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目的以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为探针,优化大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶(GST)催化反应的条件,为准确测定GST活性提供依据。方法采用Welch Materials Ultimate TM XB C18反相柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(7∶3),流速0.8 mL.min-1,检测波长238 nm。首先于0.05 mg.mL-1蛋白浓度下,孵育10 min,检测CDNB能否被GST催化发生反应,然后分别在CDNB及CDNB+GSH两种反应条件下,比较不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度的反应差异,选出合理反应条件。结果 CDNB在选定色谱条件下实现了快速分离,且无内源性干扰。CDNB在GST催化下发生了反应;在不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度下,两种反应条件下CDNB反应存在明显差异(P<0.05):CDNB及GSH作为起始条件时反应较少,此外,CDNB反应量与蛋白浓度、孵育时间分别呈线性关系,是优化反应条件的重要依据。结论采用CDNB测定GST活性时,选择合适的CDNB及GSH反应条件能准确地测定GST活性,可用于GST活性测定及相关动力学分析。 相似文献
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[摘要] 目的:以丹皮酚为研究对象,系统分析丹皮酚在体外经大鼠肝微粒体代谢的Ι相以及Ⅱ相代谢产物。方法:借助HPLC-DAD与三重四级杆复合线性离子阱高分辨质谱,采用LightSight软件辅助建立丹皮酚及2,4-二羟基苯乙酮经肝微粒体代谢产物的pMRM-IDA分析方法,分析了丹皮酚在体外经大鼠肝微粒体代谢的Ι相以及Ⅱ相代谢产物。结果:结果发现,丹皮酚在大鼠肝微粒体中经Ι相代谢后产物主要为的4位去甲基的2,4-二羟基苯乙酮和4种氧化代谢产物,而2,4-二羟基苯乙酮Ⅱ相代谢产物主要为4位葡萄糖醛酸化的糖苷化代谢产物。结论:建立了丹皮酚Ι相以及Ⅱ相代谢产物的分析方法,为丹皮酚进一步的代谢研究以及临床合理化用药提供新的方向。 相似文献
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目的 利用响应面法优化舒心安神膏的提取工艺。方法 以超高效液相色谱法同时测定的莫诺苷、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、6-姜辣素含量,出膏率及总多糖含量为综合评分指标,分别考察加水倍数、提取时间、提取次数对舒心安神膏提取工艺的影响。在单因素试验基础上,采用响应面法优化舒心安神膏的提取工艺。结果 经过单因素试验及响应面法优化后的最佳工艺条件为:加10倍水,煎煮2次,每次提取90 min。此条件下综合评分预测值与实测值相比,RSD值为0.82%。结论 通过响应面法优化得到的舒心安神膏提取工艺合理、可行,可为其后续的开发研究提供实验参考。 相似文献
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目的建立UPLC-Q/TOF法同时定性、定量分析滇芹中主要化学成分。方法采用超高效液相色谱串联飞行时间质谱法进行分析,色谱柱为Agilent Poroshell 120 Hilic,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min;定性、定量采用Q-TOF正负离子全扫描+IDA(信息关联采集)模式。结果利用已建立的筛查数据库将满足质量误差小于5×10-6、同位素分布正确且含有二级碎片的离子作为分析目标化合物,结合软件Formula Finder、Mass Calculators等功能、在线数据库(Human Metabolome Database、Pub Chem、Chemical Book等)及二级碎片裂解规律,共鉴定出23个化合物,滇芹首次发现4个化合物。确定阿魏酸为定量分析指标性成分,其定量、定性离子分别为178和149;阿魏酸检测质量浓度线性范围为1.14~1 140 ng/m L(r=1.000),检测限、定量限分别为0.87、2.91 ng/m L,精密度、稳定性、重复性试验的RSD2%,加样回收率为98.13%~101.25%(RSD=1.37%,n=5)。结论该方法灵敏度高、重现性好,分析快速、准确、可靠,可用于同时定性、定量检测滇芹药材中主要化学成分;云南滇芹中阿魏酸含量要高于西藏滇芹。 相似文献
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目的:建立了基于基质分散固相萃取技术的昆明山海棠中氯氰菊酯、溴氰菊酯、三氟氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯、敌敌畏、马拉硫磷、对硫磷、乐果、甲拌磷、毒死蜱、甲胺磷、甲基对硫磷等13种农药的多成分残留分析方法。方法:前处理中以乙腈为提取溶剂、采用弗罗里硅土为分散净化剂的固相萃取方法,并利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)在多反应离子监测模式(MRM)下进行检测,外标法定量。结果:在0.25~250 ng·mL-1添加水平范围内,13种农药的平均回收率为76.2%~105.5%;相对标准偏差(RSD,n=5)为1.1%~13.1%;方法检出限(LOD)在0.02~7.60 μg·kg-1范围内;定量限(LOQ)在0.05~25.95 μg·kg-1范围内。结论:该方法快速简便、稳定可靠,适用于有昆明山海棠中机磷和拟除虫菊酯类农药残留的检测。 相似文献
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目的建立大鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)含量的HPLC-UV测定方法。方法采用SHIMADZU VP-ODS C18反相柱(250×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.01mol/L的醋酸钾缓冲液(10:90,V/V,用0.2mol/L柠檬酸调pH至4.00);流速:1.0ml/min;柱温:25℃;检测波长:275nm。结果 5-羟色胺在0.1~20μg/ml范围内,回归方程为A=46008.89C+1886.58,相关系数r=0.9999,最低检测限为40ng/ml,最低定量限为100ng/ml。加样回收率为89.62%~101.60%,日内、日间精密度均小于3%。结论该方法准确可靠,简单易行,可重复性强,适用于多样本5-HT的快速测定。 相似文献
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目的:采用超高效液相色谱-飞行时间质谱技术(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)对铁苋菜的化学成分进行分析。方法:色谱柱为Kinetex XB-C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL/min,柱温30℃。质谱采用电喷雾(ESI)离子源,信息关联模式(IDA)正、负离子分别采集。应用PeakView1.2软件依据精确质量数和同位素峰度比确定化合物分子式,通过对照品及数据库的二级谱图比对、裂解规律分析,结合已有文献报道,确定化合物结构式。结果:鉴定和推断铁苋菜中47种化学成分,包括有机酸类、黄酮类、萜类和鞣质等,其中26个化合物在铁苋菜中首次报道。结论:建立的铁苋菜提取物化学成分的UHPLC-Q-TOF-MS/MS分析法快速准确,能够较全面的提供各峰的组成和结构信息,为铁苋菜的开发利用和药效物质基础的阐明提供参考。 相似文献
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柴胡与氯苯那敏在大鼠体内药物间的相互作用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨柴胡提取物与氯苯那敏在大鼠体内药物间的相互作用。方法将20只SD大鼠随机分为2组,实验组10只给予20 mg/kg的柴胡提取物2周,对照组10只平行给予生理盐水,第15天分别给予氯苯那敏,于(0、0.1、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24 h)点采血200μL,采用LC-MS分析方法测定氯苯那敏的血药浓度,以Graphpad prism 5.01软件计算2组的药代动力学参数。结果实验组的AUC(0-∞)[1.40±0.27(μg·h)/m L]明显高于对照组[0.87±0.25(μg·h)/m L];而代谢清除率CLint[14.25±2.84(L·kg)/h]明显低于对照组[22.97±2.03(L·kg)/h](P<0.05)。结论柴胡提取物能够降低大鼠体内氯苯那敏的代谢清除率,临床上用药时应尽量避免2种药物的联合使用。 相似文献