LC-MS结合网络药理学探讨“片姜黄-当归”挥发油防治膝骨关节炎的作用机制

目的 提取“片姜黄-当归”药对挥发油,使用液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)对提取的挥发油进行化学成分定性分析,并运用网络药理学探讨药对挥发油防治膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法 采用水蒸气蒸馏法提取“片姜黄-当归”药对挥发油,并使用LC-MS对挥发油成分进行分析。借助Pubchem、Swiss Target Prediction、GeneCards、DAVID等数据库预测有效成分防治KOA的作用靶点及通路,对核心基因进行基因本体(Gene ontology,GO)分析与京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,并使用Cytoscape软件构建“活性成分-疾病靶点”可视化网络图。运用AutoDock及Pymol对度值靠前的靶点与活性成分进行分子对接验证。结果 “片姜黄-当归”药对挥发油中共鉴定出59种化合物,主要成分为莪术酮、异姜黄醇、藁本内酯等;通过网络药理学筛选出挥发油作用于KOA的28个潜在靶点,包括CTSK、PTGS1、PTGS2和ESR1等关键靶点;KEGG富集分析预测“片姜黄-当归”药对挥发油主要通过肿瘤坏死因子信号通路、破骨细胞分化、白介素17信号通路、松弛素信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路来发挥治疗KOA的作用。分子对接结果显示筛选的活性成分与其对应靶蛋白均具有较好的结合活性。结论 使用LC-MS结合网络药理学的方法初步探明了“片姜黄-当归”药对挥发油中的主要有效成分及其干预KOA的潜在靶点与作用机制,为“片姜黄-当归”后续的深入研究提供思路。     

三色散凝胶贴膏原料药提取工艺的优化

目的 对三色散凝胶贴膏原料药的提取工艺进行优化。方法 将SD大鼠分为空白组、模型组、传统工艺组、水提组和醇提组,每组5只,采用前交叉韧带横断术建立膝骨关节炎模型,考察不同提取方式所得凝胶贴膏对膝骨关节炎大鼠的药效学影响。分别以冷、热痛阈值与疼痛介质降钙素基因相关肽（CGRP）、环氧合酶2(COX-2)、P物质（SP）、前列腺素E2(PGE2)含量为指标进行镇痛实验;对大鼠滑膜组织进行HE染色,观察大鼠滑膜细胞增殖、炎症细胞浸润、血管入侵程度,并以白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6蛋白与mRNA表达水平为指标进行抗炎实验,对比各组大鼠的抗炎镇痛效果差异。以加醇倍数、提取时间、提取次数作为正交试验考察因素,以蔓荆子黄素、士的宁和马钱子碱含量为评价指标并计算综合评分,优选出三色散凝胶贴膏原料药的提取工艺并进行验证实验。结果 与模型组比较,各给药组大鼠的冷痛阈值和热痛阈值（除传统工艺组外）均显著升高（P<0.05）,疼痛介质CGRP、COX-2、SP、PGE2含量均显著下降（P<0.05）;滑膜组织炎症细胞浸润减少、纤维化程度减轻,胶原沉积减少,可...     

三色散凝胶贴膏处方优化

目的 优化三色散凝胶贴膏处方。方法 根据2020年版《中国药典》四部通则项下规定进行初黏力、持黏力测定,对渗透情况、皮肤残留情况进行评分,流变仪进行振幅扫描、频率扫描、蠕变恢复扫描,分析储能模量(G′)、复合黏度(?*)、蠕变柔量[J(t)]值,结合黏附力、流变学参数采用正交试验优化处方。结果 最佳处方为AH-106、甘油、甘羟铝、酒石酸比例55∶300∶2∶3,G′、?*、J(t)值、初黏力、持黏力、剪切应力值、渗透情况评分、残留情况评分分别为1 169.63 Pa、11 865.6 Pa·s、 1.810×10^-3/Pa、25号、720 min、723.755 Pa、8分、8分。结论 本实验结合流变学参数、黏附力指标调节辅料用量,所得最优处方可使三色散凝胶贴膏形变程度、粘弹性等指标较好,固化时间大大缩短。