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利用旋转壁式生物反应器(Rotating wall vessel,RWV)体外培养脐带血干细胞,使其大量扩增,以满足临床应用对造血干/祖细胞的数量与质量要求。从脐带血分离得到的单个核细胞(Mononuclear cells,MNC)在T-flask中培养24h,之后接种到RWV反应器中,培养200h。每24h细胞计数,测量培养基的pH和渗透压变化;在144h和197h测CD34 细胞含量并做CFU-GM半固体培养。有核细胞(Nucleated cells,NC)与CD34 细胞在第197h,分别扩增了435.5±87.6倍和32.7±15.6倍,CFU-GM(Colony-forming unit-granulocyte/macrophage)细胞扩增了21.7±4.9倍。整个培养过程中,RWV反应器中的pH和渗透压都保持在造血细胞最佳的扩增条件内,pH基本保持在7.2~7.4之间,渗透压基本保持在290~310mmol/kg之间。由于旋转壁式生物反应器(RWV)结构上的特殊性,可以保证细胞在悬浮流动的状态下生长,很好地模拟了脐带中的造血微环境,使脐带血造血干细胞在该反应器中短期内得到大量扩增。 相似文献
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目的 探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)患者的单核细胞/高密度脂蛋白胆固醇比值(monocyte to high density lipoprotein cholesterol, MHR)与糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin, HbA1c)的相关性。方法 选取2020年9月~2021年9月于徐州医科大学附属医院内分泌科住院治疗的T2DM患者319例,根据HbA1c水平分为两组,即血糖控制良好组(HbA1c<7%,n=101)和血糖控制不良组(HbA1c≥7%,n=218)。比较两组患者的一般资料、生化指标,计算中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil-to-lymphocyte ratio, NLR)、MHR。结果 与血糖控制良好组比较,血糖控制不良组患者的白细胞计数(white blood cell count, WBC)、中性粒细胞计数(neutrophil count, NE)、单核细胞计数(monocyte count, MO)、甘油三酯(triglyceride, TG)、空腹血糖(fastin... 相似文献
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连续性血液净化治疗难治性心力衰竭 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 观察连续性血液净化(continuous blood purification,CBP)技术治疗难治性心力衰竭患者的临床疗效.方法 采用美国Baxter BM25床旁血滤机,Fresenius Polysulfone AV600S血滤器.置换液采用南京军区总院配方,置换液流量2~3 L/h.前稀释法,血流量150~220 mL/min,低分子肝素首剂15~20 U/kg静脉注射抗凝,此后追加7.5~10.0U/kg·h-1.24 h连续治疗,持续2~10 d.连续治疗8 h更换血滤器、血滤管路.同时针对原发病给予病因治疗,患者病情好转,改为CBP 6~12 h/d,再改为药物治疗.结果 15例患者显效11例,有效3例,无效1例,总有效率93.3%.结论 CBP技术治疗难治性心力衰竭患者临床症状改善明显,不良反应发生率低. 相似文献
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原儿茶酸对体外培养的神经干/祖细胞增殖及凋亡的影响 总被引:4,自引:1,他引:3
目的观察原儿茶酸对体外培养的神经干/祖细胞的增殖和自发性凋亡的影响。方法神经干/祖细胞取自胚胎14 d小鼠海马组织,以悬浮方式在培养器皿中培养成"神经球"。CCK-8试剂盒检测细胞的生存力,B rdU染色标记分析细胞的增殖。结果培养4 d后,神经干/祖细胞发生了自发性凋亡,原儿茶酸(0.06 mmo.lL-1)有效地减少了该种凋亡,将细胞的存活率提高至对照组的140.3%±9.2%;细胞培养4 d和7 d,原儿茶酸(0.06 mmo.lL-1)使细胞内ROS水平分别下降至对照组的43.8%±4.7%和54.5%±6.1%,caspase-3活性下降至对照组的70.6%±4.4%和62.3%±5.5%。结论原儿茶酸剂量和时间依赖地提高了神经干/祖细胞的生存力并且刺激了细胞的增殖。 相似文献
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背景:骨髓间充质干细胞在体外易分离和扩增,还易于外源基因的转入及表达,在人类医学上被认为是一种理想的治疗性细胞和基因治疗中的靶细胞。
目的:探讨脂质体介导胞嘧啶脱氨酶基因转染兔骨髓间充质干细胞及其基因的表达。
设计:单一样本观察。
单位:大连市干细胞与组织工程研发中心,大连医科大学基础医学院生化室。
