噬菌体随机肽库分析HIV-1 p24抗原表位

目的：利用噬菌体随机肽库分析抗HIV－1核心区抗原p24单抗体在抗原上的识别位点。方法：用抗HIV－1 p24单抗2C7和3H10作为筛选分子，对噬菌体肽库进行生物洗（biopanning)，并通过DN测序、ELISA效价测定等对所获得的噬菌休克隆进行鉴定，最后对合成的7肽位点通过间接ELISA及免疫抑制试验进行血清学分析。结果：序列分析结果表明，单抗2C7和3H10在HIV－1 p24上的抗原识别表位的保守序列分别为DHPXPXX和XXXXKAF。分别合成这2个7肽氨基酸序列P－C1（DHPSPWG）和P－H3（SPWLKAFGGS），并分析其免疫学结合特性，结果表明与P－H3相比，单抗2C7的抗原识别表位P－C1的固相结合特性较好，固相P－C1检测血样，13份抗HIV阳性本中，12份为阳性（检出率为92．3％），19份抗HIV阴性样本中，仅1份为假阳性结果（特异性为94．7％），与P－C1相比，单抗3H10的抗原表位P－H3的固相结合能力极差，但液相结合活性较好，血样与P－H3的抑制试验表明，13份抗HIV阳性样本中12份样本对P－H3的抑制率大于60％（12／13），而9份抗HIV阴性样本中仅1份对P－H3的抑制率大于50％，结论：用抗HIV－1 p24单抗筛选噬菌体随机肽库，获得单抗在p24抗原上的识别表位的氨基酸序列，血清学结果表明这2个抗原表位存在于p24自然抗原上，在抗HIV－1的感染检测中具有潜在的应用价值。     

HIV抗体诊断试剂特异性样品库的建立

目的 建立评价HIV抗体诊断试剂特异性的样品库。方法 从不同地区收集献血者样品990份,采用HIV抗体检测试剂和HIV抗原抗体联合检测试剂进行筛选,对结果不一致样品采用HIV抗体确认试剂和HIV核酸检测试剂进行检测。结果 筛选出985份样品组成样品库,各试剂检测样品库的特异性为97．77％～99．90％,其“δ”为-1．774～-4.690,且两者具有较好的相关性。结论 该样品库样品能够反映试剂特异性的差异,可用于对试剂特异性的分析。     

湖北地区人畜共患病戊肝病毒在不同人群中的流行病学研究

目的调查湖北地区不同人群中戊型肝炎病毒（HEV）感染情况和流行特征，为控制HEV在人畜间的传播提供依据。方法采集养猪场从业人员472人，屠宰场从业人员313人，农民168人，农民工300人，义务献血员500人和学生98人的血清样品共计1851份。用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测抗-HEV IgG抗体，用统一制定的流行病学调查表进行分析。结果养猪场从业人员和农民中抗-HEV抗体阳性率分别为55．72％和53．57％，明显高于屠宰场从业人员、农民工、学生和义务献血人员中的阳性率，分别为31．63％，30．67％，27．55％和33．40％，且差异有统计学意义，（Х^2=44．19，P〈0．01）。养猪场和屠宰场从业人员从业年限在10年以下和10年以上的抗-HEV抗体阳性率差异均有统计学意义（P〈0．05）。养猪场和屠宰场从业人员、农民及农民工的抗-HEV抗体阳性率均与年龄有关，其中养猪场从业人员、农民和农民工的抗-HEV抗体阳性率均随年龄的增长呈上升趋势。结论与猪特别是与幼猪接触越密切以及强度越大的人群，其抗-HEV抗体阳性率也越高，提示猪是HEV的主要传染源之一。     

4种国产和3种进口第4代HIV抗原抗体检测试剂的质量评价

目的 对4种国产和3种进口第4代HIV诊断试剂的质量进行评价.方法 利用HIV抗体阴性样品库和核酸阳性样品库、BBI阳转血清盘样品等,对4种国产和3种进口第4代试剂的敏感性和特异性、检测HIV-1早期感染的能力进行分析.结果 7种第4代试剂的敏感性均为100％ (95％ CI:99.86％～100％),且1份HIV-1感染窗口期样品均检测为阳性,其中1种进口试剂“8+”值较大(1.0892),其余6种试剂的“δ+”值均比较小(0.0836 ～0.3003).对阴性样品,7种试剂均存在不同程度的假阳性(特异性为97.80％ ～ 99.60％,“δ-”值为-1.3803 -0.4778).对BBI阳转血清盘样品,国产试剂的阳转血清相对敏感性系数为-0.500～0,2种进口试剂则为-0.600和-0.700.结论 7种试剂均具有较高的敏感性和特异性,第4代HIV试剂用于血液筛查可发现HIV感染窗口期样本,对减少HIV传播的风险有一定的意义.但进口第4代试剂检测HIV-1早期感染的能力强于国产第4代试剂.     

