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目的:观察不同浓度的尼尔雌醇(NYL)和左炔诺孕酮(LNG)对人成骨肉瘤MG-63细胞株ERα和ERβ表达的作用,探讨旁分泌效应对ERα和ERβ基因表达的影响。方法:人成骨肉瘤MG-63细胞株分为(1)空白对照组:用含1% BSA无血清MEM培养液培养48 h;(2)阳性对照组:培养液中加入10-8 mol/L的17β-estradiol (E2) 培养48 h;(3)药物处理组:培养液中分别加入10-10,10-8,10-6 mol/L的NYL或LNG培养48 h;(4)药物处理+换液组:培养液中分别加入10-10 mol/L的NYL或10-8 mol/L LNG培养48 h,每12 h更换新的含有相应药物的培养液。用半定量RT-PCR检测各组细胞ERα和ERβmRNA的表达。结果:NYL及LNG均能诱导ERα和ERβ亚型mRNA表达上调,诱导ERαmRNA表达的最强作用浓度均为10-6 mol/L。NYL,LNG对ERβ mRNA表达最强作用浓度分别为10-10,10-8 mol/L。每12 h更换干预培养液对ERα表达无影响,但可抑制ERβ的表达。结论:NYL和LNG均可诱导MG-63细胞株ERα和ERβ mRNA表达上调,且2种亚型的表达存在相互制约关系;在NYL和LNG诱导ER亚型表达上调过程中ERβ的表达可能受到旁分泌作用的影响。 相似文献
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单核苷酸多态性的研究进展 总被引:6,自引:0,他引:6
单核苷酸多态性 (SNPs)是指存在于某一人群或个体基因组内的单个碱基发生突变 ,正是由于这些突变 ,导致了群体与群体及个体与个体之间的差异。许多疾病的易感性、个体的药物敏感性等均与SNPs有关。建立快速高效的SNPs检测方法和强大的数据库 ,能为人类基因组功能研究和SNPs的应用研究提供坚实的基础。 相似文献
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目的观察胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2(IRS-2)基因mRNA表达的影响。方法用胰岛素干预人成骨肉瘤MG-63细胞,半定量RT-PCR检测细胞IRS-2基因mRNA的表达量。结果10^-10mol/L~10^-6mol/L胰岛素上调细胞IRS-2基因mRNA的表达(P<0.05),且具有剂量依赖性。胰岛素的调节还存在时效依赖性,10^-8mol/L胰岛素干预12h可下调细胞IRS-2基因mRNA的表达(P<0.05),干预24h~48h上调细胞IRS-2基因mRNA的表达(P<0.05)。结论胰岛素可影响人成骨肉瘤MG-63细胞IRS-2基因mRNA的表达,胰岛素可能对1型糖尿病患者骨质疏松的发生和发展起着重要的作用。 相似文献
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观察人成骨肉瘤MG 6 3细胞分化特性及分化过程中的基因表达。在细胞培养的不同时间 ,用α 磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶 (ALP)活性 ;放射免疫法测定骨钙素 (BGP)含量 ;半定量逆转录聚合酶链反应测I型胶原、基质金属蛋白酶 (MMP) 1和基质金属蛋白酶抑制因子 (TIMP) 1基因mRNA表达 ;VanGieSon氏苦味酸酸性复红染色法染色细胞I型胶原。结果表明MG 6 3细胞接种培养第 7d后I型胶原基因表达较高。MMP 1表达量随时间推移逐渐增加 ,至第 2 4d达到高峰。第 1~ 9dTIMP 1表达量逐渐增加 ,其后基本恒定。ALP活性第 0~ 12d逐渐增高 ,至第 12d达最高 ,其后逐渐下降。第 18d后 ,细胞有许多大小不等的结节形成 ,I型胶原结节染色较无结节处深。MG 6 3细胞具有成骨细胞表型特征。MG 6 3细胞生长分为细胞增殖、骨基质成熟、骨基质矿化阶段 ,且I型胶原 ,MMP 1,TIMP 1基因表达及ALP活性呈时间特异性。 相似文献
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目的 研究雌三醇(Estri01)对成骨肉瘤样细胞株MG-63的作用,并与雌二醇(17-β—estradiol)对MC-63细胞的作用进行比较,从而探讨雌三醇防治骨质疏松的作用机制。方法 用雌三醇或雌二醇处理成骨样细胞株MC-63,^3H掺入法(3H—TdR)测定细胞的增殖,通过测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性的变化和细胞分泌的骨钙素(osteocalcin)水平的变化来分析细胞功能。结果 以浓度为0mol/L的雌三醇为对照,10^-10、10、10^~8、10^-7、10^-6mol/L雌三醇分别增加MG-63细胞增殖达0.00%、18.10%、31.62%、23.81%、14.86%;以浓度为0mol/L的雌二醇为对照,10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-8mol/L雌二醇分别增加MG-63细胞增殖达16.95%、30.86%、62.48%、28.19%、24.76%。