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1.
从人血浆和人尿中纯化了蛋白C系统各组分及抗凝血酶Ⅲ。免疫家兔产生了抗血清,氯胺T法,Iodogen法和Bolton-Hunter法制备了碘标记化合物。采用平衡法建立了放射免疫分析方法。所有方法的最低可测限均小于10μg/L,回收率在94.30%~105.22%之间,未见与因子Ⅱ和凝血酶的交叉反应。采用所建的放射免疫分析法和流式细胞技术分析了蛋白C系统在内皮细胞表面的功能表达和调节。建立了简单、可靠,适于分析APC耐性的APC-APTT方法和可明确因子Ⅴ纯合子和杂合子G1691A点突变的聚合酶链反应方法。结果表明,中国和其他地区的黄种人因子Ⅴ G1691A点突变发生率显著低于欧洲白种人,而APC耐性并不低。提示中国等黄种人群有独立于因子Ⅴ G1691A点突变以外的因子Ⅴ或因子Ⅷ突变点存在的可能或存在其他致APC耐性因素等。 相似文献
2.
3.
目的在毕赤酵母中表达重组人脑钠肽(BNP)与人血清白蛋白(HSA)融合蛋白,并检测其活性。方法重叠PCR法拼接BNP二联体与HSA基因,插入表达载体pPIC9K,电穿孔法转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western blot鉴定及活性检测。结果融合基因(BNP)2-HSA经测序正确,重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确。诱导72h,融合蛋白表达量最高,可达200mg/ml,且具有良好的反应原性,其活性为rhBNP标准品的1%。结论已在毕赤酵母中成功表达了具有一定生物活性的(BNP)2-HSA融合蛋白,为开发BNP长效药物奠定了基础。 相似文献
4.
甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase, FDH, EC 1.2.1.2)在发酵工业中常被应用于酶法辅因子再生系统。为了改造巴斯德毕赤酵母甲酸脱氢酶(FDH from Komagataella phaffii,KphFDH)的辅因子特异性并应用于体外NADPH辅因子再生系统,研究基于多序列比对和文献调研的结果,确定了D195、Y196为突变位点,构建了16个突变体,并表征了野生型和突变体的比酶活力和酶促反应动力学。得到最优的NADP+特异性突变体为KphFDHD195Q/Y196R,其对NADP+的催化效率(kcat/Km)为1.967 L/(mmol·s),催化特异性比率[(kcat/KmNADP+)/(kcat/KmNAD+)]为36.426;以NADP+作为辅因子时,对甲酸的催化效率(kcat<... 相似文献
5.
筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白.经摇瓶及5L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件.经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L.离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过Blue Sepharose 6FF亲和层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析及Q Sepharose 6FF离子柱纯化.纯化产品进行SDS-PAGE纯度检测、SEC-HPLC检测、相对分子质量测定、N端测序、内毒素检测和生物活性检测.筛选获得一株高产菌,优化获得最佳的发酵条件.纯化产品检测(SEC-HPLC)纯度大于95%,相对分子质量为85821,氨基酸的N端测序为DAHKSEVAHRFKDLG,与预期的相符.内毒素含量小于5EU/mg,符合国家药典的要求.体外生物细胞活性高达1.6×106 IU/mg.具有良好的工业应用价值. 相似文献
6.
为适应新形式下教学体系的需要,对商品包装设计的教学模式进行改革,在教学中引入实际项目,注重以项目驱动,创立以工作室制为核心的新的教学模式。在更新教育思想观念的基础上,以"工学结合"和项目化教学作为高职艺术设计人才培养模式的重点与切入点加以研究,加强实践环节,形成完整的实训机制和手段,对开发艺术设计专业学生的潜能、培养学生的创造能力,有着极其重要的作用。 相似文献
7.
8.
随着农村经济的发展,人民生活水平日益提高,因婚丧喜庆而举办的农村家宴逐渐增多,而由此引发的食物中毒事故也呈逐年上升的趋势。为了对我市农村家宴的卫生状况有一个较为全面的了解,消除食物中毒隐患,我站于1996年对全市农村家宴卫生状况进行了随机抽查。现将调... 相似文献
9.
目的构建双启动子双报告基因真核表达质粒,并在293T细胞内进行表达。方法分别以pEGFP-N1和pDsRed-N1为模板,PCR扩增EGFP和DsRed基因,插入表达载体pCI中,分别构建重组表达质粒pCI-EGFP和pCI-DsRed,利用载体上BglⅡ和BamHⅠ为同尾酶的特点,将两个表达质粒酶切后拼接,构建双启动子双报告基因重组真核表达质粒pCI-cmvDsRed-cmvEGFP,转染293T细胞,荧光显微镜观察EGFP和DsRed的表达,Western blot和流式细胞术检测EGFP和DsRed蛋白的表达。结果重组真核表达质粒pCI-cmvDsRed-cmvEGFP经酶切鉴定和测序证实构建正确,两启动子为顺向相连;EGFP和DsRed蛋白在293T细胞中可同时正确表达。结论成功构建了双启动子双报告基因真核表达质粒,并在293T细胞中表达,为实现两种外源基因在真核细胞内的同步表达及示踪提供了有效的分子工具。 相似文献
10.