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目的:克隆EBV-LMP1 cDNA,构建EBV-LMP1基因的原核表达重组质粒。方法:通过RT-PCR技术从B95-8细胞中扩增EBV-LMP1 cDNA,克隆至pGEM-T easy载体上并测序;利用引物上的BamH I与HindⅢ酶切位点将LMP1基因插入载体pET-32a,转化JM109菌。提取质粒,限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果:扩增的LMP1 cDNA长度为1158bp,测序结果与已知序列吻合,重组原核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子。结论:成功克隆了EBV-LMP1 cDNA,并构建了pET-32a-LMP1原核表达载体,为研究LMP1在EBV致瘤中的作用及肿瘤疫苗奠定了基础。 相似文献
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临床标体中钩端螺旋体及其L型的检测与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 为探讨钩体 L 型在钩体病患者体内是否存在及是否具有致病作用。方法 对患者血、 C S F 进行 M A T;对患者血、 C S F 及尿液进行钩体及其 L 型培养; 对培养出的钩体 L 型进行免疫酶染色、免疫荧光染色、 S D S- P A G E、 D I B A及电镜等方法鉴定。结果 M A T 阳性率为1917 % (60313) ; 钩体普通培养阳性率1188 % (41345) ; 钩体 L 型阳性率2493 % (86345) 。培养出的 L 型经上述方法鉴定为钩体 L 型。结论 钩体 L 型培养应与 M A T 及钩体普通培养同时进行,以防漏诊。 相似文献
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目的:探讨以癫痫首发钩端螺旋体(钩体)脑动脉炎发病机理和防治。方法:对102例患者临床表现、实验检查,并复习文献。结果:102例中,钩体L型脑动脉炎43例,有肢体瘫痪80例,共济失调7例;血清钩体MAT阳性72例,CSF钩体MAT阳性17例;体液培养:原形钩体31例,L型钩体45例;EEG异常94例;颅CT:示颅内单发或多发低密度灶44例;颅MRA:3例中有2例颅底异常血管网征,1例颅内动脉粗细不均,1侧大脑中动脉不显影。结论:钩体脑动脉炎的发生可能为钩体或钩体L型直接损伤神经组织或供血血管,甲硝哒唑疗效显著,并可减少钩体病后发症 相似文献
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能引起IgE 介导的速发型(Ⅰ型)过敏反应的鸡蛋清蛋白有卵清蛋白、卵转铁蛋白、溶菌酶和类卵粘蛋白。卵粘蛋白是Eichholz 于1898年首次提出的一种糖蛋白复合物。虽然Miller 和Campbell 报道卵粘蛋白能引起很多人皮肤试验阳性,但尚未发 相似文献
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Epstein-Barr病毒LMP1蛋白羧基端的克隆与原核表达 总被引:2,自引:1,他引:1
目的 构建PGEX 6P 3 CCT原核表达载体 ,获得大量纯化的LMP1羧基端蛋白。方法 通过RT PCR技术从B95 8细胞中扩增EBVLMP1CCTcDNA ,克隆至PGEM Teasy载体上并测序。利用引物上的BamHI与EcoRI酶切位点将CCT基因插入PGEX 6P 3,转化大肠杆菌BL2 1 ,限制性内切酶消化鉴定。IPTG诱导重组菌株表达 ,用SDS PAGE与Westernblot对表达产物进行鉴定 ,并用Sepharose 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化 ,PreScissionProteas酶对融合蛋白进行解离。结果 扩增的LMP1CCT长度为 5 97bp ,测序结果与已知序列吻合。重组子经酶切鉴定 ,获得PGEX 6P 3 CCT原核表达菌株 ,Westernblot表明重组蛋白能被LMP1单克隆抗体特异结合。获得约5 1kDa的PGEX 6P 3 CCT融合蛋白 ,分离纯化出约 2 1kDa的LMP1CCT蛋白。结论 成功获得EBVLM1CCT蛋白 ,为研究LMP1致瘤机制 ,研制生物抗癌药物奠定基础 相似文献
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目的 探讨慢性乙型肝炎及其后期肝病患者免疫状态,了解其变化及临床意义。 方法 纳入临床确诊的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者37例、乙型肝炎后肝硬化(liver cirrhosis,LC)患者35例、乙肝肝癌(hepatocellular cancer,HCC)患者32例及健康对照(healthy controls,HC)38例。流式细胞术检测其外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+ /CD8+和Th1、Th2)的构成比,用ELISA法分析各组血清中Th1类(IFN-γ)、Th2类(IL-4)、Th17(IL-17)细胞因子的表达量。 结果 CHB、 LC、HCC与正常对照相比外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+百分数比例均降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);CHB、 LC、HCC患者TH1(CD4+IFN-γ+)细胞频率明显低于健康对照(P<0.05),CHB、 LC、HCC三组患者TH2(CD4+IL4+)均高于健康对照(P<0.05); 对应CHB、LC、HCC患者血清IL-4、IL17明显高于健康对照组(P<0.05),而CHB、LC、HCC患者血清中IFN-γ低于健康对照组(P<0.05)。慢性乙型肝炎患者病程与淋巴细胞亚群、细胞因子均有明显相关性(均P<0.05)。 结论 慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化及肝癌患者外周血存在T细胞亚群标志改变,提示患者免疫功能紊乱,监测免疫功能并纠正免疫紊乱对指导临床有重要意义。 相似文献