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目的 制备氨基糖苷-3″-腺苷酰基转移酶[AAD(3″)]特异性抗血清,并探讨其在检测第1类整合子8种不同可变区启动子(PcS、PcH2、PcH1、PcW、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1 -P2和PcW-P2)下游基因盒中aadA2基因表达水平的应用价值.方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增aadA2基因,并克隆至表达载体pET19b中,诱导表达并纯化带组氨酸标签的重组AAD(3″)蛋白,免疫大耳白兔制备抗AAD(3″)特异性抗血清.以制备的抗AAD(3″)抗血清为一抗,用免疫印迹法(WB)检测不同可变区启动子下游基因盒中aadA2基因的翻译水平,用微量肉汤稀释法检测链霉素对含不同可变区启动子及其下游aadA2基因盒的大肠埃希菌JM109的最低抑菌浓度(MIC).结果 成功构建重组的AAD(3″)蛋白表达质粒pET1 9b-aadA2,经测序确认转化大肠埃希菌BL21( DE3)获得1株高表达可溶性重组AAD(3″)蛋白的工程菌株,发酵后用镍柱纯化获得纯度>90%的重组AAD(3″)蛋白,免疫大耳白兔获得效价> 1∶100 000的抗AAD(3″)特异性抗血清.WB检测8种不同可变区启动子下游aadA2基因翻译产物AAD(3″)蛋白的表达水平,设定启动子PcW下游AAD(3″)蛋白的相对表达水平为1,重复3次测得启动子PcS、PcH2、PcH1、PcS-P2、PcH2 -P2、PcH1-P2及PcW-P2下游AAD(3″)蛋白相对表达水平依次为12.9±2.3、9.1±1.0、2.0±0.4、16.0±1.3、14.1±1.3、10.5±0.7、8.9±1.7,且不同可变区启动子下游AAD(3″)蛋白的相对表达水平差异具有统计学意义(F=32.421,P<0.01).微量肉汤稀释法重复3次测得链霉素对含启动子PcS、PeH2、PcH1、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1 P2、PcW、PcW-P2及其下游aadA2基因重组质粒的大肠杆菌JM109的MIC平均值依次为256、256、64、128、32、128、4、64 mg/L,表明不同可变区启动子下游aadA2基因的表达水平不同可赋予宿主细菌对链霉素产生不同水平的耐药.结论 成功纯化出可溶性重组AAD(3″)蛋白,免疫大耳白兔获得高效价的抗AAD(3″)特异性抗血清,为进一步研究整合子中整合酶基因与可变区基因盒表达之间的相互关系奠定基础.不同可变区启动子下游耐药基因盒的表达水平明显不同,赋予宿主细菌对相应抗菌药物的耐药水平明显不同,因此在对临床菌株进行第1类整合子分子流行病学调查时,应重视可变区启动子分类方面的研究. 相似文献
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和胃接骨胶囊对实验性大鼠骨折愈合过程中BMP-2表达的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
为探讨和胃接骨胶囊对实验性大鼠骨折愈合过程中骨形态发生蛋白-2表达的影响,取SD大鼠60只,随机分为生理盐水组、麝香接骨丹组、和胃接骨胶囊组。徒手造成大鼠下肢胫腓骨标准骨折模型,造模成功后分别于1、2、4、6周每组断颈法处死5只大鼠,取骨痂组织制成病理切片,采用免疫组化染色技术进行染色,并用图像分析系统对骨形态发生蛋白-2的表达进行定量分析。结果显示,在骨折愈合过程中各组骨形态发生蛋白-2含量的总体变化趋势基本相同,骨形态发生蛋白-2表达的高峰都出现在骨折后第2周,但和胃接骨胶囊组骨形态发生蛋白-2阳性产物含量优于同期其他两组(P〈0.05)。表明和胃接骨胶囊能诱导骨形态发生蛋白-2的合成,可能是其促进骨折愈合的机理之一。 相似文献
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乙酸钙-鲍氏不动杆菌临床分离与耐药性的7年监测 总被引:2,自引:2,他引:2
目的了解1998~2004年乙酸钙-鲍氏不动杆菌在临床标本中的分离情况及其耐药趋势,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法回顾分析1998~2004年间所有标本中乙酸钙-鲍氏不动杆菌的分离率,菌株在标本和病区的分布以及对14种抗菌药物的耐药率。结果乙酸钙-鲍氏不动杆菌的分离率有逐年升高的趋势,从1998年的0.18%增至2004年的1.48%;其在呼吸道标本的分离率最高(70.58%),其次是尿液(9.42%)、血液(4.63%);病区分布以重症监护室最高(47.28%),乙酸钙-鲍氏不动杆菌对14种抗菌药物的耐药率,1998年仅有氨曲南>50%,而到2004年仅头孢哌酮/舒巴坦的耐药率<50%,其他13种均>50%;其耐药率均呈递增的趋势,耐药性增幅列前3位分别为:头孢他啶11.1%~88.9%、亚胺培南0~64.8%、复方新诺明0~64.0%。结论乙酸钙-鲍氏不动杆菌的临床分离率在增加,其对多数抗菌药物有较高的耐药性,且耐药率呈逐年上升趋势,尤其是对亚胺培南耐药率的快速增长,应引起临床抗感染治疗的高度重视。 相似文献
