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99mTc标记c-erbB2反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌显像的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用放射性核素标记癌基因反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对肿瘤进行显像,可以探测只有癌基因激活、扩增和过度表达还没有形成实体的肿瘤组织,以实现对肿瘤的早期诊断。乳腺癌是妇女发病率和死亡率最高的主要恶性肿瘤,如果能在肿瘤早期鉴别其癌基因的表达类型及临床分期,施行“量体裁衣”式的治疗,可提高乳腺癌治疗的效果。c-erbB2是乳腺癌原癌基因,与乳腺癌的恶性转化和不良预后密切相关。 相似文献
2.
环氧化酶抑制剂对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究环氧化酶抑制剂阿司匹林和选择性环氧化酶2抑制剂尼美舒利对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长抑制作用,并初步探讨其作用机理.方法:用阿司匹林和尼美舒利分别作用人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法观察其生长抑制作用;免疫组化法检测阿司匹林和尼美舒利作用后MDA-MB-231细胞中COX-2和c-erbB-2的表达情况.结果:阿司匹林和尼美舒利能够抑制MDA-MB-231细胞的生长,并呈时间-剂量依赖型.COX-2在MDA-MB-231细胞中表达呈阳性,免疫组化发现细胞内c-erbB-2表达下降.结论:环氧化酶抑制剂能够有效的抑制肿瘤细胞的生长,其机制可能与下调c-erbB-2基因的表达有关. 相似文献
3.
背景:瘦素是脂肪组织产生的一种激素,具有广泛的生理作用,也是近年能量代谢研究的热点之一,所用瘦素主要是大肠杆菌的表达产物,后者以不溶解的包含体形式存在,需要通过烦琐的复性过程才能获得具有生物学活性的人瘦素。目的:为获得天然溶解形式的人瘦素.探索其非亲和层析纯化条件,为进一步可能的产业化提供依据。设计:实验观察。单位:一所医学院的生化教研室分子生物学实验室。材料:选择强阴离子交换剂(Sepharose Q)和疏水介质(Phenyl Sepharose 6)在不同条件下进行层析的方法,以尽可能除去样品中的杂质。方法:将培养获得的上清液在pH7.5的条件下首先经过Q柱柱层析纯化,收集目的蛋白;随后在高盐[mol/L(NH4)2SO4]状态下通过疏水层析进一步纯化。主要观察指标:经凝胶扫描分析,纯化前的培养上清液人瘦素纯度为42.3%,Q柱柱层析纯化后纯度达到89.6%,疏水层析进一步纯化后纯度达到96.2%。结果:纯化产物在SDS-PAGE上呈现单一条带。经凝胶扫描分析,纯化前的培养上清液人瘦素纯度为42.3%,Q柱柱层析纯化后纯度达到89.6%,疏水层析进一步纯化后纯度达到96.2%。结论:通过强阳离子交换层析和疏水层析的合并应用,可将毕赤酵母表达系统表达的人瘦素进行有效纯化,纯度可达镍柱亲和层析的纯化结果,为进一步可能的产业化生产人瘦素提供了可靠依据和方法,为围绕瘦素的相关领域研究奠定了实验学基础。 相似文献
4.
