广东省SARS流行株M基因序列分析

目的：测定广东省不同流行时期13份SARS病毒(SARS CoV)标本的M基因序列，通过分析该基因序列的变异情况，初步了解广东省SARS病毒在流行过程中是否发生了变异。方法：提取病毒RNA，用M基因特异引物进行RT-PCR，将产物纯化后直接测定核苷酸序列。结果：13份标本M基因核苷酸序列同源性很高，为99．7％～100％，M基因核苷酸序列只在2个位点(80和203位)发生变异，1株80位点的变化引起编码的氨基酸从苯丙氨酸(F)变为半胱氨酸(C)，3株203位变化为无义突变。结论：M基因核苷酸序列变异不大，初期和后期M基因核苷酸序列与流行高峰期的毒株相差1个碱基，但氨基酸序列相同；从香港感染病人分离的1株病毒M基因与广东本地感染分离株存在1个氨基酸的差异。     

ELISA与HI试验检测麻疹抗体的比较

本文应用 ELISA 检测麻疹 IgG 和 IgM 抗体,并与 HI 试验进行了比较。两法在检测麻苗初免和普种的成功率表明无明显差异,其抗体滴度相关系数为0. 589～0. 875,呈密切正相关。ELISA-IgM 和 HI 试验在检测33例疑似麻疹患者血清诊断中,阳性率分别为60. 6％和51. 5％。结果认为,ELISA 法完全可以代替 HI 试验进行麻苗接种后的免疫成功率调查和麻疹患者的诊断,具有敏感性高,血清用量少,不需猴血球之优。     

广东省2005-2007年麻疹病原学监测

目的 开展有效的麻疹病原学监测,分离麻疹病毒,了解广东省2005-2007年流行的麻疹野病毒分离株基因特征,为控制、消除麻疹提供科学依据.方法 用Veto/Slam细胞从暴发和散发麻疹疑似病例的咽拭子和尿液标本中分离麻疹病毒,并对所有分离到的麻疹病毒通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,扩增出核蛋白(N)基因碳末端450个核苷酸片段,对其产物测定基因序列以定型.结果 2005-2007年共收到380份标本,包括咽拭子或尿液标本.共分离到82株麻疹野病毒.2005年病毒分离率为23.58%,2006年病毒分离率为17.11%,2007年病毒分离率为39.13%.病毒分离成功率与病例出疹天数和标本的采集质量有密切关系.结论 我省已经掌握了麻疹病毒的分离和分子生物学鉴定技术,分离率较高;我省多年来流行的麻疹毒株均为H1基因型,与国内流行的优势基因型一致.     

13株中国麻疹野病毒血溶素蛋白基因特征分析

目的分析1999～2003年中国（未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区,下同）流行的H,基因型麻疹野病毒代表株血溶素蛋白（Fusion Protein,F）基因的分子特征。方法从1999～2003年中国分离的麻疹野病毒株中,选取13株H1基因型代表株,包括H1a基因亚型麻疹野病毒8株和H1b基因亚型麻疹野病毒5株。使用逆转录一聚合酶链反应扩增病毒的F基因全长,并进行核苷酸序列测定,同时与中国疫苗株及其它国家的A、D2、D6、D7、E基因型参考株进行序列比对及基因亲缘性关系分析。结果1999～2003年13株中国流行麻疹野病毒代表株中,核苷酸同源性为98．1％～99．0％,氨基酸同源性为98．1％～100．0％,与中国疫苗株沪191相比,其核苷酸同源性为95．7％～96．2％,氨基酸同源性为96．9％～97．2％;而与其它基因型相比,核苷酸同源性为94．4％～96．2％。F基因3个糖基化位点（第32、64、70位氨基酸）、对病毒融合功能起着重要作用的第112位精氨酸、第195位亮氨酸未发生改变。结论1999～2003年中国流行的H1基因型麻疹野病毒的F基因无明显差异,F蛋白上已知的重要功能位点未发生变异,推测中国流行的麻疹野病毒F蛋白的结构和功能未发生较大改变,但由于F蛋白是重要的功能蛋白,对F蛋白核苷酸和氨基酸的变异规律进行常规监测,对了解麻疹野病毒流行特点及其遗传变异规律具有重要意义。     

广东省医疗机构新生儿科重症监护病房肠道病毒感染横断面风险监测

摘要 目的 了解广东省医疗机构新生儿科重症监护病房(NICU)医院感染预防与控制的实施效果,为科学评估医院感染暴发风险提供依据。方法 通过横断面调查和卫生学监测方法,对全省283家医疗机构NICU医护工作人员手以及部分环境标本进行检测和肠道病毒进行荧光PCR检测分析。结果 共采集不同类型标本10 554份,肠道病毒核酸检测阳性率为0.35%,其中Echo11占比为37.84%。医护工作人员手,患儿排泄物,病区环境和物体表面以及水样等4类标本肠道病毒核酸阳性率分别为0.03%、3.13%、0.18%和0.21%。结论 广东省医院NICU存在肠道病毒环境污染的情况,潜在幼儿肠道病毒医院感染暴发的风险,应加强风险管理目标和关键环节控制措施,以控制感染暴发的发生。     