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目的 了解临床分离的鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌的分布和耐药性,以指导临床合理使用抗菌药物.方法 K-B纸片扩散法测定临床分离菌株对常用抗菌药物的药物敏感性,按CLSI 2009年标准判读,用WHONET 5.4软件分析数据.结果 2011年浙江省人民医院共收集到非重复的鲍氏不动杆菌606株,分离自ICU 237株占39.1%,鲍氏不动杆菌对多黏菌素B敏感率为100.0%,对头孢哌酮/舒巴坦的敏感率为26.3%,哌拉西林/他唑巴坦为30.1%;对亚胺培南、美罗培南的敏感率分别为31.0%和40.8%,耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(CRAB)为77.2%;2011年医院临床分离铜绿假单胞菌579株,164株分离自医院中心ICU(28.3%),铜绿假单胞菌对多黏菌素B敏感率最好为100.0%、妥布霉素为86.7%、左氧氟沙星为64.3%,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为63.8%、82.4%,对亚胺培南、美罗培南的敏感率分别为55.3%、64.7%;耐碳青霉烯类抗菌药物的铜绿假单胞菌(CRPA)检出率为44.6%.结论 临床分离的鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌对常用抗菌药物敏感性低,CRPA、CRAB检出率高,应加强抗菌药物的合理使用和医院感染控制. 相似文献
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目的:探讨Ⅱ、Ⅲ型Pilon骨折的临床治疗方法.方法:对21例Ruedi-Allgower分型的Ⅱ、Ⅲ型Pilon骨折,采用有限开放复位有限内固定或结合外固定方法治疗,术后功能锻炼,并进行疗效评定.随访11~26个月,平均18个月.结果:21例中,优11例,良7例,可2例,差1例,优良率85.7%.结论:采用有限开放复位有限内固定或结合外固定是治疗Ⅱ、Ⅲ型Pilon骨折的有效方法. 相似文献
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1999~2003年嗜麦芽窄食单胞菌的分离情况及耐药趋势分析 总被引:4,自引:0,他引:4
目的了解从1999年到2003年嗜麦芽窄食单胞菌在临床标本中的分离情况及其耐药趋势,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法回顾分析1999~2003年间所有标本中嗜麦芽窄食单胞菌的分离率,在标本和病区的分布构成情况以及对21种抗菌药物的耐药率。结果嗜麦芽窄食单胞菌的分离率有逐年升高的趋势,从1999年的0·29%增至2003年的1·67%;其在呼吸道标本(痰液 咽拭子)的分离率最高(63·27%),其次是尿液(19·39%),血液(12·65%);病区分布以重症监护室最高(13·88%),其次是普外科(12·86%),所有内科病区(不含ICU)占56·94%;嗜麦芽窄食单胞菌对13种抗菌药的耐药率大于50%,仅对其中8种的耐药率每年均低于50%,但也呈逐年递增的趋势,分别为:哌拉西林/他唑巴坦4·35%~48·98%,头孢他啶4·08%~47·75%,头孢吡肟3·00%~24·49%,头孢替坦6·00%~28·57%,替卡西林13·33%~36·73%,左氟沙星25·76%~49·00%,环丙沙星10·61%~43·67%,复方新诺明20·00%~42·42%。结论嗜麦芽窄食单胞菌的临床分离率在增加,其对多数抗菌药物有较高的耐药性,即使对相对敏感的药物也呈逐年增高的趋势,所以感染的治疗应当依据抗菌药物的体外敏感试验。 相似文献
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目的:建立基于流式细胞分析技术快速检测假丝酵母菌临床菌株药物敏感性或耐药性的方法。方法以碘化丙锭( PI)为荧光染料,采用白假丝酵母菌ATCC90029株确定流式药敏试验门设置及最佳实验条件。采用所建立的真菌流式药敏试验检测110株假丝酵母菌临床菌株对氟康唑和伏立康唑的敏感性或耐药性并经典的M27-A3常量稀释法进行比较。结果调整电压可将白假丝酵母菌ATCC90029株活菌与死菌在流式细胞仪SS/log( FL3)门中分为边界清晰的两群细胞,不同比例死菌与活菌混合液与流式药敏试验检测值之间有高度相关性(r=0.999)。流式药敏试验30 min内可出结果,其最适菌液浓度为1.0×106/ml、药物与真菌最适孵育时间为3 h、最佳染色方法及时间为脱氧胆酸钠预处理后PI染色5 min。流式药敏试验与M27-A3常量稀释法对110株假丝酵母菌临床菌株对氟康唑和伏立康唑敏感或耐药总符合率分别为98.2%和87.3%。结论较之经典的常量稀释法,流式药敏试验用于检测真菌对药物的敏感性或耐药性具有快速、准确、敏感等优点,具有临床应用前景。 相似文献
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目的 建立流式细胞术快速检测白色假丝酵母菌对氟康唑敏感性试验(FCST)的方法.方法用FCST法对标准菌株在不同实验条件下检测以探讨最佳实验条件,对FCST法与NCCLS M27-A法进行对比,得出最低抑菌浓度(MIC)判断标准;同时对30株临床菌株进行FCST法双份平行检测并与M27-A进行比较.结果 流式细胞术快速检测不同比例死菌与活菌混合液检测值及设定值具有良好的相关性(r=0.999);MIC判断标准为死菌比率在连续系列管中高浓度管比低浓度管出现>50.0%的增长,并且保持稳定或连续增长,则可判定高浓度管药物浓度为该菌的MIC值;对30株临床分离菌株的检测发现,该法具有很好的重复性,与M27-A比较,两者一致率为93.3%,结果差异无统计学意义(P>0.05),并有很好的相关性(r=0.822).结论 FCST具有快速、重复性好、易于判断MIC值、准确性高等优点,在临床抗真菌药物敏感性检测中具有很大的应用前景. 相似文献