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HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 在原核表达系统中对HIVp2 4抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性。方法 利用PCR技术从HIV-1全基因质粒 (B2N)中扩增p2 4抗原基因 ,并克隆入T载体中。通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上 ,用此连接产物转化大肠埃希菌BL2 1,经IPTG诱导 ,表达p2 4抗原。利用固定化金属离子 (Ni2 )配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白。并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、WesternBlot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测。结果 PCR产物约为 6 90bp ,与预期p2 4抗原全基因片段大小一致。重组质粒T-p2 4和pRSET-p2 4经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,其插入的外源基因片段均为 6 90bp。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS PAGE电泳 ,均可见一条约 2 4× 10 3的外源基因表达带 ,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA试验 ,证明基因工程表达的p2 4抗原具有较高的特异性及活性。结论 成功构建了HIVp2 4表达载体pRSET-p2 4 ,并在原核细胞中高效表达 ,其表达产物具有良好的特异性及活性 相似文献
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目的:研究急性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒序列。方法:提取急性乙型肝炎患者血清中HBV DNA,扩增其表面抗原序列,测序并相互比较。结果:测定5例急性乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒均为adw亚型,其中3例同源性>99%。结论:adw亚型HBV感染后较多为急性病变,由于病毒变异少,机体有可能清除HBV。 相似文献
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进一步说明慢性重型肝炎分型存在的必要性 ,以及说明由慢性肝炎和肝硬化引起的慢性重型肝炎的异同。使用SPASS软件和SDAS软件对 1997~ 1999年收治的 4 88例慢性乙型重型病毒性肝炎患者的临床主要特点进行分析。结果表明 :( 1)慢性重型肝炎占重型肝炎的 92 .0 3% ( 52 0 /565) ,其中成年慢性乙型重型肝炎 4 88例 ,占 93.85% ,慢性重型肝炎发生于慢性肝炎的为 158例 ( 32 .4 % ) ,发生于肝硬化的为 330例 ( 67.6% )。 ( 2 )无论是慢性肝炎 ,还是肝硬化 ,入院时即变重型 ,PTA及TB达到重型肝炎诊断标准者均在 60 %以上。 ( 3)无… 相似文献
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HIV多抗原位点串联基因的表达及活性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的在原核表达载体系统中对HIV—1/2型外壳蛋白多个抗原位点串联基因进行表达、纯化并鉴定其活性。方法人工合成含HIVgp41的2个抗原位点、gp120的3个群的各3个抗原位点及gp36的2个抗原位点的串联基因,克隆到原核表达载体pRSETB中,构建重组表达质粒pRSETB-env,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,利用固化金属离子配体亲和层析技术纯化表达蛋白.利用逐渐降低尿素浓度透析法使目的蛋白复性。用免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定。结果目的基因在BL21中有较高表达率,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见一条约32KD的蛋白带.与设计分子量相符。免疫印迹、ELISA试验显示该表达蛋白可与HIV患者血清较好结合.而与其它患者血清无交叉反应。结论成功构建了由HIV外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env,并在原核细胞中高效表达,表达蛋白经一步纯化后纯度较高.并具有良好特异性和活性。 相似文献
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γ-球蛋白及胆碱酯酶与肝组织病理损害的关系 总被引:4,自引:2,他引:4
目的研究血清γ球蛋白(γG)及胆碱酯酶与肝组织病理损害的关系.方法采用醋酸纤维薄膜法测定135例经病理证实的慢性肝炎,肝炎肝硬变及重型肝炎的血清γG;同时采用酶速率法测定他们的血清胆碱酯酶(SChE)活力结果随着肝组织纤维化程度和(或)炎症程度的加重,血清γG逐渐升高,而SChE活力则逐渐下降,差异非常显著(P<0.01);γG与ChE活力的相关系数为-0.612.结论血清γG的水平能准确地反映肝脏的病理损害;SChE活力能很好地反映肝脏的合成功能,肝脏的储备功能,亦能准确地反映肝脏的病理损害. 相似文献
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1株新型肠道病毒的生物学特性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的从1例急性肝炎患儿粪便标本中分离到1株新型肠道病毒,鉴定其生物学特性。方法采用细胞培养、动物试验、中和试验、电子显微镜观察和分子生物学等技术进行鉴定。结果该病毒对乙醚不敏感,在pH3.0及37℃ 60min条件下稳定,56℃30min可以被灭活;能在A549和RD细胞中稳定传代,并致细胞病变;不能被已有肠道病毒免疫血清中和;小白鼠乳鼠对该病毒不敏感;电子显徽镜下可见27-30nm的肠道病毒样颗粒;部分核苷酸序列分析表明,病毒VPI区核苷酸序列与肠道病毒89型的同源性为87%。与其他病毒无有意义的同源性。结论该病毒的生物学特性与肠道病毒相似,但其抗原性和核苷酸序列等与已知肠道病毒有较大差异,可能属于肠道病毒89型的1个新亚型。 相似文献
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用RACE技术对一株肠道病毒3''端进行扩增和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 应用3′RACE技术对一株本室分离肠道病毒基因组3′末端进行扩增,并对其核苷酸序列进行比较分析。方法 提取病毒总RNA,以锚定oligdT(17)引物进行逆转录,用特异引物及锚定引物进行3′RACE扩增,将PCR产物进行克隆、测序和序列分析。结果 获得了该病毒的3′端核苷酸序列,同源性分析结果显示该肠道病毒的核苷酸序列与肠道病毒76、89、90、91型的同源性最高为90%左右,而与其他型别的肠道病毒的同源性均小于80%;推导的氨基酸同源性与肠道病毒76、89、90、91型均在90%以上。结论 用RACE技术对肠道病毒3′端进行扩增及序列分析,证明该病毒属新型肠道病毒类,为进一步研究该病毒的分子生物学特性奠定了基础。 相似文献
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目的 了解甲型H1N1流感患者发病后体内流感病毒特异性血凝抑制抗体滴度变化.方法 采集28例甲型H1N1流感患者发病后不同时间的血清,采用血凝抑制试验测定其抗体滴度并分析.结果 患者距发病1、5、15、22、37、49天和58天的血凝抑制抗体滴度分别为5.36、9.39、39.02、57.99、137.92、55.19和57.99,患者的最高抗体滴度几何均数为148.55,其中96.4%( 27/28)的患者在病程中产生保护性抗体和发生抗体血清转换.结论 甲型H1N1流感患者能有效产生保护性水平的抗体,有较好的免疫反应. 相似文献