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目的 探讨转基因肝星状细胞株CFSC/HGF对大鼠肝细胞生长的支持作用。方法将大鼠原代肝细胞培养于稳定表达肝细胞生长因子(HGF)的肝星状细胞株CFSC/HGF所构建的饲养层上,连续动态观察肝细胞的形态、超微结构、白蛋白分泌、尿素合成以及吲哚氰绿摄取排泌功能的变化,同时与传统胶原贴壁培养的肝细胞进行比较,并通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HGF受体c-Met表达的变化。结果共培养的肝细胞体外培养至7~10d时细胞增殖、白蛋白分泌及尿素合成达到峰值,以后逐渐下降,至35d时仍保持一定的存活和功能。与传统胶原上培养的肝细胞相比,其寿命、形态和功能的维持时间明显延长;RT-PCR结果显示,与CFSC/HGF饲养层细胞共培养1周后,肝细胞表面c-Met表达上调2.23倍。结论转基因肝星状细胞株CFSC/HGF对肝细胞较长时间内保持高活性、高密度的生长有显著的支持作用,CFSC/HGF诱导的肝细胞表面c-Met表达上调可能参与了该支持作用。 相似文献
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目的超高压技术作为一种有效的灭菌消毒的物理手段,对灭活血浆中模型病毒的条件及灭活效果探讨。方法取正常人血浆按10%的比例分别加入PRV、PRV、VSV、PV1、PPV等指示病毒混匀,放在超高压试验机的样品仓中,以不同的压力和不同的时间进行处理。用微量细胞病变法检测超高压处理前后各组样品的病毒滴度。结果 600 Mpa处理10 min、500 Mpa处理20 min、400 Mpa处理60 min、350 Mpa处理90 min可灭活PRV、PRV、VSV等3种脂包膜指示病毒达4 lgs以上。结论该方法能够有效灭活的病毒是HBV和HCV的指示病毒。符合"血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则"中病毒灭活工艺有效的要求。 相似文献
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目的观察冷冻研磨获得的脱细胞真皮基质粉(ADMP)生物学性状,探索高纯度且保留生物活性的异种(猪)ADMP对表皮细胞和成纤维细胞生长的支持及在皮肤创伤修复中的应用。
方法选取幼龄长白猪背部皮肤,经生物酶法脱细胞、冷冻干燥后经过不同冷冻研磨程序得到异种(猪)ADMP,再由60钴辐照获得无菌异种(猪)ADMP;通过扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察异种(猪)ADMP颗粒大小及胶原形态,确定适合应用的研磨程序;通过MTT法检测HaCaT细胞和BJ人皮肤成纤维细胞在不同浓度异种(猪)ADMP包被下的黏附作用,确定异种(猪)ADMP实现细胞最大黏附的浓度范围;DMEM培养液基添加异种(猪)ADMP为实验组,单纯DMEM培养液基为对照组,使用实时细胞分析技术分析BJ人皮肤成纤维细胞迁移指数,验证异种(猪)ADMP对成纤维细胞的促迁移作用;原代表皮细胞接种在异种(猪)ADMP培养液8 d,绘制增殖曲线,检测异种(猪)ADMP对原代表皮细胞的促增殖作用,同时免疫荧光检测原代表皮细胞表面成熟与分化蛋白的表达。对数据进行Student′s t-检验。
结果1、2、3、5、7、10次循环研磨获得异种(猪)ADMP,肉眼可见全部为白色、无块状,其中1、2、3次循环呈较粗颗粒;5、7、10次循环呈现集中均匀趋势,粒径分布在0~12 μm之间。其中5次循环粒径(13.00±2.10) μm与7次循环[(6.00±0.96) μm比较,差异有统计学意义(t=6.093,P=0.0002)。异种(猪)ADMP透射电子显微镜下发现,不同循环次数获得的异种(猪)ADMP均能保留大量胶原分子。BJ人成纤维细胞和HaCaT细胞随包被浓度的增加,细胞黏附作用不断增强,浓度高于750 μg/cm2,无明显变化。实时细胞分析技术检测BJ人皮肤成纤维细胞在DMEM培养液基对照组培养液72 h后的迁移指数为1.21±0.10,而异种(猪)ADMP培养液基试验组的迁移指数为3.66±0.11,两组比较差异有统计学意义(t=22.24,P=0.002)。在异种(猪)ADMP培养液的原代表皮细胞形态统一增殖迅速,对照组出现一定比例的分化细胞,试验组与对照组第5天细胞数分别为(4.11±0.28)×105、(1.10±0.12)×105个,两组比较差异有统计学意义(t=13.51,P=0.005);第8天细胞数分别为(5.00±0.48)×105、(3.05±0.30)×105个,两组比较差异有统计学意义(t=4.87,P=0.039),增殖曲线显示试验组在接种即日培养液至第5天,一直处于指数增长期。荧光染色中异种(猪)ADMP培养液的原代表皮细胞E-cad全部表达,少量表达角蛋白10,整合素α6几乎全部强阳性,角蛋白14全部表达并有部分强阳性,Ki-67抗原表达率高。
