实时荧光定量PCR检测ESBLs基因型方法的研究

目的:建立一种快速检测革兰阴性杆菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs )耐药基因分型的SYBR GREEN Ⅰ实时荧光定量PCR方法.方法:针对临床常见ESBLs的耐药基因SHV、TEM、 CTX-M、OXA及其同源性分析,设计了SHV、TEM 、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、OXA-1、OXA-2及OXA-10 共9对特异性引物,煮沸法提取DNA模板,建立并优化SYBR GREEN I实时荧光定量PCR反应体系,并对其精密度、线性范围进行测定.利用建立方法对51株表型阴性的多重耐药的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌进行ESBLs耐药基因检测,并与改良三维实验进行对比.结果:从39株ESBLs表型阳性菌株及51株ESBLs表型阴性多重耐药菌株中扩增出除OXA-2外共8种耐药基因型并经测序证实.线性检测范围3×10~3~3×10~8拷贝/mL , r ＝ -0.994 7 ;批间重复性试验变异系数(CV)为9.6%.荧光定量PCR方法与改良三维实验方法比较差异无统计学意义( χ2 = 1.125,P > 0.05).结论:SYBR GREEN Ⅰ实时荧光定量PCR检测ESBLs的耐药基因具有特异性强、灵敏度高、快速、简便的特点,适于临床监测革兰阴性杆菌产ESBLs 基因型.     

天津地区医院产ESBLs菌株基因型研究

目的 了解天津产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌基因型及耐药情况.方法 收集部分医院临床分离218株产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌,利用实时荧光定量PCR方法检测CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、TEM、SHV、OXA-1、OXA-2、OXA-10耐药基因,结合Tm值将其分型.结果 109株产ESBLs大肠埃希菌耐药基因CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、TEM、SHV、OXA-1分别为32.1%、0.9%、0.9%、33.9%、73.4%、27.5%、15.6%,携带>2种基因菌株达66.1%;109株产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药基因CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9,TEM、SHV、OXA-1、OXA-10分别为49.5%、2.8%,1.8%、22.9%、78.9%、76.1%、33.0%、9.0%,携带>2种基因达82.2%;检测菌株对亚胺培南保持高度敏感.结论 天津市肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌ESBLs的基因型以SHV型、TEM型、CTX-M-1型、CTX-M-9型为主,OXA呈上升趋势,各医院肺炎克雷伯菌耐药基因型存在一定差异.     

天津市50家医院血清肌酐、尿微量白蛋白的检测现况研究

目的通过对天津市血清肌酐（SCr）、尿微量白蛋白（mAlb）的检测现况进行调研,了解其检测系统存在的问题,使2项指标检测规范化。方法对天津市50家医院进行现场问卷调查及电话咨询;使用SPSS统计软件对数据进行处理分析。结果天津市各医院SCr和尿mAlb检测系统复杂、方法繁多导致检测数值有很大差异,且参考区间制定不规范导致其波动范围很大。结论建议规范SCr、尿mAlb检测系统及质控的管理,实现不同检测系统间检测结果的可比性,保证实验室检测质量。     

临床分离1229株菌的耐药性分析及超广谱β—内酰胺酶的检测

目的 探讨临床药敏试验对医院感染控制的指导意义。方法 医院检验科收集临床分离菌1229株,应用K-B琼脂扩散法进行药敏试验,对306株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,应用纸片法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)。结果 在革兰阴性杆菌中铜绿假单胞菌的耐药指数最高,在革兰阳性球菌中肠球菌耐药指数最高,亚安培南对革兰阴性菌抑菌效果明显优于其他抗生素,万古霉素对革兰阳性球菌的抑菌效果最佳,从大肠埃希菌,肺炎克雷伯菌中检出产ESBLs的菌分别为28.5％和30.3％,产酶菌株对头孢菌素高度耐药,对环丙沙星,庆大霉素及复方新诺明等耐药率明显高于非产酶菌(P<0.01),而对亚安培南则敏感(P<0.05)。结论 耐药指数越高,耐药面越广,耐药率越高。     

TR与MIC在酵母菌的体外药敏试验中的临床应用

目的 对TR和MIC值在酵母菌的体外药敏试验中的临床应用进行评价。方法 应用常规方法及VITEK YBC鉴定酵母菌，采用微量稀法测定MIC值，分析酵母菌对7种抗真菌药物耐药性。并计算TR值，对TR、MIC、血药峰值、给药途径进行综合分析。结果 所分离的酵母菌以白色念珠菌最多，共214株，占78．1％。其对5－氟胞嘧定高度敏感，其TR与MIC的几何均数之比亦最高，为619．82μg/ml(口服2000mg)和1033．04μg/ml（静滴2000mg)。结论 应用TR与MIC联合报告对指导临床选用最有效的抗菌药物和最佳给药途径具有重要意义，可使最小的用药剂量和药物副作用达到最佳杀菌效能。