微流芯片检测流感病毒多重逆转录聚合酶链反应产物的实验研究

[目的 ]　建立应用微流芯片检测甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒多重逆转录聚合酶链反应 (mRT -PCR)产物的方法 ,在mRT -PCR扩增核酸的基础上自动化灵敏的定量检测扩增产物 ,快速检测甲亚型、乙型流感病毒 ,帮助临床快速诊断和鉴别诊断其他呼吸道病毒感染 ,以及明确流感病毒在人群中感染、流行情况。　 [方法 ]　采用经MDCK细胞分离培养的甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒毒株病毒液 ,使用 3组特异引物经mRT -PCR扩增核酸 ,扩增产物分别采用毛细管电泳技术经Caliper10 0 0微流芯片分析仪自动化检测和经 2 %琼脂糖凝胶电泳法检测。　[结果 ]　设计三组引物对相应甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒靶基因的mRT -PCR扩增产物片段分别为 43 0bp、2 10bp、3 91bp ,本实验mRT -PCR扩增产物经 2 %琼脂糖凝胶电泳 ,与Marker比照 ,DNA条带基本在此位点附近 ;产物采用毛细管电泳法经Caliper10 0 0微流芯片分析仪后 ,分别于 413bp、2 0 3bp、3 79bp处出现陡峭的峰 ,如图所示。　[结论 ]　应用微流芯片采用毛细管电泳法可对流感病毒mRT -PCR产物进行定位及相对定量 ,有助于快速诊断流感病毒感染 ,有助于对流感的监测。     

儿童细菌性下呼吸道感染两种采样方法的结果分析

儿童急性下呼吸道感染(acute lower respiratory tract infections)是婴幼儿时期的常见病,严重威胁婴幼儿的健康[1].肺炎链球菌和流感嗜血杆菌是婴幼儿下呼吸道感染的主要条件病原菌[2],同时其也是引起儿童死亡的重要病原菌.     

人体肝癌细胞系YY-8103若干生物学特征的初步观察

本文报道自肝细胞癌病人的手术切除标本建立的一个人体肝癌细胞系,YY-8103。经形态,超微结构观察,染色体分析,乳酸脱氢酶(LDH)同工酶谱测定,刀豆球蛋白A(Con.A)凝集试验和甲胎蛋白(AFP)检测,确定该细胞系为人体肝癌细胞,至今已传了130多代。该细胞容易接种于裸鼠,而且其瘤结节能在体外再培养。体外培养时该细胞不具有合成乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的功能,但对麻疹病毒及单纯疱疹病毒敏感。因而认为在肝癌基础研究和病毒试验中可得到应用。     

疫苗引入前苏州地区儿童肺炎链球菌的分子流行病学特征研究

目的 了解苏州地区在7价肺炎链球菌结合疫苗(7 heptavalent pneumococcal conjugate vaccine,PCV7)引入前,不同临床治疗压力下肺炎链球菌分离株的耐药特征、血清分型及国际流行耐药克隆株(pneumococcal molecular epidemiology network,PMEN)的流行情况.方法 收集2006年3月～2007年3月期间苏州大学附属儿童医院住院治疗的呼吸道感染儿童(病例组)和非呼吸道感染儿童(对照组)中分离的肺炎链球菌134株,进行抗生素敏感性分析和血清型分型,并对其中86株大环内酯类药物菌株进行基因分型.结果 病例组抗生素的使用率高于对照组(x2=111.19,P＜0.001).病例组分离的菌株血清型以19F、19A和14为主,对照组菌株常见的血清型为6B、19F和23F,两组PCV7血清型覆盖率分别为58.3％和68.1％.对照组菌株对常用抗生素的敏感性均高于病例组(均有P ＜0.05).菌株基因分型共检测出10种PMEN克隆株,最常见的为Taiwan19F-14克隆株.PMEN克隆株对常用抗菌药物的不敏感率高于非PMEN克隆株.结论 在我国引入PCV7前,在抗生素等治疗压力下,苏州地区肺炎链球菌的耐药情况严重,以Taiwan19F-14克隆株流行为主,多种PMEN克隆株并存.     

