叶志远,尚太成,王永辉近年来,国内外学者对猪包虫病的血清学诊断方法进行了大量研究,建立了很多方法,但均存在程度不同的假阳性反应。为提高其特异性,我们采用亲和层析技术建立Ⅰ-ELISA法,基本消除了假... 相似文献
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贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白基因的克隆与表达 总被引:1,自引:1,他引:1
目的 克隆和表达贝氏柯克斯体 (Coxiellaburnetii) 2 7kDa外膜蛋白基因 (com1 )。方法 采用PCR方法 ,从质粒pGEM -T/com1扩增出Com1基因片段 ,经鉴定后 ,将其克隆于原核表达载体 pQE30 ,构建成重组质粒 pQE30 /com1 ,IPTG诱导表达。结果 (1 )获得长约 760bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知com1序列相同。 (2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 2 7kDa处有表达条带。经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌体蛋白的 1 7 2 %。 (3)经分析 ,有较好的抗原性。 (4)表达菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要存在于包涵体中。结论 贝氏柯克斯体com1基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,所表达的重组蛋白能与Q热抗体发生反应 相似文献
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贝氏柯克斯体34×103重组外膜蛋白的免疫保护性 总被引:2,自引:0,他引:2
目的原核细胞表达贝氏柯克斯体34×103外膜蛋白基因,评价34×103重组外膜蛋白的免疫保护性.方法用PCR从我国贝氏柯克斯体分离株的基因组中扩增34×103外膜蛋白基因,用该基因与原核表达质粒重组,构建重组表达质粒;用IPTG诱导重组质粒在大肠杆菌细胞内表达重组蛋白.用重组蛋白皮下接种免疫BALB/c小鼠2次,在加强免疫后的第28天,用ELISA法检测小鼠的血清特异性抗体水平以及作体外脾淋巴细胞增殖试验检查小鼠的特异性细胞免疫水平;用10 ID50贝氏柯克斯体腹腔注射攻击免疫小鼠,攻击后第7天病理学检查小鼠脏器的组织病变和染色镜检脾脏的贝氏柯克斯体.结果SDS-PAGE和免疫印迹分析证明重组质粒转化的大肠杆菌产生了34×103重组蛋白,重组蛋白能与贝氏柯克斯体感染小鼠血清发生特异性反应.ELISA法检测出免疫小鼠血清中有高滴度的抗重组蛋白抗体,免疫小鼠的体外淋巴细胞增殖水平显著高于非免疫小鼠.组织病理学检查发现免疫小鼠的肺、肝、脾无明显病变,仅个别小鼠脾脏存在少量柯克斯体,而非免疫小鼠的肺、肝、脾病变十分明显,脾脏肿大并含有大量的柯克斯体.结论重组34×103外膜蛋白具有的免疫保护性,能够诱导机体产生有效的抗贝氏柯克斯体的体液和细胞免疫应答. 相似文献
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恙虫病东方体47kDa蛋白基因部分片段的克隆与表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot) 4 7kDa保护性抗原蛋白。 方法 采用PCR方法 ,从OtKarp株基因组DNA中扩增出 4 7kDa蛋白基因片段 ,鉴定后将该片段克隆于原核表达载体 pBV2 2 0 ,构建成重组质粒pBV -4 7。用该重组质粒转化E coli,转化子在 4 2℃诱导表达并对其鉴定。结果 (1)获得长约 14 30bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知 4 7kDa基因序列相同 ;(2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 4 0× 10 3 处有表达带 ;(3)经薄层扫描分析 ,目的蛋白占全菌蛋白的 19% ;(4)免疫印迹实验证明其具有免疫反应性。结论 获得了 4 7kDa基因片段 ,并在大肠杆菌中实现了表达 ,表达产物具有免疫反应性。 相似文献
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目的:表达恙虫病东方体(Orientia tsutsugomushi)Karp株56000表面蛋白,探索其作为诊断抗原的可能性。方法:采用PCR方法,从Ot.Karp株菌种基因组DNA中扩增出56000成熟蛋白基因片段,将该片段克隆于原核表达载体pQE30,构建重组质粒pQE30/56,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测目的蛋白的表达。结果:(1)获得长约l500bp的Ot.Karp株56000外膜蛋白基因;(2)SDS-PAGE电泳和免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子质量约为56000的独特蛋白带;(3)表达后菌体超声破碎后,目的蛋白主要以包涵体形式存在;(4)重组表达质粒序列分析结果显示,pQE30/56中插入的基因片段的序列与已报道的Ot.Karp株56000外膜蛋白基因序列基本一致。结论:获得了Ot.Karp56000蛋白基因,并在大肠杆菌中实现了表达,表达的重组蛋白具有免疫反应性。 相似文献