玻璃体内注射辅酶Q10对NaIO3诱导的AMD模型小鼠的保护作用

目的　探讨玻璃体内注射水溶性CoQ10对NaIO₃诱导的年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration,AMD）的保护作用。方法　66只昆明小鼠分为3组:对照组、NaIO₃诱导组（小鼠尾静脉注射NaIO₃）和CoQ10修复组,小鼠尾静脉注射NaIO₃后玻璃体内分别注射高浓度（2.0 g·L^-1）和低浓度（0.1 g·L^-1）的CoQ10,注射平衡液做假处理组。在建模后第7天取材,行常规组织切片、HE染色、GFAP染色、Iba1染色,检测NaIO₃诱导的视网膜病变和CoQ10对该种病变的修复效果。结果　注射NaIO₃ 7 d后,HE染色结果显示,NaIO₃诱导组小鼠视网膜外核层每10 μm 长度的细胞数由正常水平（29.13±3.97）个减少至（17.50±4.03）个,差异有统计学意义（P<0.01）;GFAP染色结果显示,Müller细胞发生反应性胶质化,与对照组相比每250 μm×250 μm面积的细胞数由（21.17±4.26）个增加至（28.67±2.80）个,差异有统计学意义（P<0.01）;Iba1染色结果显示,小胶质细胞呈现出“阿米巴状”的激活形态,每250 μm×250 μm面积的细胞数由（6.71±2.29）个增加至（22.14±3.76）个,差异有统计学意义（P<0.01）。分别对NaIO₃诱导组小鼠玻璃体内注射高、低浓度的CoQ10（2.0 g·L^-1和0.1 g·L^-1）后,与假处理组相比,其中注射高浓度CoQ10（2.0 g·L^-1）组外核层细胞数目显著增加（P<0.05）,而低浓度CoQ10（0.1 g·L^-1）组没有显著差异（P>0.05）。并且,Müller细胞反应性胶质化程度减弱,GFAP阳性细胞数恢复至（23.83±3.87）个;小胶质细胞分枝增多,Iba1阳性细胞数恢复至（16.86±3.29）个,与NaIO₃诱导组相比,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　玻璃体内注射CoQ10可通过减轻Müller细胞的反应性胶质化和抑制小胶质细胞的激活而减缓视网膜感光细胞退化,对AMD起到保护作用。     

小鼠角膜碱烧伤后缺氧诱导因子-1α和水通道蛋白-1在角膜中的表达

目的　检测小鼠角膜碱烧伤后缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α）及水通道蛋白-1（aquaporin-1,AQP1）的表达情况,探讨角膜碱烧伤后HIF-1α及AQP1在其损伤机制中的作用。方法　选用健康成年雌性昆明系小鼠48只,左眼为对照组,右眼用1 mol·L^-1 NaOH建立角膜碱烧伤模型,并随机分为碱烧伤后1 d组、4 d组、7 d组、14 d组,每组12只,免疫荧光染色法和实时荧光定量PCR法检测碱烧伤后角膜HIF-1α、AQP1的表达情况。结果　免疫荧光染色结果显示,对照组中HIF-1α在角膜上皮基底膜弱表达,碱烧伤后1 d HIF-1α在角膜上皮层表达开始增强,4 d在角膜上皮层和基质层均表达,至7 d时HIF-1α表达达到峰值;对照组中AQP1在角膜内皮层弱表达,碱烧伤后1 d,AQP1在角膜内皮层表达开始增强,4 d和7 d时AQP1在角膜内皮层和基质层均表达,且表达更强。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组（188.70±33.99）相比,碱烧伤后1 d组（269.70±15.68）、4 d组（350.50±67.26）、7 d组（272.10±6.88）的HIF-1α mRNA相对表达量增加,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;与对照组（36.43±3.95）相比,碱烧伤后1 d组（61.90±5.45）、7 d组（48.34±1.33）的AQP1 mRNA相对表达量增加,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　碱烧伤引起了角膜病理性变化,HIF-1α和AQP1参与碱烧伤后角膜损伤的病理机制。     

氧化石墨烯对大鼠角膜上皮细胞的致损伤作用

目的 探讨氧化石墨烯(oxidation of graphene,GO)对大鼠角膜上皮细胞的毒性作用.方法 体外培养Wistar雌鼠角膜上皮细胞分为正常对照组、GO干预组,正常对照组不做任何处理,GO干预组在培养时加入不同浓度(0.005 μg·L-1、0.010μg·L-1、0.020 μg·L-1、0.050 μg·L-1、0.100μg·L-1)的GO.MTT法绘制角膜上皮细胞的生长曲线、检测细胞活性;流式细胞术检测细胞的状态分布;HE染色后显微镜下观察亚细胞结构;用DAPI/PI双染以及台盼兰染色的方法进一步验证经GO干预后的细胞状态.结果 经GO干预后的角膜上皮细胞通过HE染色发现细胞内有GO的进入与残留,且细胞形态发生不规则改变,伪足部分出现纤维状结构;MTT结果显示随着GO浓度的增加,细胞活性由(81.55±1.31)％降低至(64.08±0.27)％,随着最低有效浓度的GO(O.005 μg·L-1)干预时间的增加,细胞活性由(82.61±1.36)％降低至(47.92±1.06)％;流式细胞术显示细胞破碎、死亡的比例随着GO浓度的升高,由52.9％上升至92.8％,而凋亡细胞的比例未发生明显变化;DAPI/PI双染及台盼兰染色结果均显示经GO干预后细胞死亡数目的比例急剧升高(均为P＜0.01).结论 GO对大鼠角膜上皮细胞具有毒性作用,提示GO的生物安全性存在隐患.