TGF-β1和IGF-1共同转染大鼠BMSCs向软骨细胞分化的实验研究

目的 探讨应用TGF-β1和IGF-1基因转染大鼠BMSCs后,目的基因分泌情况及向软骨细胞的分化效果,为构建新型的组织工程软骨种子细胞提供思路. 方法 6周龄健康雄性Wistar大鼠2只,体重约150 g.扩增、提取质粒pcDNA3.1-IGF-1、pcDNA3.1-TGF-β1,酶切、电泳鉴定并测序.采用密度梯度离心法和贴壁分离法,分离、纯化Wistar大鼠BMSCs,倒置相差显微镜观察原代和传代BMSCs形态学改变,免疫荧光法检测细胞表面标志.将TGF-β1和IGF-1基因单独或共转染第3代BMSCs,按转染情况分为5组未转染组(A组)、转染空载体组(B组)、转染TGF-β1组(C组)、转染IGF-1组(D组)、TGF-β1与IGF-1共转染组(E组).对转染后细胞进行筛选,MTT法测定筛选后细胞的增殖活性,RT-PCR和Western blot法检测筛选后细胞的表达. 结果 电泳显示IGF-1和TGF-β1两目的基因条带,基因测序与Gene-Bank cDNA序列相符.大鼠BMSCs原代细胞接种24 h后可见少量贴壁突起细胞,4、5 d开始形成典型的BMSCs簇状增生,9、10 d细胞生长即可达80%～90%融合;传代后细胞形态较均一.免疫荧光法检测BMSCs的CD29、CD44呈阳性反应,CD34、CD45呈阴性反应.转染24 h后有少量细胞死亡,筛选3周后细胞克隆形成,至第4周细胞可传代,多数细胞变成多边形,部分细胞边界不清,呈圆形,核偏位,核周颗粒明显.MTT法测定A、B、C、D、E组细胞在490 nm波长处的吸光度(A)值,分别为0.432±0.038、0.428±0.041、0.664±0.086、0.655 ±0.045和0.833 ±0.103.A、B组与C、D、E组间差异均有统计学意义(P＜0.01),但A、B组以及C、D、E组间差异无统计学意义(P＞0.05).RT-PCR和Westernblot检测目的基因和蛋白的表达量,TGF-β1表达以C组最多,分别为0.925 ±0.0220、124.341 7 ±2.982 0,E组次之,分别为0.771 7±0.012 0、101.766 7±1.241 0(P＜0.01);IGF-1表达以E组最多,分别为1.0200±0.026 0、128.171 7±9.152 0,D组次之,分别为0.465 0 ±0.042 0、111.045 0 ±6.248 0(P＜0.01);Ⅱ型胶原表达以E组最多,分别为0.980 0 ±0.034 0、120.355 0 ±12.550 0,C组次之,分别为0.720 0 ±0.026 0、72.246 7 ±7.364 0(P＜0.01). 结论 通过TGF-β1和IGF-1基因共同转染BMSCs修复软骨缺损是一个较有前景的发展方向,对组织工程软骨应用于临床具有重要意义.     

不同分离方法对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响

背景：目前并没有特定的实验对骨髓间充质干细胞分离的两种基本方法进行系统评估，所以贴壁分离法和密度梯度离心法对细胞诱导分化是否存在不同影响，尚无定论。目的：拟验证两种基本分离方法对骨髓间充质干细胞成软骨分化影响的差别。设计、时间及地点：对照观察实验，2005—03／09在中国医科大学附属盛京医院儿外实验室完成。材料：2-3月龄体质量1．2-2．0kg的日本大耳兔20只用于抽取骨髓。方法：用贴壁分离法和密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞。选择两组同代的骨髓间充质于细胞，用转化生长因子β1诱导其向软骨方向分化。主要观察指标：①倒置显微镜观察骨髓间充质干细胞的生长情况，绘制两组细胞生长曲线。②免疫组化检测两组Ⅱ型胶原表达。⑧原位杂交检测两组细胞Ⅱ型胶原mRNA表达。结果：绘制生长曲线表明两组细胞生长速度趋于一致。免疫组化法检测两种方法分离的骨髓骨髓间充质干细胞的软骨细胞分化率为76．1％和77．7％，原位杂交法检测的软骨细胞分化率为70．3％和71．0％，差异无显著性意义。结论：两种分离方法对骨髓间充质干细胞的生长和成软骨分化结果的影响无差异。     

枕颈部畸形伴寰椎前脱位再手术治疗1例

枕颈部畸形伴寰椎前脱位再手术治疗１例中国医科大学第二临床学院骨科（１１０００３）王传疆付永慧王海义（指导）枕颈部畸形伴寰椎前脱位较少见，但病情严重，手术治疗难度较大，而再手术则难度更大。我科近期收治１例，手术治疗效果良好，现报告如下。１病历摘要男患，...     

高效液相色谱法测定氟比洛芬中4种基因毒性杂质

目的 建立高效液相色谱法测定氟比洛芬中基因毒性杂质：2-氟苯胺、4-溴-2-氟乙酰苯胺、4-溴-2-氟苯胺和4-溴-2-氟联苯。方法 采用Phenomenex Kinetex F5 100A (250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,乙腈-水-冰醋酸(体积比30∶65∶5)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速为1.2 mL·min^-1,检测波长为254 nm,进样体积10μL,柱温为35℃。结果 2-氟苯胺、4-溴-2-氟乙酰苯胺、4-溴-2-氟苯胺和4-溴-2-氟联苯的检测下限分别为5.987、3.198、6.408,3.199 mg·L^-1;分别在质量浓度19.96～2 235(r=0.993)、10.66～2 387(r=0.999)、21.36～2 392(r=0.999)和10.66～2 388 mg·L^-1(r=0.999)内与峰面积呈良好线性关系;平均加样回收率分别为100.5%、100.2%、101.4%和97.9%(n=9),加样回收率良好;对照品和供试品加标溶液在24 h内稳定性良好。三批...     

