微流芯片检测流感病毒多重逆转录聚合酶链反应产物的实验研究

[目的 ]　建立应用微流芯片检测甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒多重逆转录聚合酶链反应 (mRT -PCR)产物的方法 ,在mRT -PCR扩增核酸的基础上自动化灵敏的定量检测扩增产物 ,快速检测甲亚型、乙型流感病毒 ,帮助临床快速诊断和鉴别诊断其他呼吸道病毒感染 ,以及明确流感病毒在人群中感染、流行情况。　 [方法 ]　采用经MDCK细胞分离培养的甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒毒株病毒液 ,使用 3组特异引物经mRT -PCR扩增核酸 ,扩增产物分别采用毛细管电泳技术经Caliper10 0 0微流芯片分析仪自动化检测和经 2 %琼脂糖凝胶电泳法检测。　[结果 ]　设计三组引物对相应甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒靶基因的mRT -PCR扩增产物片段分别为 43 0bp、2 10bp、3 91bp ,本实验mRT -PCR扩增产物经 2 %琼脂糖凝胶电泳 ,与Marker比照 ,DNA条带基本在此位点附近 ;产物采用毛细管电泳法经Caliper10 0 0微流芯片分析仪后 ,分别于 413bp、2 0 3bp、3 79bp处出现陡峭的峰 ,如图所示。　[结论 ]　应用微流芯片采用毛细管电泳法可对流感病毒mRT -PCR产物进行定位及相对定量 ,有助于快速诊断流感病毒感染 ,有助于对流感的监测。     

上海市闵行区1998-2007年麻疹流行病学特征分析与控制策略探讨

目的 分析上海市闵行区1998-2007年麻疹流行病学特征变化规律,探讨麻疹控制策略,为加速控制麻疹提供科学依据.方法 根据上海市常规传染病报告系统和人口学资料,对1998-2007年麻疹疫情资料进行描述流行病学分析.从疑似患者的咽拭子样本分离病毒,分析其基因特性及抗原性.结果 麻疹年平均发病率为17.69/10万,主要是20岁以上成人和小于8月龄幼儿;发病季节高峰在3-5月,户籍人口麻疹流行无明显周期性,非户籍人口2～3年一个流行高峰.健康人群不同年龄组抗体水平差异有统计学意义(x2=86.06,P<0.01),抗体水平在20～30岁最低.从10例疑似患者咽拭子样本中分离到4株麻疹病毒株,与麻疹疫苗株S191分属于不同的基因型,抗原性有一定的差异.结论 麻疹流行特征已发生根本性改变,流行周期不明显,发病年龄呈双向移位,不典型症状增多.非户籍人口的发病特征更接近于自然感染,对全市麻疹流行病学特征产生了重要的影响.麻疹病毒株与疫苗株存在差异,因此监测地方性流行株的基因和抗原变化很有必要.现阶段应在对儿童保持高水平麻疹疫苗接种率的前提下,对特定人群开展麻疹疫苗强化免疫,采取针对性免疫策略和加强麻疹监测工作是减少麻疹发病的主要策略.     

人乳腺癌雌激素受体依赖性的测定

正常乳腺的生长发育,受多肽类激素和甾体类激素的调节和控制。乳腺细胞癌变后,有的可以完全或部分丧失雌激素受体(E_2R),此时不再成为受激素控制的靶细胞,即所谓“自主型”或“非激素依赖性肿瘤”,但还有半数以上的乳腺癌可以保留数量不等的E_2R,仍受激素环境的     

泡脚水加点盐不易凉

下班回家用热水泡个脚，不但能缓解一天的疲劳，还能有效促进睡眠。如果再给热水加点“料”，效果会更好。泡脚时，不妨在水里撒点盐。加了盐的水能杀菌消毒，防冶脚气，使双脚皮肤变得光滑。     

混合细胞瓶对临床标本中流行性感冒病毒和肠道病毒的分离检测

目的 比较犬肾细胞系(MDCK)、人喉表皮癌细胞(Hep-2)和非洲绿猴肾细胞(Vero)制备的MHV混合细胞与相应单一敏感细胞株对流行性感冒(流感)病毒、肠道病毒的分离结果.方法 流感样患者咽拭子标本接种MHV混合细胞和MDCK细胞,手足口病患儿咽拭子或粪标本接种MHV混合细胞和Vero细胞,观察病毒致细胞病变效应(CPE),采用多重反转录-聚合酶链反应(mRT-PCR)检测甲、乙型流感病毒和肠道病毒.结果 MDCK和Vero细胞的CPE较MHV混合细胞明显.138份流感病毒接种MHV混合细胞,分离出34株流感病毒,分离率为24.6％;MDCK细胞分离出流感病毒39株,分离率为28.3％.MHV混合细胞与MDCK细胞流感病毒分离率比较,差异无统计学意义(x2=1.92,P＞0.05).32株肠道病毒接种MHV混合细胞,分离出肠道病毒9株,分离率为28.1％;Vero细胞分离出12株肠道病毒,分离率为37.5％.MHV混合细胞与Vero细胞肠道病毒分离率比较,差异无统计学意义(x2 =3.00,P＞0.05).结论 MHV混合细胞CPE不如单一细胞易于观察;MHV混合细胞适用于生物性突发公共卫生事件中,可分离培养临床标本中甲型、乙型流感病毒和表现为呼吸道症状的肠道病毒.     

