过表达桑树色氨酸脱羧酶基因(MnTDC)转基因烟草提高其耐盐性

褪黑素在植物生长、发育、生物与非生物胁迫中发挥重要作用。色氨酸脱羧酶(tryptophan decarboxylase, TDC)是褪黑素生物合成中第一个重要的酶。本研究克隆川桑TDC基因,并将其转入烟草中过表达,探讨MnTDC在盐胁迫下的作用机制。结果表明,成功构建过表达载体pLGNL-MnTDC,并经过农杆菌介导的愈伤组织转化获得3个独立转基因系。GUS染色、基因组PCR鉴定证明MnTDC成功转化到烟草株系中。qRT-PCR结果表明MnTDC在3个转基因烟草株系中的转录水平显著高于野生型(WT)。UPLC-MS/MS结果表明转基因株系显著提高了褪黑素的生物合成量。盐胁迫下,MnTDC过表达烟草与野生株系烟草相比,耐盐性显著增强。转基因烟草株系中的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化物酶(POD)活性均显著高于野生株系烟草,脯氨酸(Pro)等调节渗透压物质的含量和ERD10C等调节渗透压的基因表达量显著高于野生株系烟草,转基因株系中丙二醛(MDA)含量比野生株系烟草低。研究结果表明,MnTDC通过调节烟草细胞中褪黑素的含量进而影响了烟草植株整体的耐盐性。本研究初步揭...     

家蚕安全转基因技术研究现状与展望

转基因技术是实现基因功能研究和生物遗传改良的重要工具。转基因生物安全问题主要包括转基因操作技术安全与转基因产品安全这两个方面。近年来业内对转基因生物的安全性研究主要集中于转基因农作物、水生动物和家禽、家畜等大型动物在医药、农业和食品工业等领域的安全评估,而对于具有重要科研与经济价值的农业昆虫安全转基因技术研究的报道则较为有限,而且农业部至今未有转基因昆虫安全性评估的先例。家蚕（Bombyx mori）是重要的鳞翅目模式昆虫和农业经济昆虫,家蚕安全转基因技术的深入研究对于促进基础遗传学发展和推动蚕丝产业发展均具有重要价值和意义。自2000年第一例转基因家蚕建立以来,转基因技术已广泛应用于家蚕基因功能鉴定的基础研究和品种改良的应用研究领域,但转基因家蚕的安全性问题却成了限制转基因家蚕实用化应用的主要瓶颈。因此,开展家蚕安全转基因技术体系研究对促进转基因家蚕安全性评估和产业化具有重要意义。本文系统地概述了基于条件基因打靶的家蚕安全转基因技术体系的建立与研究现状,讨论了家蚕安全转基因技术的发展趋势和应用前景,以期为转基因动物特别是农业转基因昆虫的安全转基因技术建立和完善提供参考。     

6个果桑品种主要性状调查与染色体倍性测定

作者对黑龙江省6个果桑品种资源进行性状调查和染色体观察。结果表明,‘龙桑1号’具有染色体数为28和42的细胞,是四倍和六倍的混合体;‘选2’为自然六倍体;‘龙椹1号’‘选3’‘选4’‘矮化1号’均为四倍体。该研究对高寒地区桑树资源的发掘与创新利用具有重要意义。     

芽孢杆菌中性植酸酶基因的原核表达及酶学性质分析

植酸酶作为饲料添加剂能够有效提高动物对饲料中磷的利用率及减少粪便中磷排放对环境的污染,并降低植酸的抗营养作用。为了获得性能稳定的高活性植酸酶,采用PCR扩增芽孢杆菌(Bacillus sp.)中性植酸酶基因phyC(GenBank登录号:FJ986327)的成熟肽编码序列,将其克隆进原核表达载体pET-28a(+),并转化E.coli BL21(DE3)进行表达。在37℃条件下以0.5 mmol/L IPTG诱导4 h能够获得大量包涵体蛋白,在25℃条件下以0.5 mmol/L IPTG诱导6 h有利于可溶性蛋白的获得。利用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组植酸酶产物,获得的中性植酸酶的部分酶学特性为:耐热性较好,最适反应温度55℃,在70℃处理10 min可保持20%以上的酶活性;耐酸、碱能力较强,最适pH 6.0～7.0,pH 5.5～9.0时能保持80%以上的酶活性,pH 5.0～10.0时处理60 min仍能保持70%以上的酶活性,在pH 2.0～4.0时能保持40%以上的酶活性。利用构建的切除芽孢杆菌中性植酸酶基因phyC信号肽编码序列的原核表达载体及优化的诱导表达条件,能够在大肠杆菌中高量表达性能稳定的芽孢杆菌中性植酸酶。     

