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目的 建立以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)乙酰化褐藻胶的合成为靶向的筛选模型,用于筛选抑制铜绿假单胞菌褐藻胶合成的活性分子。
方法 分别建立铜绿假单胞菌双层平板筛选模型和PalgD-GFP 荧光分子模型,从海洋微生物代谢产物中筛选抑制铜绿假单胞菌乙酰化褐藻胶合成的活性分子。
结果 利用2个筛选模型筛选300余种化合物,获得2种抑制铜绿假单胞菌合成褐藻胶的化合物,且化合物的抑制作用具有浓度依赖性,验证了模型的可行性和有效性。
结论 2种模型结合,可以高效、准确地筛选目标化合物,为解决细菌耐药问题提供了1种有效的手段。 相似文献
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目的对来源于Thalassomonas sp.LD5的褐藻胶裂解酶TsAly7C进行研究,以期获得具有优良性质的褐藻胶裂解酶,适应工业需求。方法在生物信息学分析的基础上,对TsAly7C进行了重组表达和酶学性质研究。结果通过生物信息学分析,TsAly7C属于PL7家族的第一亚家族。对重组TsAly7C(r TsAly7C)酶学性质进行分析,r TsAly7C的最适温度是30℃,最适p H为8.0(Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液),在底物中添加300 mmol/L NaCl时降解能力最强。r TsAly7C的p H稳定性和温度稳定性较好,在0~30℃保存1 h仍保有80%以上的酶活,是1种适低温性褐藻胶裂解酶。Cu2+、Co2+、Zn2+、Ni2+和十二烷基硫酸钠(SDS)对r TsAly7C的酶活有明显的抑制作用。r TsAly7C是1种双功能褐藻胶裂解酶,以内切形式裂解褐藻胶产生不饱和二糖和单糖。 相似文献
3.
目的 制备条纹斑竹鲨(Chiloscyllium plagiosum)IgNAR的多克隆抗体,为条纹斑竹鲨单域抗体的开发提供工具。方法 合成条纹斑竹鲨IgNAR恒定区的一段多肽作为抗原,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体血清,采用间接ELISA法测定抗体的效价,并通过Western Blot检测多克隆抗体的特异性。此外,利用制备的多克隆抗体对条纹斑竹鲨外周血淋巴细胞进行免疫荧光和流式分析。结果 制备的抗血清效价高达1 000万,该多克隆抗体不仅能识别条纹斑竹鲨的IgNAR,还能识别护士鲨(Ginglymostoma cirratum)的IgNAR,但对条纹斑竹鲨的灵敏度更高。通过免疫荧光和流式细胞术确定了该多克隆抗体还可以识别条纹斑竹鲨外周血淋巴细胞跨膜型IgNAR。结论 成功制备了条纹斑竹鲨IgNAR的多克隆抗体,该抗体可用于Western Blot、免疫荧光和流式细胞术等实验,为条纹斑竹鲨单域抗体的开发提供了有力工具。 相似文献
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目的 CgkX是一种高活性、高稳定性的κ-卡拉胶酶,但产量低。本文旨在构建多种重组表达菌株,并进行发酵条件优化,以提高κ-卡拉胶酶CgkX的产量。方法 在分析了κ-卡拉胶酶CgkX基因序列中稀有密码子和氨基酸序列中含硫氨基酸的基础上,构建多种CgkX表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达和酶活测定,筛选其中最高效的表达菌株,并对发酵起始pH、诱导温度、IPTG浓度、装液量以及甘氨酸浓度等因素进行优化。结果 构建了4种重组表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),发现E. coli BL21(DE3)/pET-22b-CgkX酶产量最高,是以前菌株的8倍。通过优化确定了最佳发酵条件为:发酵起始pH 7.5,IPTG浓度为0.05 mmol?L-1,诱导温度20 oC,装液量为75 mL,甘氨酸浓度为1 g?L-1。优化后酶产量达到32 U/mL,是优化前的7倍。结论 经过重组表达载体筛选和发酵优化,CgkX产量提高到最初的56倍,为酶解制备κ-卡拉胶寡糖提供了足量的工具酶。 相似文献
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琼胶酶高产海洋假单胞菌CY24的筛选及培养条件优化 总被引:11,自引:0,他引:11
