应对生物恐怖的检测技术研究进展

生物恐怖对人类的威胁是巨大而多元化的,现场快速诊断以确定生物恐怖的性质,对于采取正确而及时的应对措施至关重要。本文综述了可能被用作生物恐怖活动的各类生物有害物质,包括传染性极强的病原体或剧毒物,以及针对这些生物有害物质的检测技术研究新进展。     

SEN病毒D亚型ORF1-C端基因的克隆、表达和鉴定

目的:获得SENV-D亚型ORF1-C端蛋白基因序列,并进行表达,为进一步研究及诊断、治疗应用奠定基础.方法:用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV-DORF1C端基因,测序验证后,构建了pQE30-SENV-D重组表达质粒,并经过转化E.coli M15,IPTG诱导表达,Western blot分析表达结果.结果:获得了正确序列的SENV-D亚型ORF1-C端蛋白基因序列,表达出Mr约为38×103的蛋白.表达蛋白能与患者血清中相应的抗体结合,发生抗原抗体反应.结论:成功获得并表达了SENV-D-ORF1-C端蛋白,并经Western blot印迹法证实能与阳性血清中的抗体发生抗原抗体反应,有可能用于检测SENV-D抗体.为今后进一步研究有助于疫情监测及早期发现感染者的抗体奠定了坚实的基础.     

T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA的方法

目的：建立一种应用T7 RNA聚合酶体外转录合成大量siRNA的方法。方法：以萤火虫荧光素酶为靶标，应用T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA，脂质体转染法将其导入HepG2细胞中，通过测定荧光素酶的量，评价siRNA对萤火虫荧光素酶基因表达的抑制作用。结果：合成了以萤火虫荧光素酶为靶标的siRNA，合成的siRNA能特异性地抑制荧光素酶基因的表达，抑制率为80％。结论：建立了一种经济简便的体外合成siRNA的方法。     

血小板抗体检测技术进展

人类血小板抗原（HPA）是一组复杂的不均一的膜蛋白系统，由于感染或免疫因素引起的血小板抗体与临床输血和疾病诊断关系密切。近年来，随着检验医学的发展和检测技术的不断更新，对血小板抗体的本质和靶抗原的研究日益深入，HPA的生化特性及其遗传学多态性逐渐被揭示，血小板血型的研究从血清学方法发展到分子免疫学方法，为血小板抗体的检测及其膜糖蛋白分析提供了新的检验技术，对研究手段的完善以及疾病的诊断具有重要的临床意义。如何提高血小板抗体检测技术将成为输血与检验医学今后的研究重点。我们就上述方面的技术进展作一综述。     

HCV感染人LDLR转基因小鼠肝癌细胞的初步研究

近年来在研究HCV与易感细胞的相互作用中发现 ,血清中的HCV颗粒是与 β 脂蛋白或IgG结合形成复合物(HCV RNAcarryingmaterial,HCVrcm ) ,HCVrcm通过与细胞表面的脂蛋白受体分子结合进入细胞 ,这种复合物的形成有利于HCV与靶细胞的结合和HCV的持续感染。人低密度脂蛋白受体(hLDLR)是一种表达在细胞表面的脂蛋白受体分子 ,是HCV感染细胞的重要受体 ,它在介导LDL进入细胞的过程中同时将HCV带入胞内。HCV能感染人的肝脏细胞 ,但是不能感染小鼠的肝脏细胞 ,分析可能原因是小鼠的肝脏细胞表面的小鼠低密度脂基金项目 :国家自然科…     

脂联素对刀豆球蛋白A诱导小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的探讨脂联素(ADPN)是否对肝脏的免疫性损伤具有保护作用以及可能的作用机制。方法将小鼠ADPN基因高效表达载体导入小鼠体内,获得高血清ADPN模型小鼠(表达载体组),与导入空载体的对照小鼠(空载体组)同时静脉内注射刀豆球蛋白A(Con A),以诱导肝脏的免疫性损伤,测定不同时间点血清ALT浓度,并进行肝组织病理学检查(HE染色),观察两组小鼠肝脏损伤程度是否有差异。比较两组间血清TNFα浓度的不同,探讨可能的作用机制。结果表达载体组小鼠注射Con A后血清ALT水平的升高明显低于空载体组,差异有统计学意义(P<0.01),组织学检查也显示表达载体组小鼠的肝损伤明显低于空载体组。经统计分析表明,ALT水平与血清ADPN水平成负相关(r=-0.5034,P=0.0121)。表达组小鼠血清TNFα水平明显低于空载体组(P<0.01)。结论脂联素对Con A诱导的肝脏免疫性损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制TNFα的产生进而阻断肝细胞遭受免疫性攻击有关。     

PG消毒剂的研究

PG 消毒剂含2%强化中性戊二醛,醇类和香料.该消毒剂对细菌、真菌与 HBsAg 有良好灭活作用.以其制成消毒纸巾擦手1分钟,可将自然菌减少99%.     

O_(139)霍乱弧菌随机扩增多态性DNA特征

非O1群霍乱弧菌如 O_(139)血清型能产生霍乱肠毒素(CT),引起人类霍乱流行。早在1992年印度首先流行,此后国内也有该病流行。然而该菌起源如何,与O1群霍乱瓜菌在遗传特征上有何联系尚有待于探讨。该文用PCR、DNA序列分析、随机扩增多态性DNA(RAPD)对非O1群霍乱弧菌O_(139)血清型及O1群霍乱弧菌DNA分子特征进行探讨,以对该病原的监测及霍乱病的预防提供参考。     

乙型肝炎病毒亚型基因分类方法及其应用

HBV亚型分类学基础HBV基因组中的S区负责编码不同亚型的表面抗原决定簇;其中的a为共同决定簇,w/r和d/y为相互排斥的亚型决定簇。因此可根据HBsAg,用血清学和免疫学方法将HBV分成adr、adw、ayr和ayw4个主要亚型。虽然也发现了一些特殊的亚型决定簇,如x、n、t、q、Re、j和k等,但并不常见。1975年巴黎国际会议上将HBsAg确定为10个亚型(表1)。由于各亚型之间的HBV-DNA核苷酸序列存在差异,导致其相应的氨基酸序列不同和酶切位点的变化。因此可在基因水平上对HBV进行分类。     

SEN病毒D亚型中国株流行病学及序列变异

目的 了解SEN病毒D亚型中国株的流行病学特点及其进化地位。方法 分析已知的基因序列设计引物，建立半套式PCR检测方法，对58份献血者血清样本和25份non-A-E肝炎患者血清样本进行了SENV-D亚型的检测，并对部分阳性血清的PCR产物进行克隆测序。结果 无偿献血者中SENV-D亚型感染率为45％，在non-A-E肝炎患者中SENV-D亚型感染率为48％，两者间差异无显著性；但在无偿献血者中SENV-D亚型的阳性检出率大大高于国外报道。测序结果经BLASTP软件在GenBank中检索表明，各测序株均与已知的SENV-D株序列有很高的同源性，并在此基础上用MegAlign软件进行进化树分析。结论 建立的半套式PCR检测方法适用于SEN病毒D亚型检测；SENV-D亚型中国株之间以及与已发表的国外SENV-D株序列之间有变异。与无偿献血者相比，non-A-E肝炎患者血清SENV-D株无进化上的显著倾向性。在测序的部分ORFl序列中存在一个核苷酸高变区。