低温海水浸泡对大鼠血浆蛋白质组的影响研究

目的模拟海难落水所致重度低体温损伤,比较鉴定低温海水浸泡模型动物血浆蛋白质组差异,为研究低体温相关血浆蛋白提供线索。方法将50只雄性健康Wistar大鼠平均分成5组,分别在低温海水中浸泡0、2、4、6、10 h后采集下腔静脉血。分离血浆后,用试剂盒去除Ig G和白蛋白等高丰度蛋白,并经过除盐后采用蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离。对差异1.5倍以上的蛋白斑点,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行肽质量指纹图谱分析,应用NCBI或Swiss-prot数据库鉴定差异蛋白质。结果大鼠浸泡在15℃海水中,中心体温(肛温)迅速下降,浸泡30 min降至19℃,浸泡120 min降至16℃左右,体温维持不变,说明进入重度低体温状态。初步鉴定出3个与低温相关差异蛋白,肺表面相关蛋白A(SP-A)、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3K(SPA3K)和抑制物组织基质金属蛋白酶抑制剂-3(TIMP-3)。与正常大鼠相比,这3个蛋白的表达水平均随着低温海水浸泡时间的延长明显上调。结论低温海水浸泡后的大鼠血浆蛋白质组相对正常大鼠血浆蛋白质组有改变。研究差异蛋白有助于阐明低温损伤的分子机制,为研究和治疗低体温症提供靶标。     

近交系小鼠双色荧光正相杂交芯片技术体系的建立和优化

目的探讨采用单核苷酸多态性（SNP）检测方法-双色荧光正相杂交芯片技术对近交系小鼠遗传质量监测及相关影响因素。方法运用基于芯片的双色荧光正相杂交检测SNP技术,进行芯片杂交动力学研究,考察信号值（Cy3,Cy5）和ratio值（Cy5/Cy3）与PCR产物点样浓度、PCR产物长度和荧光标记探针长度之间的关系,研究PCR产物点样浓度、PCR产物长度和荧光标记探针长度对SNP分型的影响。结果采用正反标记实验后,Ratio值随着PCR产物点样浓度的增加呈稳定趋势;PCR双链产物长度对信号值影响比较大,点样时其长度不宜太长,最好不超过450 bp;随荧光标记探针长度的增加,基因分型能力明显下降,长度为15 bp最佳,长度超过20 bp时,已基本没有区分能力。结论PCR产物点样浓度、PCR产物长度和荧光标记探针长度是双色荧光正相杂交SNP分型系统的重要影响因素,采取适当的PCR产物点样浓度、PCR产物长度和荧光标记探针长度,并采用正反标记实验,可以取得稳定、准确的基因分型效果。为进一步进行近交系小鼠遗传质量监测的研究奠定基础。     

喘咳糖浆合哮喘丸治疗小儿支气管哮喘

我科用喘咳糖浆合哮喘丸治疗小儿哮喘62例,获得一定的疗效,其中急性发作1～3天内停止及临床症状消失者20例,急性发作明显减轻、临床症状在4～7天内消失者32例,总有效率为84%.喘咳糖浆是小青龙汤合三子养亲汤加减组成.每33毫升内含麻黄3克、杏仁9克、甘草3克、细辛3克、五味子15克、干姜3克、姜汁生半夏9克、苏子6克、白芥子6克(用现代西药配制的方法,使温性药物保持一定的性能).主治风寒客表,水饮内停.日服3次,每次10毫升.     

中药“静灵口服液”治疗小儿多动症40例

小儿多动症又名轻微脑功能失调综合征,简称MBD,是指智力正常儿童或者是接近正常儿童平时有活动过多,注意力不集中,并有不同程度的学习困难和行为异常。据国外文献报道,本病在儿童中发病率达5～10%,男孩较女孩更多见。     