雌二醇促进MC-63细胞增殖的作用比雌三醇的作用强。不同浓度(10^-10~10^-6mol/L)的雌三醇或雌二醇对MG-63细胞内ALP活性及骨钙素分泌量均无显著影响。Western杂交法检测到雌激素受体α和β在MG-63细胞中均有表达,雌激素受体的拮抗剂ICI 182780可以消除雌二醇和雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用。结论雌三醇可以促进MG-63细胞的增殖,但对分化无影响;雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用由雌激素受体介导。 相似文献
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骨形态生成蛋白-4与17β-雌二醇诱导MBA-1细胞分化的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨BMP-4与17β-雌二醇诱导MBA-1细胞分化的作用.方法 用骨形态生成蛋白-4(BMP-4)诱导MBA-1细胞15~22 d后进行HE染色观察细胞形态,用1型胶原染色、矿化结节染色鉴定成骨细胞功能;用BMP-4及17β-雌二醇干预MBA-1细胞后,用RT-PCR检测骨钙素的变化.结果 ①MBA-1细胞可向成骨细胞或脂肪细胞分化;②在无BMP-4或17β-雌二醇干预的情况下,MBA-1细胞在自身分化成熟过程中伴有骨钙素的表达增加;③经BMP-4与17β-雌二醇干预后,MBA-1细胞骨钙素的表达明显增加.结论 MBA-1细胞可能具有多系分化潜能,BMP-4与17β-雌二醇可上调其骨钙素表述,诱导MBA-1细胞向成骨细胞方向分化. 相似文献
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胰岛素(insulin)/胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)信号通路在细胞的分化、生长、生存及代谢起非常重要作用。胰岛素信号传递首先需要胰岛素/IGF-1与胰岛素受体(insulin receptor,IR)结合,磷酸化胰岛素受体底物(insulin receptor substrates,IRSs)后形成一个紧密连接的三聚物。磷酸化的IRSs作为停靠蛋白(docking protein)再激活一系列包含Src同源结构域2(SH2)的蛋白,引起相应的生物学效应。目前发现IRSs从IRS-1到IRS-6共6种,它们的分布存在明显的组织特异性,IRS-1、2在人体多种组织中分布广泛;IRS-3则在脂肪组织中居多;而IRS-4、5、6在人体组织表达相对较低。本文拟对IRSs在组织中分布特异性与功能作一综述。 相似文献
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人成骨肉瘤MG-63细胞株和正常成人成骨细胞MMP及TIMP的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
骨重建 (boneremodeling)由按一定时序交替进行的骨吸收和骨形成组成 ,是骨吸收与骨形成不断交替进行的过程。骨吸收包括骨基质的降解 ,其中由成骨细胞和破骨细胞产生的基质金属蛋白酶 (matrixmetalloproteinase ,MMP)起着重要的作用[1] 。基质金属蛋白酶抑制因子 (tissueinhibitorofmatrixmetalloproteinase,TIMP)能够特异性地抑制MMP的功能 ,MMP和TIMP之间的平衡状况调控着骨基质降解的速度和数量[1] 。骨组织表面覆盖一层由成骨细胞和未矿化的I型胶原等骨基质构成的屏障 ,阻止破骨细胞活化和与矿化骨基质接触 , 相似文献
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目的:观察重组基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase-14,MMP-14)分解区蛋白(recombinant matrix metalloproteinase-14 catalytic domain, RMC)对人成骨样细胞SaOS-2凋亡的影响,探讨MMP-14分解区蛋白在骨代谢中的作用。 方法:MMP-14分解区蛋白在细胞培养液中的表达用Western blotting检测。RMC对SaOS-2细胞MMP-2酶原激活的影响用明胶酶谱检测,并检测其对SaOS-2细胞黏附功能的影响。细胞凋亡用吖啶橙/溴乙啶染色与ELISA检测。 结果:观察到MMP-14分解区蛋白在SaOS-2细胞培养液中56 kD的MMP-14表达。RMC促进细胞凋亡的作用呈剂量依赖性,且此作用可被EDTA阻断。RMC激活MMP-2酶原,抑制SaOS-2细胞在Ⅰ型胶原上的黏附。 结论:重组MMP-14分解区蛋白可通过降解骨基质蛋白,诱导人成骨样细胞SaOS-2凋亡。 相似文献
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