HPLC法同时测定强阳保肾丸中淫羊藿苷和补骨脂素的含量

目的建立HPLC法同时测定强阳保肾丸中淫羊藿苷和补骨脂素含量的方法。方法采用Phenomen kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-体积分数为0.05%的磷酸溶液(体积比为25∶75)进行等度洗脱,检测波长:270 nm,柱温:30℃,流速:1.0 mL.min-1。结果淫羊藿苷质量浓度在0.509~20.400 mg.L-1(r=1.000)内、补骨脂素质量浓度在0.416~16.600 mg.L-1(r=0.9999)内与峰面积呈良好的线性关系;淫羊藿苷、补骨脂素的回收率分别为99.0%、101.0%,RSD分别为1.5%、1.6%。结论所建立的定量方法适用于强阳保肾丸中淫羊藿苷和补骨脂素的含量测定。     

后路椎间孔扩大术治疗混合型颈椎病的神经根压迫

对23例混合型颈椎病病人行单开门椎管扩大的同时，进行了不同节段的椎间孔扩大。术后患侧上肢症状缓解明显，没有上肢痛发生，术中没有神经根损伤，术后随访2．5—38月，JAO评分比术前提高77．6％。     

HPLC法测定石柱参药材及其片剂中5种人参皂苷的含量

目的建立测定石柱参药材及其片剂中5种人参皂苷含量的方法,为石柱参的质量控制提供科学依据。方法色谱柱为Kromasil C18柱;流动相为乙腈-水,梯度洗脱;柱温为25℃;流速为1.0 mL.min-1;检测波长为203 nm。结果5种人参皂苷的色谱峰与相邻色谱峰分离良好。人参皂苷Rg1质量浓度在19.8~198 mg.L-1内、人参皂苷Re质量浓度在20.6~206 mg.L-1内、人参皂苷Rb1质量浓度在33.0~330 mg.L-1内、人参皂苷Rc质量浓度在18.0~180 mg.L-1内、人参皂苷Rb2质量浓度在13.0~130 mg.L-1内与峰面积呈良好的线性关系。石柱参药材中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2的平均回收率分别为99.8%、98.3%、99.2%、95.4%、96.8%,RSD分别为3.0%、3.0%、2.6%、2.2%、2.8%(n=6);石柱参片剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2的平均回收率分别为100.2%、99.0%、99.7%、96.4%、98.4%,RSD分别为2.2%、3.1%、3.6%、2.6%、2.8%(n=6)。结论本实验中所建立的方法可用于石柱参药材及其片剂的质量控制。     

不同分离方法对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响

背景：目前并没有特定的实验对骨髓间充质干细胞分离的两种基本方法进行系统评估，所以贴壁分离法和密度梯度离心法对细胞诱导分化是否存在不同影响，尚无定论。 目的：拟验证两种基本分离方法对骨髓间充质干细胞成软骨分化影响的差别。 设计、时间及地点：对照观察实验，2005-03/09在中国医科大学附属盛京医院儿外实验室完成。 材料：2~3月龄体质量1.2~2.0 kg的日本大耳兔20只用于抽取骨髓。 方法：用贴壁分离法和密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞。选择两组同代的骨髓间充质干细胞，用转化生长因子β1诱导其向软骨方向分化。 主要观察指标：①倒置显微镜观察骨髓间充质干细胞的生长情况，绘制两组细胞生长曲线。②免疫组化检测两组Ⅱ型胶原表达。③原位杂交检测两组细胞Ⅱ型胶原mRNA表达。 结果：绘制生长曲线表明两组细胞生长速度趋于一致。免疫组化法检测两种方法分离的骨髓骨髓间充质干细胞的软骨细胞分化率为76.1%和77.7%，原位杂交法检测的软骨细胞分化率为70.3%和71.0%，差异无显著性意义。 结论：两种分离方法对骨髓间充质干细胞的生长和成软骨分化结果的影响无差异。     

为了千百万癌症患者的生命

王振国其人王振国,主任医师,研究员,多所大学客座教授,国家有突出贡献的中青年专家,首届“中国十大杰出青年”,国际癌病康复协会会长,北京振国肿瘤研究中心主任,吉林省通化长白山药物研究所所长,是国内医学界集教授、研究员、主任医师于一身的著名抗癌专家。王振国从事抗癌药物研究和临床工作30余年,擅长对中晚期肿瘤患者进行中西医结合治疗,挽救了无数患者的生命。因发明抗癌中成药及“冲击疗法”,先后获得6项国际大奖。在第38届尤里卡世界发明博览会上,获“世界发明最高个人研究奖”、“将军勋章”、“骑士勋章”和“比利时王国荣誉奖牌”等荣誉,并先后到20多个国家做了上百场抗癌学术报告。为     

为了千百万肿瘤患者的生命——记北京振国肿瘤研究中心主任王振国教授

王振国其人王振国,主任医师、研究员、多所大学的客座教授,国家有突出贡献的中青年专家,首届“中国十大杰出青年”,国际癌病康复协会会长、北京振国肿瘤研究中心主任、吉林省通化长白山药物研究所所长,是国内医学界集教授、研究员、主任医师于一身的著名专家。王振国从事抗癌药