人源性抗食管癌细胞单链抗体的表达纯化及活性鉴定

目的研究噬菌体抗体库中筛选得到的抗食管癌细胞的单链抗体的功能,对单链抗体进行包涵体表达纯化。方法将从噬菌体抗体库中筛选到的2个单链抗体基因分别连接到pET-28a、pET-SUMO原核表达载体中,分别构建原核表达重组载体pET-NFC20b、pET-NFC70a,将其转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)表达系统中进行融合表达,对诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG）浓度、诱导时间和温度等诱导表达条件进行优化。采用盐酸胍稀释滴定复性方法对抗食管癌肿瘤细胞表面抗原的抗体进行复性,并用SDS-PAGE及质谱技术鉴定表达产物。结果成功构建了重组载体pET-NFC20b、pET-NFC70a,对重组菌株pET-NFC20b、pET NFC70a蛋白表达进行鉴定,诱导条件为0.5 mmol/L IPTG、时间3 h、温度18 ℃,重组蛋白均以包涵体形式表达,经滴定复性后均获得了相对分子量为30 kD和40 kD的重组蛋白。细胞ELISA实验鉴定2种蛋白NFC20b、NFC70a能与KYSE-170、KYSE-150、SMMC7721、A549等细胞结合,具有生物学活性。结论噬菌体抗体库中筛选得到的抗食管癌细胞的单链抗体NFC20b和NFC70a,可以成功地构建到pET28a和pET-SUMO载体内进行包涵体表达,纯化后具有蛋白活性,可为后续实验及检测试剂的研发奠定基础。     

胎球蛋白A的纯化及其对3T3-L1脂肪细胞胰岛素通路的抑制作用

目的 对胎球蛋白A(AHSG)蛋白进行纯化,并探讨其对脂肪细胞胰岛素通路的调节作用.方法 通过硫酸铵沉淀、PEG沉淀、DEAE离子交换和Protamine亲和层析方法纯化血浆中的AHSG蛋白.培养3T3-L1前脂肪细胞并分化为成熟脂肪细胞,置于低糖DMEM培养基培养,然后加入终浓度为100μg/ml和600μg/ml的AHSG及终浓度为600μg/ml的人白蛋白(HAS)分别进行培养,最后用不同浓度(0、10、20nmol/L)的胰岛素刺激细胞.采用Western blotting检测AHSG和HSA对3T3-L1脂肪细胞胰岛素下游分子IRS-1和Akt的磷酸化水平的影响.结果 从血浆中纯化的AHSG蛋白纯度达90%以上.纯化的AHSG在100μg/ml浓度下可以减弱胰岛素对IRS-1蛋白磷酸化的影响,在600μg/ml浓度下可以完全抑制IRS-1蛋白磷酸化;纯化的AHSG在100μg/ml浓度下可以减弱胰岛素对Akt蛋白磷酸化的影响,在600μg/ml的浓度下可以明显抑制Akt蛋白的磷酸化,而600μg/ml的HAS则不能抑制IRS-1和Akt蛋白的磷酸化.结论 从血清中纯化出的AHSG在生理浓度下可以抑制胰岛素对3T3-L1细胞中IRS-1和Akt蛋白的磷酸化作用,在脂肪细胞胰岛素通路中扮演着重要角色.     

治疗100例小儿支气管哮喘的临床分析和体会

我科自1963年下半年起,设立小儿支气管哮喘专科治疗以来,取得了一定的效果。兹择资料较完整的100例作初步介绍。其中31例系住院病例,69例系门诊病例。临床资料(1)诊断标准:1.典型反复发作史(遇寒冷及疲倦等即发作)。2.家属遗传史及渗出性素质(如奶癣、湿疹、荨麻疹等)。3.发作时的典型症状及肺部体征:呼吸困难、喘息和肺部(氵弥)散性哮鸣音及少数湿罗音。4.典型的X 线表现:两肺透明度增强,肋骨下降,心界缩小等。5.血液中嗜酸性细胞增加(由于小儿不会吐痰,故痰液检查不能进行)。     

中医药治疗小儿蛔虫性肠梗阻12例

蛔虫性肠梗阻,为儿科常见的急腹症之一。患者常具备下列典型的临床症状:1)阵发性腹痛及绕脐疼痛,并有汗多及肢冷,脉多沉细、或弦紧、或细数;2)持续性呕吐及吐蛔虫,并有明显蛔虫史;3)腹部可触及索条状块物。我院根据徐仲才医师对本症的诊治经验,治疗12例蛔虫性肠梗阻,效果尚属满意。兹报导于后。     

CLINICAL OBSERVATION AND TREATMENT OF HYPERKINESIA IN CHILDREN BY TRADITIONAL CHINESE MEDICINE

Sixty-six children with hyperkinesia were treated with the Yizhi (wit-increasing) syrup, af-ter which their scores on behavior dropped, their school records improved, and the rate of appearance of soft neurotic signs lowered, all three changes being significant, giving a total effectiveness rate of 84.8%. After the treatment, examination of the 24-hour urine showed significant increases in its content of norepinephrine (NE), dopamine (DA), 3-4 dihydroxy phenylacetic acid (DOPAC), cyclic adenosine monophosphate (cAMP), and creatinine (Cr).