广东省传染性非典型肺炎病例的SARS冠状病毒分离株的分子生物学鉴定

目的 对广东省部分传染性非典型肺炎(SARS)病例的SARS冠状病毒分离株进行鉴定，并初步建立SARS冠状病毒PCR检测方法。方法 采集临床诊断为SARS病例的咽漱液标本，进行多种细胞分离培养，对出现病变的细胞分离物采用冠状病毒特异引物通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及巢式聚合酶链反应(Nested—PCR)进行扩增，并对部分扩增片段进行序列测定，应用DNASTAR软件分析比较oN时采用间接免疫荧光(IFA)和ELISA法检测上述患血清中SARS冠状病毒Igc抗体。结果 对21例SARS患的细胞分离物进行PCR扩增，结果均阳性，其中12份患咽漱液标本PCR扩增结果也阳性，序列测定及基因分析表明，广东省SARS病例的病毒分离株为冠状病毒，其基因序列与WHO公布的SARS基因序列一致，氨基酸序列与目前已知的冠状病毒同源性为58％～76％。时对21例患进行血清学检测，其中IFA检测有9例阳性，ELISA检测有12例阳性。结论 从广东省部分SARS病例标本中分离的病毒株是一种新的冠状病毒，PCR检测具有早期、快速的优点。     

三种IgM酶联免疫试剂盒在麻疹病例实验室诊断中的应用比较

目的对三种抗麻疹病毒IgM酶联免疫试剂盒(海泰快速法、海泰普通法和德国试剂A)在麻疹病例早期诊断的应用进行比较。方法采用双盲法,用三种试剂盒对麻疹疑似病例急性期血清样品平行检测。结果海泰快速法、海泰普通法和德国进口试剂A等三种抗麻疹病毒IgM酶联免疫试剂对170份麻疹疑似病例急性期血清样品的阳性检出率分别为67.65%、64.71%和62.35%;灵敏度分别为100%、99.1%和94.4%;特异度分别为88.7%、95.2%和93.5%;调整一致性分别为95.7%、97.5%和93.7%;约登指数分别为0.887、0.942和0.880。结论三种试剂盒检测结果符合率较高,另外海泰快速法的灵敏度最高,海泰快速法和海泰普通法在敏感性及特异性上都有较为理想的结果,而且海泰快速法试剂操作更为简便、快速,更适合于基层疾病控制部门快速诊断麻疹病例,采取措施,控制疫情。     

L20B细胞在脊髓灰质炎病毒分离中的应用

由于Ｈｅｐ－２细胞、ＲＤ细胞不仅对脊灰病毒敏感,而且对其他非脊灰肠道病毒（ＮＰＥＶ）也敏感,所以在使用Ｈｅｐ－２细胞、ＲＤ细胞对脊灰病毒分离鉴定的过程中,浪费了大量的人力物力在非目标病毒上。为此ＷＨＯ下发一种新细胞株Ｌ２０Ｂ细胞,取代Ｈｅｐ－２细胞在脊灰病毒分离鉴定中的作用。我们用Ｌ２０Ｂ细胞对１９９８年上半年Ｈｅｐ－２、ＲＤ细胞分离阳性的４６份ＡＦＰ病例粪便标本进行复检,并与Ｈｅｐ－２和ＲＤ细胞的结果进行比较,现将结果报告如下：１　材料与方法１－１　标本来源广东省１９９８年ＡＦＰ病例中Ｈｅｐ－…     

1985～1992年广东省脊髓灰质炎病原流行病学研究

应用单克隆抗体对广东省１９８５～１９９２年脊髓灰质炎（下称脊灰）流行区的急性迟缓性麻痹（ＡＦＰ）病例粪便标本中分离出的２５４株脊灰病毒作病原分析．结果Ⅱ、Ⅲ型均未发现野毒株，而Ⅰ型２０５株中有１１９株为野毒株，７１株的抗原排列具野毒株和疫苗株的双重抗原位点，且有逐年增加的趋势，表明此期间广东的脊灰流行株主要为Ⅰ型。抽取具双重抗原位点毒株中的２株同时用Ⅰ型野毒株及ＳａｂｉｎⅠ疫苗株的特异ＰＣＲ检测，并进行核甘酸测序，发现其基因组在３２６２／３２６３处重组，证实为后二者的重组株，此２例患者均有服苗史，早期检测有高滴度抗体，提示其可能成为消灭脊灰不可忽视的障碍。     

广东省2005年麻疹监测实验室网络运转状况分析

目的评价广东省2005年麻疹监测实验室网络在麻疹监测中的作用。方法对广东省2005年麻疹监测实验室网络的检测结果和数据进行分析。结果广东省2005年麻疹监测系统共报告麻疹疑似病例13 017例,麻疹监测实验室网络检测血清标本10 041份,全省麻疹疑似病例血清标本采集率为77.14%,麻疹IgM抗体检测阳性率为71.43%。21个市疾病预防控制中心(CDC)麻疹实验室职能考核,符合率为98.10%;麻疹IgM抗体再证实标本符合率为90.76%。2005年省CDC麻疹实验室接受中国CDC病毒病预防控制所国家麻疹实验室职能考核和再证实标本复核检测,成绩均为100分。全年共收检106份咽拭子或尿液标本,分离到25株麻疹病毒,经鉴定均为H1基因型。结论广东省2005年麻疹监测实验室网络运转正常,在麻疹病例监测中起到重要作用。应进一步加强麻疹IgM抗体检测试剂的管理。