腺病毒3型急性呼吸道感染暴发流行的病原学调查

目的以血清学方法证实2004年江苏省苏北地区中小学生腺病毒3型急性呼吸道感染的暴发流行.方法应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测患者急性期IgM抗体、恢复期IgG抗体;应用中和试验方法检测患者急性期、恢复期血清和未患病学生对照血清的中和抗体,并应用SPSS11.0软件对试验数据进行统计分析.结果患者急性期IgM抗体阳性率为3.7%,恢复期IgG抗体阳性率为44.4%,恢复期中和抗体阳性率为59.5%;未患病学生分别为0%、8.3%和33.3%,卡方检验P值分别为0.510、0.018、0.226;9例患者配对双份血清中有6例患者恢复期血清中和抗体保护作用均较急性期血清明显增长;ELISA方法检测IgG与中和试验检测中和抗体的一致率为61.4%,Kappa检验P=0.070.结论血清学方法进一步证实苏北地区急性呼吸道感染暴发流行的病原体为腺病毒3型.     

多重抗药性大肠杆菌R因子对霍乱弧菌接合转移的研究

通过多重抗药性大肠杆菌(供体茵)与EITor型霍乱弧菌(受体茵)的接合(conjugation),可使大肠杆菌的抗药因子(R因子)及其抗药水平传递给霍乱弧菌,并使霍乱弧菌获得对13种抗菌药物的多重抗药性。大肠杆菌与霍乱弧菌的接合转移频率平均为1.41×10~(-6)。获得了多重抗药性的霍乱弧菌又能将其R因子整批地转递给营养缺陷型大肠杆菌K_(12)。经无药肉汤液37℃传40代,霍乱弧菌获得的R因子仍稳定的存在。接合转移子菌株的生化特性,形态染色和抗原性等与其受体菌相一致。     

苏州地区临床分离儿童肺炎链球菌耐药情况分析

目的检测苏州地区2006年临床分离的儿童肺炎链球菌对常用抗生素的耐药情况。方法从新入院患儿鼻咽部采集标本,经实验室分离,并采用奥普托欣和（或）去氧胆酸钠鉴定为肺炎链球菌后,采用纸片扩散法（Kirby—Bauer法）和E-test法对分离到的89株肺炎链球菌进行抗生素的敏感性试验。结果89株肺炎链球菌中,青霉素不敏感菌株47株,为52．8％,红霉素、四环素、克林霉素、复方新诺明和氯霉素的耐药率分别为88．8％,78．7％,86．5％,55．1％和10．1％,多重耐药率为89．9％。对万古霉素,氧氟沙星100％敏感。结论苏州地区儿童肺炎链球菌的耐药情况严峻,本研究结果对肺炎链球菌感染的治疗和抗菌药物的选择具有参考价值。     

上海地区2005年麻疹流行株基因特性分析

目的了解2005年上海部分地区麻疹暴发流行株的基因型别和特性,加强麻疹病毒学监测。方法采集暴发麻疹患者咽拭子标本分离病毒,通过RT-PCR扩增麻疹病毒N基因C末端450 bp核苷酸并进行序列测定,与GenBank中麻疹病毒各基因型参考株及国内其他地区的麻疹分离株进行基因比较。结果从10例麻疹患者的咽拭子标本中共分离麻疹病毒4株,均属H基因组H1基因型,型内变异0.7%-1.3%。与H1型代表株China93-7的基因同源性为98%-98.2%;与H2基因型代表株China94-1的基因差异为6.4%-6.9%。与A型代表株Edmonston的基因差异为6.7%- 6.9%;与中国麻疹疫苗株Shanghai191的基因差异为7.6%-8.0%,与国内其他地区麻疹流行株基因差异为0.2%-3.7%。结论2005年上海部分地区麻疹暴发是由H1基因型病毒引起,为中国本土流行株。     

呼吸道感染儿童鼻咽部细菌携带及危险因素分析

目的 了解呼吸道感染儿童的鼻咽部细菌携带情况及主要危险因素.方法 2006年3月-2007年3月期间对因呼吸道感染住院治疗的453例<3岁儿童进行问卷调查,采集鼻咽拭子标本进行病原菌检测,并分析比较.结果 453例呼吸道感染儿童鼻咽拭子细菌检出率为62.7%,其中酿脓链球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血菌和黏膜炎莫拉菌的检出率分别为24.1%、13.9%、11.0%、11.5%和6.2%;细菌检出率与患儿的临床诊断、年龄和发病季节有一定的关联.结论 苏州地区<3岁呼吸道感染儿童鼻咽部条件致病菌携带率较高,年龄及发病季节等是儿童呼吸道感染的危险因素,研究结果对当地儿童呼吸道感染的病原学研究和预防控制等有一定的借鉴意义.