四川省2015年果桑菌核病防控技术要点

<正>四川省果叶兼用桑发展势头良好,据统计全省果叶兼用桑种植面积已超过10万亩(6666.7hm2),做好今春桑椹菌核病的防控工作,对夺取2015年桑椹丰收具有重要意义。为此特提出以下防控技术要点:1果桑园春耕、深埋菌核去年春季桑椹收获后,果桑园内及四周掉落残留了大量白桑果及菌核,这些菌核就是2015年菌核病发病的病原,一定要高度重视这些留地菌核(病原),把它们消灭在2015年初,具体做法如下:     

果桑春季菌核病的防控技术

<正>随着蚕桑多元化的发展,全国果桑种植面积不断增加,据不完全统计,目前中国果桑种植面积已达5.33万hm~2,桑果产量已达79万t。仅四川省已有30多个区县种植果桑,2017年种植面积已达8000hm~2以上,产果7.5万t,收入4.5亿元。尤其是四川省德昌县,2017年全县果桑面积达2000hm~2,产出桑椹3.5万t,农民售果收入1.5亿元,桑椹亩均收入5000元以上。而在果桑种植过     

家蚕条件基因打靶技术的建立及应用研究进展

条件基因打靶技术是通过借助位点特异性重组酶和预先引入宿主基因组的重组酶特异识别位点,在宿主特定发育阶段的组织或细胞中实现目标基因时空特异性定点插入、删除、替换和倒位等突变操作的技术。目前条件基因打靶技术已被广泛应用于拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryza sativa)、小鼠(Mus musculus)和果蝇(Drosophila melanogaster)等高等真核模式生物的功能基因研究,并逐渐成为转基因动植物研究领域进行基因操作的强有力工具。近年来,国内外多个研究机构系统地开展了家蚕(Bombyx mori)条件基因打靶技术的开发研究,目前已经建立了较为完善的基于多种不同位点特异性重组系统的家蚕条件基因打靶技术平台。本文较为全面地介绍目前最为常用的位点特异性重组系统的组成和作用原理,系统概述基于位点特异性重组系统的家蚕条件基因打靶策略及其应用,并对家蚕条件基因打靶技术存在的主要问题和发展趋势进行讨论。     

《40个基因组完全重测序揭示蚕的驯化事件及其相关基因》在线支撑材料

1材料与方法 1．1样品收集 为了囊括全世界实验室所保存的主要的蚕系统,我们收集了各种的地理区域的品系,如中国、日本、欧洲和热带地区（主要是东南亚：印度,柬埔寨和老挝）,和突变系统。列于表S1的29个家蚕品系来自中国西南大学蚕学与系统生物学研究所。     

一种新的单根茧丝纤维横截面积测量方法

纤维力学性能分析中对应力准确测量的关键技术是对纤维横截面积的精确测量。针对茧丝纤维横截面形状不规则的特点,新建立了一种单根茧丝纤维不同形状横截面面积的测量方法,该方法包括单根茧丝纤维样品的有效切割、切割样品的扫描电子显微镜观察和横截面积计算3个步骤,具体操作是:利用普通锋利刀片和坚硬平板将单根茧丝切割成长4～5 cm的小段样品后,将其夹入约1 cm见方橡皮块的切口制成横截面观察样品;在扫描电子显微镜下完成单根茧丝纤维样品横截面的形状观察;根据单根茧丝纤维横截面形状采用不同方法计算单根茧丝纤维样品横截面积。利用此方法测定了采用不同缫丝方法获取的单根茧丝纤维的横截面积,具有简单、快速、准确的特点,有助于更加准确测定和分析茧丝纤维的力学性能。     

亚热带型EGFP荧光绿茧转基区家蚕品系杂交组配试验

为探索EGFP荧光绿茧转基因家蚕品系与常规品种进行杂交时,其F1代的EGFP外源基因在杂交过程中的表达量和稳定性,笔者利用创新育成的亚热带型EGFP荧光绿茧转基因家蚕品系进行杂交组配测试。结果表明：转EGFP家蚕品系与常规白茧品种杂交,外源基因的表达情况有差异,造成绿茧比率各不一样;但利用已经纯合、外源基因表达量高的转EGFP家蚕新品系进行品系间二元杂交,其F1绿茧率高达100％;与常规白茧品种进行二元杂交测试,其F1代绿茧率高达90％以上;与常规白茧品种进行三元杂交测试,其F1代大多组合的绿茧率达到75％以上;测试杂交组合的结茧率、全茧量及茧层率等主要经济性状与两广二号相仿。