酪氨酸蛋白激酶抑制剂的高通量筛选模型

目的建立酪氨酸激酶抑制剂的高通量筛选模型。方法以多聚酪氨酸多肽为底物,用提取的酪氨酸激酶催化酪氨酸的磷酸化,用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸激酶的活性,根据待测样品对激酶活性的抑制程度,筛选酪氨酸激酶抑制剂。结果酶标板包被液的浓度为20mg·L-1PGT,使用25mg·L-1蛋白质的PTK初提物,在37℃条件下孵育60min,再使用2000倍稀释的辣根过氧化物酶标记的小鼠抗磷酸化酪氨酸单克隆抗体IgG2bk与反应产物结合、测定。同一微孔板各样品间的测定误差为0.26,微孔板间和日间的测定误差分别为0.79和0.69。Genistein对PTK的IC50为110μmol·L-1。从收集的7680个样品中,筛选出具有活性的样品16个,选中率约2‰。结论建立的酪氨酸激酶抑制剂高通量药物筛选模型,具有灵敏度高、结果稳定的特性,在每块实验上同时设立空白和对照,测定结果具有可比性。     

柴地合方对慢性应激大鼠大脑皮层5-HT1和5-HT2受体功能的调节

目的观察柴地合方对慢性应激抑郁模型大鼠大脑皮层5-HT1受体和5-HT2受体功能的影响,探讨其抗抑郁作用可能的机制.方法应用大鼠慢性应激模型慢性给药,取动物大脑皮层组织,采用放射配基结合法测定皮层5-HT1受体和5-HT2受体的最大结合率(Bmax)和平衡解离常数(Kd).结果慢性应激使大鼠大脑皮层5-HT1、5-HT2受体的Bmax显著升高(P<0.01),提示受体数目增加;柴地合方慢性治疗可使慢性应激抑郁大鼠前额皮层5-HT1、5-HT2受体的Bmax降低(P<0.01),使抑郁大鼠异常增加的受体数目减少.不论模型大鼠或模型治疗大鼠与正常大鼠比较,其Kd值没有显著性差异(P>0.05),提示受体的亲和力并没有受到影响.结论柴地合方可以降低应激大鼠大脑皮层5-HT1、5-HT2受体的数目,这可能是其抗抑郁作用机理之一.     

应用高通量筛选体系寻找抗抑郁新药的实验研究

背景：目前抑郁症发病率日益趋高，运用新技术新方法开发新型高效低毒抗抑郁药具有重要意义。目的：通过高通量筛选与体内试验相结合，建立寻找抗抑郁新药先导化合物的研究体系。设计：随机对照实验。地点、材料和干预：本研究地点为中国医学科学院药物研究所。实验选用昆明种雄性小鼠70只，体质量(20&;#177;2)g。雄性Wistar大鼠10只，体质量(200&;#177;20)g。取雄性Wistar大鼠，断头处死，快速取脑用于5羟色胺重摄取实验。将小鼠随机分为对照组、氟西汀组(2．6mg／kg)、J01113组(30mg／kg)，JO1114组(30mg／kg)，J10745组(30g／kg)。连续灌胃给药5d，每天给药1次，从给药第2天开始隔日进行小鼠悬尾试验。比较给药组及对照组小鼠自挂上后6min内的不动时间。分组给药同小鼠县尾实验，隔日进行小鼠强迫游泳实验。比较给药组及对照组小鼠在后4min内的不动时间。主要观察指标：突触体5-羟色胺重摄取抑制活性，抑郁模型小鼠静止时间。结果：体外试验表明5000多种化合物经高通量筛选后，J01113，J01114和J10745均显示较强的5羟色胺重摄取抑制活性。J01113，J01114和J10745的半数有效剂量(IC50)分别为(1．304&;#215;10^-10)，(9．036&;#215;10^-10)(1．447&;#215;10^-7)mol／L。小鼠悬尾试验结果显示J01113连续给药3d或5d悬尾小鼠的静止时间[(67．2&;#177;47．33)，(95．2&;#177;47．5)S]明显少于对照组[(117．8&;#177;33．2)，(170．2&;#177;40．47)s](t=2．77，P&;lt;0．05；t=3．8，P&;lt;0．01)。小鼠游泳试验结果表明，J01113组小鼠连续给药3天或5天静止时间[(9．8&;#177;16．59)，(19．4&;#177;24．64)s]也显著低于对照组[(63．7&;#177;35．4)，(48．7&;#177;33．9)s](t=4．36，P&;lt;0．01；t=2．21，P&;lt;0．05)。在这两种模型中J01114，J10745与对照组比静止时间虽有减少趋势，但均差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：应用高通量筛选体系，可实现大规模高效率抗抑郁药先导化合物的发现，活性化合物J01113可能是潜在的一种新型抗抑郁药。     