利用琼胶唯一碳源筛选法从海水中分离得到一株产琼胶酶假别单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)CY24,通过培养基组分的正交实验确定最适培养基配方为(w/v):NaCl 2.5%;干酪素0.25%;MgSO_4·7H_2O 0.5%;KCl 0.1%;FeSO_4·7H_2O 0.002%;CaCl_2 0.02%;NaH_2PO_4 0.06%;琼胶0.25%;pH7.0。最佳培养条件为25℃培养24h。经培养条件的优化后,粗酶液的酶活高达1.8U·mL~(-1),较优化前提高了20倍。为酶的大量生产和活性琼胶低聚糖的酶法制备创造了条件。 相似文献
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目的 褐藻胶寡糖酶可将褐藻胶多糖和寡糖降解为单糖,但现有的褐藻胶寡糖酶数量极少且活力较差。本文旨在从海洋弧菌QY105中克隆寡糖酶OalA的编码基因,重组表达并研究其酶学性质。方法 利用简并PCR和SiteFinding-PCR从海洋弧菌QY105中克隆得到褐藻胶寡糖酶OalA的编码基因,在大肠杆菌中进行重组表达,对重组酶进行分离纯化及酶学性质研究。结果 褐藻胶寡糖酶OalA基因全长2082 bp,编码一条含有693个氨基酸残基的多肽链,理论分子量为79.17 kDa,理论等电点为4.98,属于多糖裂解酶第15家族(PL-15)。重组OalA比活力为9.2 U?mg?1,最适温度30 ℃,在10 ℃的酶活力达到最高酶活的45%,最适pH7.6,在低于30 ℃和pH6~10范围内稳定,偏好降解polyM。结论 OalA具有低温酶的特点,且对polyM具有偏好性,可用于褐藻胶单糖制备、PL-15家族结构与功能相互关系研究等领域。 相似文献
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目的:构建TRBP原核表达载体,评价表达的重组TRBP蛋白对双链RNA的结合能力。方法:利用RT-PCR扩增小鼠TRBP基因双链RNA结合区,构建其与His标签融合的表达载体,转化E.coli BL21(DE3)菌株,利用Ni-NTA磁珠对重组蛋白进行分离纯化;体外转录合成小鼠肝脏miR-122前体RNA Pre-miR-122,分别利用PAGE电泳和等温量热滴定仪检测TRBP与Pre-miR-122的结合能力。结果:分离纯化得到的重组TRBP蛋白为可溶蛋白,Mr为32 400,结合在NI-NTA磁珠上的TRBP能有效的结合Pre-miR-122。结论:成功建立了TRBP原核表达系统,初步研究了TRBP重组蛋白与双链RNA的结合能力。 相似文献
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甘糖酯抗氧化作用的分子机制 总被引:4,自引:1,他引:4
目的探讨甘糖酯(PGMS)清除自由基抗氧化作用的分子机制。方法给大鼠ig高脂乳剂建立高脂血症模型,分成对照组、甘糖酯治疗组、甘糖酯+DDC组,治疗3周。检测血清、肝脏、脾脏和主动脉中丙二醛(MDA)的含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性,以及Cu,Zn-SOD mRNA的表达水平。结果甘糖酯治疗组大鼠,丙二醛(MDA)含量降低,SOD,GSH-Px和CAT的活性显著升高,Cu,Zn-SOD mRNA的表达水平增加;而甘糖酯和DDC联合用药治疗组,DDC抑制了甘糖酯诱导的Cu,Zn-SOD mRNA表达水平和SOD活性的升高,造成MDA含量的相应升高。结论甘糖酯通过诱导抗氧化酶SOD,GSH-Px和CAT的活性,增加Cu,Zn-SOD mRNA的表达水平,清除体内过多的氧自由基,达到抗氧化的目的。 相似文献
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甘糖酯对高脂血症大鼠血脂及脂蛋白脂酶的调节作用 总被引:11,自引:0,他引:11
目的探讨甘糖酯调节血脂的分子机制。方法以不同剂量甘糖酯(37.8,75.6 mg·kg-1·d-1)给高脂血症大鼠ig给药3周,禁食12 h后,测定大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的浓度变化,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测组织中脂蛋白脂酶(LPL)mRNA的表达。结果甘糖酯有降低血清TC,TG和LDL-C,升高HDL-C的作用,同时提高LPL mRNA的表达,且呈剂量依赖性关系。甘糖酯对LPL mRNA转录的促进作用与其降低TC,TG和LDL-C的作用呈正比关系。结论甘糖酯通过促进LPL mRNA转录而调节血脂水平,这可能是甘糖酯降血脂、预防动脉粥样硬化等心脑血管疾病的机制之一。 相似文献