海洋哈维氏弧菌溶血素蛋白在酵母菌细胞表面上的展示及其活性的测定

为制备以酒精酵母为载体的基因工程疫苗,参照其Genbank中基因序列设计一对引物,PCR扩增得到预期长度的产物,双酶切插入用于酒精酵母表面展示的穿梭质粒载体pYD1,转化大肠杆菌TOP10,提取阳性质粒转化酒精酵母菌株EBY100,诱导表达后,用免疫荧光和流式细胞仪检测外源蛋白的表达,结果测得最佳诱导时间为36～48h,诱导培养后约30.0%左右的酵母细胞表达外源蛋白;同时以EBY100和转空质粒的酵母菌株为对照,测得诱导培养后的阳性酵母转化株的细胞对牙鲆鱼血细胞具有溶血活性,以此酵母活细胞分设高中低三个浓度组,腹腔注射养殖牙鲆幼鱼,检测其毒性,结果表明此重组酵母对牙鲆是安全的.该研究为下一步鱼用活载体疫苗免疫效果的研究奠定了基础.     

发酵法制备鳕鱼皮胶原多肽菌种的筛选及工艺优化

从纳豆、酒曲、醋曲和海鱼胃肠道中共分离得到253株具有蛋白酶、脂肪酶等酶活力和产乳酸能力的菌株,从中选出7株具有较高酶活力和产乳酸能力的菌株,分别为2株细菌、1株霉菌、2株酵母、2株乳酸菌。通过单因素实验对发酵鳕鱼鱼皮的工艺条件进行了优化。发酵的最佳条件为:发酵温度为30℃,发酵培养基中鳕鱼皮:水的比例为1:0.5,接种量为6%,细菌:霉菌:酵母菌:乳酸菌的比例为3:1:1:2。