手足口病病原在自来水中的存活能力

目的 了解手足口病病毒在生活用自来水中存活情况.方法 2008年上海市及浙江省手足口病监测病例分离到的手足口病病毒中,选择5株肠道病毒(EV)71型、1株柯萨奇(Cox)病毒,分别混合含氯量1.0 mg/L的自来水;采用Vero细胞培养,细胞病变效应(CPE)观察,每日监测水中病毒存活情况.运用散点图分析水中病毒存活量下降趋势.结果 该6株手足口病病毒在初始含氯量1.0 ppm模拟出厂自来水中可以存活1个月以上,并持续有感染细胞能力,病毒株间活病毒存活能力有差别.结论 EV71型及Cox病毒在水中具有较强存活能力,手足口病流行期间,城市、农村及城乡结合部需要注意手足口病病原经水传播的途径.

Abstract：

Objective To evaluate the survivability of hand foot mouth disease(HFMD)virus,in tap water for daily use.Methods HFMD viruses were isolated from cases of HFMD in Shanghai and Zhejiang from in 2008.Six isolated strains (five subtype of enterovirus 71 and one coxackie virus)were selected in this study.These viruses were mixed with chloride 1.0 mg/L tap-water and then inoculated into Vero cells.The cytopathic effect (CPE)was checked everyday in order to survey the survivability of each virus strain.The decline of virus survivability was analyzed by scatter diagram.Results These six strains of HMFD virus could survive longer than one month in tap water with initial chloride concentration of 1.0 mg/L and still had celluar infectivity.The survivabilities were varied between viruses isolated from different HFMD cases.Conclusions The survivabilities of enterovirus 71 and coxackie virus stains are quite strong in water.Therefore,the transmission route of water-borne pathogens should be monitored in regions using tap water during HFMD epidemic period.     

上海市闵行区禽类接触人群甲型流感病毒抗体调查

甲型流感是由甲型流感病毒引起的人和动物共患的一种呼吸道传染病,传染性强,传播途径易实现,病原体常变异导致难以有效控制.甲型流感病毒有多种亚型,已证实有15种血凝素（H1～H15）和9种神经氨酸酶（N1～N9）.目前人群中流行主要为H1和H3型,其中H3型居多;而在禽类特别是水禽中各个亚型的血凝素均已被发现[1～3].1997年香港的H5N1、2003年底至2004年初亚洲地区H5N1以及1998年至1999年我国内地和香港H9N2禽流感病毒人间感染事件的发生,都昭示了人感染禽流感病毒的高度可能性.     

河南省九株狂犬病毒的糖蛋白基因序列分析

目的 了解河南省狂犬病毒与人用、兽用狂犬病疫苗株在糖蛋白基因核苷酸和氨基酸序列水平上的差异,为有效控制狂犬病疫情提供初步的科学依据.方法 以反转录-半套式聚合酶链反应(RT-heminested-PCR)扩增2006年12月分离自河南省信阳市的9株狂犬病毒街毒株,经纯化、克隆、测序后获得9条糖蛋白基因全长序列,采用生物信息学软件构建基因系统发育树,对糖蛋白基因序列和氨基酸序列进行分析.结果 9株狂犬病毒糖蛋白在核苷酸及氨基酸序列水平上彼此的同源性分别为97.6%～98.9%和99.2%～99.8%;9株病毒与CTN疫苗的同源性最高,其核苷酸及氨基酸同源性分别为85.6%～93.0%和91.9%～92.9%;9株病毒与其他疫苗株相比,其核苷酸及氨基酸同源性分别为80.4%～83.3%和87.7%～92.5%;与已知的基因1型狂犬病毒比较,9株病毒糖蛋白氨基酸序列发生了若干位点的氨基酸取代.结论 9株河南省狂犬病毒街毒株均属基因1型,CTN疫苗株可能为目前我国河南省所流行的狂犬病提供较好的保护效果.     

H1N1流感病毒的遗传进化研究

2009年3月底,墨西哥流感样疾病（ILI）病例异常增加,2009年4月17～28日期间,共报道1551例严重肺炎流感疑似病例（其中7例确诊死亡病例）,随后与之毗邻的美国也相继出现类似病例。2009年4月25日,世界卫生组织（WHO）宣布本次疫情为国际关注的突发公共卫生事件（PHEIC）,并于4月30日将流感大流行警戒级别从4级提高到5级,