材料:实验于2006-03/2007-06在大连市干细胞与组织工程研发中心及大连医科大学基础医学院生化室完成。新西兰大白耳兔,5月龄,雌雄不拘,体质量2.0~2.5 kg。
方法:以大肠杆菌JM109基因组DNA为模板,用PCR方法获得目的基因片段,定向克隆至载体pMD19-T,限制性内切酶消化鉴定、基因测序后,构建pIRES2-AcGFP1-CD真核表达质粒。同时对兔骨髓间充质干细胞取材、培养、鉴定。真核表达质粒经酶切鉴定后,采用Lipofectamine 2000介导法转染经过鉴定的兔骨髓间充质干细胞。并于转染后24 h 在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。
主要观察指标:表达载体的构建及基因转染骨髓间充质干细胞鉴定。
结果:实验克隆出胞嘧啶脱氨酶基因,并将其与带荧光的真核表达载体pIRES2-AcGFP1连接。经转染兔骨髓间充质干细胞24 h 后,在倒置荧光显微镜488 nm 蓝光激发下观察,pIRES2-AcGFP1-CD组和pIRES2-AcGFP1空载体组均可见细胞发出绿色荧光,未经转染的细胞未见发出绿色荧光,说明胞嘧啶脱氨酶基因成功转染了骨髓间充质干细胞。
结论:骨髓间充质干细胞有望成为胞嘧啶脱氨酶基因治疗中的理想载体。 相似文献
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目的 探讨血尿酸/高密度脂蛋白胆固醇比值(UHR)与新诊断T2DM患者IR的相关性,评估UHR预测IR的价值。方法 选取2021年1月至2022年2月于徐州医科大学附属医院内分泌科治疗的新诊断T2DM患者304例(T2DM组),另选取同期体检健康者101名为正常对照(NC)组。比较两组一般资料及生化指标,计算甘油三酯葡萄糖乘积(TyG)指数、UHR及胰岛素抵抗指数(HOMA2-IR)。根据HOMA2-IR四分位数将T2DM组分为非IR亚组(N-IR,n=228)和IR亚组(IR,n=76),比较两亚组一般资料及生化指标。结果 T2DM组HOMA2-IR、TyG指数、UHR高于NC组(P<0.05或P<0.01)。与N-IR亚组比较,IR亚组BMI、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数(NE)、淋巴细胞计数(LY)、血尿酸(SUA)、FPG、TG、TyG指数、UHR升高(P<0.05或P<0.01),年龄、HDL-C降低(P<0.05或P<0.01)。Spearman相关分析显示,IR与BMI、WBC、NE、LY、FPG、TG、SUA、TyG指数、UH... 相似文献
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背景:骨髓间充质干细胞在体外易分离和扩增,还易于外源基因的转入及表达,在人类医学上被认为是一种理想的治疗性细胞和基因治疗中的靶细胞。
目的:探讨脂质体介导胞嘧啶脱氨酶基因转染兔骨髓间充质干细胞及其基因的表达。
设计:单一样本观察。
单位:大连市干细胞与组织工程研发中心,大连医科大学基础医学院生化室。
材料:实验于2006—03/2007—06在大连市干细胞与组织工程研发中心及大连医科大学基础医学院生化室完成。新西兰大白耳兔,5月龄,雌雄不拘,体质量2.0~2.5kg。
方法:以大肠杆菌JM109基因组DNA为模板,用PCR方法获得目的基因片段,定向克隆至载体pMD19-T,限制性内切酶消化鉴定、基因测序后,构建pIRES2-AcGFP1-CD真核表达质粒。同时对兔骨髓间充质干细胞取材、培养、鉴定。真核表达质粒经酶切鉴定后,采用Lipofectamine2000介导法转染经过鉴定的兔骨髓间充质干细胞。并于转染后24h在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。主要观察指标:表达载体的构建及基因转染骨髓间充质干细胞鉴定。
结果:实验克隆出胞嘧啶脱氨酶基因,并将其与带荧光的真核表达载体pIRES2-AcGFP1连接。经转染兔骨髓间充质干细胞24h后,在倒置荧光显微镜488am蓝光激发下观察,pIRES2-AcGFP1-CD组和pIRES2-AcGFP1空载体组均可见细胞发出绿色荧光,未经转染的细胞未见发出绿色荧光,说明胞嘧啶脱氨酶基因成功转染了骨髓间充质干细胞。
结论:骨髓间充质干细胞有望成为胞嘧啶脱氨酶基因治疗中的理想载体。 相似文献
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神经干细胞的体外大规模培养对于细胞移植治疗中枢神经系统受损及各种神经退行性疾病有重大意义。体外呈球状生长的神经干细胞球在长大到一定尺寸之后,有可能在其内部由于养分缺乏而形成坏死细胞,这对于干细胞的有效扩增是极为不利的。因此,模拟神经球的动态生长过程并分析出现坏死细胞的临界神经球尺度对于神经干细胞的大规模扩增有重要意义。本研究采用元胞自动机技术建立了模拟神经球生长的动态模型,并结合神经球内养分的扩散传递模型,求解神经干细胞球内出现坏死细胞的临界神经球尺寸以及坏死细胞的扩大规律。计算结果表明,坏死细胞的出现与体外培养条件有一定关系;坏死细胞的出现主要取决于神经球的尺寸,其外部再好的培养条件也不可能抑制坏死的出现。此外,计算结果还表明,神经球内由于氧缺乏而形成的坏死细胞的出现要早于由于葡萄糖缺乏时的情况,并且坏死细胞一旦出现,其增长速度就非常快,有可能很快使整个神经球成为坏死细胞球。本研究所建立的CA模型及神经球内的传质模型可以很好的模拟神经球的生长过程。 相似文献