应用高通量筛选体系寻找抗抑郁新药的实验研究

背景目前抑郁症发病率日益趋高,运用新技术新方法开发新型高效低毒抗抑郁药具有重要意义.目的通过高通量筛选与体内试验相结合,建立寻找抗抑郁新药先导化合物的研究体系.设计随机对照实验.地点、材料和干预本研究地点为中国医学科学院药物研究所.实验选用昆明种雄性小鼠70只,体质量(20±2)g.雄性Wistar大鼠10只,体质量(200±20)g.取雄性Wistar大鼠,断头处死,快速取脑用于5羟色胺重摄取实验.将小鼠随机分为对照组、氟西汀组(2.6 mg/kg)、J01113组(30 mg/kg),J01114组(30 mg/kg),J10745组(30 g/kg).连续灌胃给药5 d,每天给药1次,从给药第2天开始隔日进行小鼠悬尾试验.比较给药组及对照组小鼠自挂上后6 min内的不动时间.分组给药同小鼠悬尾实验,隔日进行小鼠强迫游泳实验.比较给药组及对照组小鼠在后4 min内的不动时间.主要观察指标突触体5-羟色胺重摄取抑制活性,抑郁模型小鼠静止时间.结果体外试验表明5 000多种化合物经高通量筛选后,J01113,J01114和J10745均显示较强的5羟色胺重摄取抑制活性.J01113,J01114和J10745的半数有效剂量(IC50)分别为(1.304×10-10),(9.036×10-10),(1.447×10-7)mol/L.小鼠悬尾试验结果显示J01113连续给药3 d或5d悬尾小鼠的静止时间[(67.2 ±47.33),(95.2±47.5)s]明显少于对照组[(117.8±33.2),(170.2±40.47)s](t=2.77,P＜0.05;t=3.8,P＜0.01).小鼠游泳试验结果表明,J01113组小鼠连续给药3天或5天静止时间[(9.8±16.59),(19.4±24.64)s]也显著低于对照组[(63.7±35.4),(48.7 ±33.9)s](t=4.36,P＜0.01;t=2.21,P＜0.05).在这两种模型中J01114,J10745与对照组比静止时间虽有减少趋势,但均差异无显著性意义(P＞0.05).结论应用高通量筛选体系,可实现大规模高效率抗抑郁药先导化合物的发现,活性化合物J01113可能是潜在的一种新型抗抑郁药.     

达曲班对异丙肾上腺素诱导的心肌缺血及离体心肌的作用

观察新型血栓素A2(TXA2)受体拮抗剂达曲班对异丙肾上腺素(Iso)诱导的大鼠心肌缺血损伤的保护作用及对心肌四性的影响。方法静脉注射Iso诱发大鼠心肌缺血，记录缺血后心功能的变化及心肌细胞病理改变情况。用离体大鼠心房肌进行自律性、收缩性、兴奋性和不应性的研究。结果达曲班对缺血后心功能的下降有明显的抑制作用，并能明显减轻缺血捐伤后心肌细胞坏死和浊肿现象。对离体心房肌能明显延长功能性不应期，抑制肾上腺素诱发的自律性，而对收缩性和兴奋性无明显影响。结论达曲班有较强的抗心肌缺血作用。     

抗抑郁药5-HT重摄取抑制剂高通量筛选方法的建立与应用

 目的研究通过高通量筛选与体内试验相结合寻找抗抑郁新药先导化合物的技术方法。方法采用高通量筛选方法在5 000多种化合物中筛选具有5 HT重摄取抑制作用的活性化合物，然后应用行为绝望抑郁模型——小鼠游泳试验和小鼠悬尾试验探讨活性化合物J01113，J01114和J10745的抗抑郁作用。结果体外试验表明，5 000多种化合物经高通量筛选后，J01113，J01114和J10745均显示较强的5 HT重摄取抑制活性。J01113，J01114和J10745的IC₅₀分别为1.304×10^-10，9.036×10^-10，1.447×10^-7 mol·L^-1。小鼠悬尾试验结果显示J01113连续给药3 d或5 d能明显减少悬尾小鼠的静止时间［(70±50) s,(100±50) s］，同模型小鼠［(100±30) s,(170±40) s］相比差异极显著(P＜0.05，P＜0.01)。小鼠游泳试验结果表明，J01113组小鼠连续给药3 d或5 d静止时间为［(10±16) s,(19±25) s］也显著低于模型对照组［(60±40) s,(50±30) s］,两者相比差异极显著(P＜0.01，P＜0.05)。在这两种模型中J01114，J10745与对照组比静止时间虽有减少趋势，但均无显著性差异(P＞0.05)。结论结果提示应用高通量筛选体系，可实现大规模高效率抗抑郁药先导化合物的发现，活性化合物J01113可能是潜在的一种新型抗抑郁药，值得进一步研究。