目的 探讨RNA干扰bcl-2基因对人骨肉瘤细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法 选用人骨肉瘤细胞进行体外培养,以siRNA分别处理MG63细胞24~72h后,MTT法检测细胞增殖,SABC免疫组织化学法检测细胞内bcl-2、bcl-xl、bax、caspase-3和C-myc蛋白表达水平.结果 RNA干扰bcl-2基因对MG63细胞增殖有抑制作用.下调bcl-2的表达的同时,上调了caspase-3蛋白表达水平,并使C-myc蛋白表达水平下调.对bcl-xl、bax的蛋白表达无明显影响.结论 RNA干扰显著降低bcl-2蛋白的表达,对人骨肉瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用. 相似文献
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背景: 研究表明,将干扰素与胸腺素α1联合应用可增强干扰素的抗病毒作用。
目的:获得既具有干扰素抗病毒活性又有胸腺素α1增强免疫功能的双重活性重组融合蛋白。
设计、时间及地点:体外对比试验,于2003-03/2004-12在重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所完成。
材料:融合基因片断由上海生工合成,人羊膜细胞、水泡性口炎病毒购自上海生化与细胞生物所,对照品IFNα1b、IFNα2a和胸腺素α1为市售药品。
方法:选择大肠杆菌偏爱的密码子,将合成的胸腺素α1与复合干扰素编码序列构成的融和基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-22b(+)、在宿主菌BL21(DE3)-Codon plus-RP-X中表达融合蛋白。通过硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、分子筛层析等方法进行分离纯化。采用细胞病变抑制法测定融合蛋白的抗病毒活性,采用细胞增殖实验检测融合蛋白对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。
主要观察指标:重组融合蛋白抗病毒的活性和促小鼠脾淋巴细胞增殖活性。
结果:①在大肠杆菌中表达的融合蛋白呈胞内可溶性表达,表达量占细菌总蛋白的20%以上。②纯化后,融合蛋白的纯度达96%以上。③融合蛋白的抗病毒活性优于市售的IFNα1b、IFNα2a。④融合蛋白的促淋巴细胞增殖活性与市售胸腺素α1相似。
结论:在大肠杆菌中表达的胸腺素α1与复合干扰素融合蛋白既具有干扰素抗病毒活性又有胸腺素α1的增强免疫功能。 相似文献
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目的:探讨Bcl-2基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)表达载体对卵巢癌SKOV3细胞Bcl-2基因表达的抑制作用。方法:构建针对Bcl-2基因的RNAi表达载体,脂质体法转染卵巢癌SKOV3细胞株,应用RT-PCR及流式细胞仪检测其对Bcl-2基因mRNA及蛋白表达的影响。结果:构建的两种表达载体均抑制了Bcl-2基因的mRNA及蛋白的表达,其中转染2号载体的SKOV3细胞Bcl-2基因mRNA表达仅相当于对照组的32.3%,蛋白抑制率达60.18%。结论:RNAi表达载体可以有效抑制Bcl-2基因的表达。 相似文献
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目的:研究c-erbB2反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针99mTc-ASODN-EGF的体内分布和药动学特性。方法:小鼠尾静脉注射99mTc-ASODN-EGF 370 kBq(10μC i).150μL-1,于0.5,1,2,4,8,24 h取血、肝、脾、肾等组织器官,测定每分钟放射性计数(cpm),并准确称重,计算每克组织百分注射剂量率(%ID.g-1)。兔经左侧耳缘静脉注射99mTc-ASODN-EGF 1110 kBq(30μC i).2 mL-1,于1,3,5,10,15,20,25,30,40,60,120,240,360 m in从右侧耳缘静脉采血约0.2 mL,测定cpm,准确称重,计算每克血液每分钟放射性计数,用3P97软件计算药动学参数。结果:99mTc-ASODN-EGF在小鼠肝、肾、脾和肺的放射性分布较高,1 h的%ID.g-1分别为22±8,7.4±2.0,46±28和13±7。在心、脑、骨和肌肉的放射性分布很低。兔药动学参数符合二室模型,t12α为(0.32±0.07)h,t12β为(9±3)h,Vc为(1.2±0.8)cpm.kg-1,Cl为(0.061±0.023)cpm.h-1。结论:99mTc-ASODN-EGF的组织器官分布和药动学特性能满足临床显像的要求,可用于肿瘤靶基因的显像。 相似文献
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重组人瘦素的分离纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法:采用强阴离子交换柱(Sepharose Qfast flow)和疏水层析柱(Phenyl Sepharose 6 fast flow)在pH7.5的条件下进行纯化。结果:经Q柱一步纯化后,产物纯度由42.3%到达89.6%,随后通过疏水层析纯化后,产物纯度达到96.2%。经SDS—PAGE证实为单一蛋白条带。结论:通过上述手段已成功分离纯化得到纯度较高的由毕赤酵母表达的重组人瘦素。 相似文献
10.
[目的]利用RNA干扰技术,以Bcl-2为靶基因,设计构建重组体,并进行序列分析,探索肿瘤基因治疗的新途径。[方法]设计有小发夹结构的两条DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体Pgenesil-1上构建重组体,转化DH5a菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。[结果]将合成的DNA片段退火后克隆至载体上,经酶切及序列鉴定为目的序列,靶向Bcl-2基因转录shRNA重组质粒构建成功。[结论]靶向Bcl-2基因转录shRNA重组质粒的成功构建,为下一步利用该重组体干扰肿瘤细胞中Bcl-2的mRNA转录,探索肿瘤基因治疗的新途径奠定基础。 相似文献