结论通过生物酶解和冷冻研磨获得的异种(猪)ADMP对参与皮肤创伤修复最重要的表皮细胞和成纤维细胞,具有促进其增殖和迁移的作用,未来可进一步应用于皮肤创伤修复。 相似文献
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为了解军医大学学员与某部海军陆战旅战士的体能情况,在某海军训练基地采用定量负荷试验方法,比较了196 名军医大学员和180名海军陆战旅战士的PWC170(心率为170次/min时的体力工作能力)值、VO2max(最大摄氧量)以及 体力适应能力评价值。结果表明,被调查对象整体体能状况均较好,但海军陆战旅战士PWC170值、VO2max低于军医大学 员,并分析了其原因。 相似文献
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尿胰蛋白酶抑制剂生产中病毒灭活工艺的效果观察 总被引:1,自引:0,他引:1
目的验证尿胰蛋白酶抑制剂(UTI)生产工艺中采用的60℃水浴10 h和乙醇处理3 h的病毒灭活效果。方法将Sindbis病毒、伪狂犬病毒(PRV)和脊髓灰质炎病毒(PV1)3种指示病毒分别加入不同的UTI原料样品中,进行60℃水浴10 h和乙醇处理3 h,处理不同时间后分别取样,用微量细胞病变法检测不同时间段样品中的病毒残留滴度。结果60℃水浴10 h可灭活(6.503±0.102)LgTCID50/mL的Sindbis病毒,灭活(6.42±0.158)LgTCID50/mL的PRV以及(6.587±0.061)LgTCID50/mL的PV1。乙醇处理3 h后可灭活(5.88±0.204)LgTCID50/mL的Sindbis病毒,灭活(6.378±0.268)LgTCID50/mL的PRV以及(5.963±0.118)LgTCID50/mL的PV1。经两种方法处理后的样品加入细胞经3代盲传均未见细胞病变(CPE)出现。结论UTI生产工艺中采用的60℃水浴10 h和乙醇处理3 h均可灭活所验证的3种指示病毒,灭活效果>6.0 LgTCID50/mL。 相似文献
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慢性感染性脱髓鞘性多发性神经根神经病(CIDP),为一周围神经的慢性、复发性疾病。以感觉性共济失调为主要表现的CIDP报道较少,本文收集1994~1999年6例病人的临床资料进行探讨。本组患者男女各3例,发病年龄17~45岁,平均27.3岁。均行走困难,站立不稳(闭目时较睁眼时明显),龙伯征(+),音叉振动觉和关节位置觉明显减退。缓慢进展型3例,慢性复发型2例,阶梯式进展型1例。2周后腰穿蛋白0.9~1.3g/L,细胞数正常。肌电图检查5例患者,均为双下肢感觉神经传导速度减慢。2例做了腓神经活检… 相似文献
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Shy-Drager综合征(附8例临床分析) 总被引:1,自引:0,他引:1
Shy-Drager综合征(SDS)为多系统萎缩疾病中一种变性疾病,近10年来国内相继报道.但该病少见,误诊较多,我们于1988~1998年诊治8例,现报道如下. 相似文献
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目的探讨和研究r-tPA静脉溶栓在治疗急性脑梗死的治疗效果以及安全性和有效性。方法将该院收治的急性脑梗死患者62例随机分成rtPA组与对照组各为31例。对照组患者运应用低分子右旋糖酐另加复方丹参静脉滴注对于rtPA组患者,给予重组组织型的纤溶酶原激活物rtPA(爱通立),加入到生理盐水中静脉滴注,在90 min内滴完。在次日经过头颅CT证实没有出血以后,再使用低分子肝素每隔12 h进行一次腹部皮下注射,均治疗一周后对比治疗前、治疗后24 h、21 d两组间的差异。结果在患者治疗后24 h和21 d治疗组和对照组对比差异有统计学意义(P<0.01)。经过3个月治疗后,rtPA组临床治愈率为41.9%,对照组的临床治愈率为16.1%,两组中该项指标对比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 r-tPA静脉溶栓对于治疗急性脑梗死患者,治疗效果确切,并具有以安全性和有效性特点,值得临床推广。 相似文献