对HIV p24抗原酶联免疫诊断试剂的初步评价

目的 对人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）p24抗原酶联免疫诊断试剂进行初步评价。方法 用实时荧光PCR、ELISA、Western Blotting等方法检测来源于中国不同地区的124份血浆样品的HIVRNA、HIV p24、抗-HIV抗体,并对部分样品进行HIV基因分型。结果 9例HIV抗体阴性样品中有1例HIV p24抗原阳性,证明为窗口期感染;9例HIV抗体不确定者中有2例为HIV p24抗原阳性;103例HIV抗体确证为阳性者中有8例为p24抗原阳性;3例HIV抗体酶联免疫检测为阳性但确证试剂检测为阴性的样品中,均无p24抗原阳性者。结论 HIV p24抗原检测可以检出HIV感染的窗口期,且可以辅助HIV抗体检测试剂对HIV感染的诊断。     

第4代HIV抗原抗体联合检测试剂的评价

目的评价HIV(1+2)抗原抗体联合检测试剂,了解其是否适合于血液筛查。方法用HIV抗原抗体联合检测试剂和第3代HIV抗体检测试剂平行检测HIV感染或疑似感染样本205份、吸毒人群样本1486份、有既往献血史人群样本427份、献血和献浆人群样本7237份和丙型肝炎患者样本176份,对两种试剂检测结果不一致样本进行HIV p24抗原或RNA的检测,并分析其特异性和灵敏度。结果联合检测试剂检测HIV p24抗原的分析灵敏度为(2.5~5.0)U/ml,检测HIV抗体的分析灵敏度与第3代HIV抗体检测试剂相当。共检测出8996份HIV抗体阴性样本和503份HIV抗体阳性样本,与第3代试剂相比其特异为99.67%,灵敏度为100%,而且2份HIV感染“窗口期”样本也能检出。结论该试剂在增加HIV p24抗原检测的情况下,对HIV抗体检测的特异性和敏感性没有降低,可用于血液筛查以减少“窗口期”样本传播HIV的风险。     

河南地区不同月龄猪戊型肝炎病毒感染情况调查

目的 调查河南地区不同月龄猪戊型肝炎病毒(HEV)感染情况.方法 从河南五个地区共采集623份猪血清,其中3月龄以下血清113份,3月龄以上血清510份,酶联免疫诊断试剂盒分别检测HEV抗原和抗体.对抗原阳性者用套式RT-PCR检测HEV核酸,并对核酸阳性者进行克隆和序列分析.结果 3月以下组和3月以上组的抗体阳性率分别为90.27%和92.55%,差异无统计学;而两组的抗原阳性率分别为15.93%和5.69%,差异有统计学意义(P＜0.001).各地区间的抗原和抗体阳性率存在明显的统计学差异.在47份抗原阳性样本中,检出5例为HEV核酸阳性,序列分析显示4例为HEV4型,1例为HEV 1型.结论 河南地区猪的HEV感染率较高,而且不同地区存在明显差异.     

人类免疫缺陷病毒1型RNA定量参考品的研制

目的　研制人类免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)RNA核酸国家参考品及制定相应标准。方法　收集各地HIV感染者阳性血浆和HIV非感染者血浆 ,应用HIV、HCV抗体和HBsAg检测试剂进行筛选 ,对HIV抗体筛查阳性者用新加坡Genelabs公司的HIVBLOT 2 2确证试剂进行确证。以世界卫生组织 (WHO)推荐的HIVRNA标准品对国家HIV核酸参考品中定量样品进行标定 ,并对其稳定性进行研究。结果　经过筛选 ,选出 8份样品为阴性参考品 ,8份样品为阳性参考品 ,3份为定量参考品 ,6份为灵敏度参考品 ,5份为线性参考品。几次独立标定 ,得到定量参考品HIVRNA的国际单位(IU) ,其中b1～b3的国际单位的对数值在 x±s以内 ,表明结果可靠。稳定性实验数据表明 ,该核酸参考品在 4℃以下可存放 4d。结论　初步建立了HIV核酸参考品 ,这将对HIV核酸诊断试剂的质量评价提供重要依据     

SARS病毒抗体第一代参考品的研制及初步应用

目的 建立严重急性呼吸综合征(SARS)病毒抗体参考品，用于对SARS病毒抗体诊断试剂的实验室评价。方法 收集临床确诊为SARS病人血清和非SARS人群血清，用不同的SARS病毒抗体诊断试剂进行检测筛查，选择不同样品组成参考品。并用该参考品对不同试剂进行初步评价。结果 SARS病毒ISM抗体的参考品由38份组成，其中包括11份阳性参考品、20份阴性参考品、灵敏度样品6份，精密性样品1份；SARS病毒总抗体(包括IgG)由46份组成，其中包括18份阳性参考品、20份阴性参考品、灵敏度样品7份，精密性样品1份。结论 初步应用结果显示该参考品确实能够反应不同试剂的质量差异。