E种肠道病毒HY12毒株非结构蛋白3C单克隆抗体的制备与鉴定

为了研究国内分离的首株E种肠道病毒HY12毒株的非结构蛋白3C的功能,本研究以设计合成非结构蛋白3C的特异性引物,PCR扩增出3C的基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒.将构建的阳性质粒转化到大肠杆菌菌株BL21中,以IPTG诱导表达3C重组蛋白及应用尿素纯化包涵体的方法纯化重组蛋白...     

吉林省牛病毒性腹泻病毒与牛肠道病毒混合感染的流行病学调查

应用检测牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)与牛肠道病毒(bovine enterovirus, BEV)抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒,分别对2019-2020年采集于吉林省5个地区的738份粪便样品进行检测,并以PCR和免疫荧光试验对部分样品进行了确证。结果显示,吉林省不同地区、不同年龄及不同品种的牛群均存在BVDV与BEV混合感染,其中,BVDV感染率为10.26%～42.65%,BEV感染率为8.33%～20.83%,2种病毒的混合感染率为3.42%～14.71%。对不同品种牛群BVDV与BEV混合感染的检测结果显示,荷斯坦牛混合感染率为13.04%、西门塔尔牛为7.84%、延边牛为3.65%、利木赞及其他牛群为3.42%。检测不同年龄牛群混合感染的结果显示,各个年龄牛群均存在不同程度的BVDV与BEV混合感染,其中,成年牛群混合感染率高达57.63%,犊牛混合感染率为3.39%。PCR和免疫荧光试验检测结果显示,在BVDV与BEV混合感染的样品中均可同时扩增出或检测出BVDV与BEV的混合感染。本研究首次揭示出吉林省牛群的B...     

独创金康五行推拿法,张敬臣带您续写中医推拿新传奇

张敬臣,一个在中医推拿界赫赫有名的名字,他独创的金康五行推拿法获殊荣无数,不但为近万名颈椎病、关节炎、腰椎间盘突出、风湿等病症患者解除了痛苦,而且通过职业培训这一方式,将五行点穴推拿排毒法传授给了近2000人,学员遍布祖国大江南北,在全国各地已开金康推拿中心连锁店634家……张敬臣的事迹经《商界》、《生意经》、《生意通》、《大众投资》、《创富时代》媒体报道后,吸引了无数热衷于中医推拿的创业者,他们纷纷前来考察学习,金康五行推拿法以星火燎原之势即将席卷全国!     

一起由产毒素多杀性巴氏杆菌引起的母猪流产

对吉林省某规模化养猪场暴发的一种临床上以流产为特征的疫病进行了研究。结果从流产胎盘和流产胎儿的实质器官和心血中分离出一种革兰阴性的小杆菌,分离菌株的形态学、培养特性、生化特性和分子生物学特性的鉴定结果显示,所分离的菌株为多杀性巴氏杆菌,命名为Pm-CC21。序列测定与分析结果表明,Pm-CC21为荚膜多糖基因型D型。药敏试验结果显示分离菌株对大多数药物敏感,尤其对头孢氨苄和环丙沙星极为敏感。根据药敏试验结果对猪群进行给药治疗,同时结合猪场情况采取其他综合性措施,有效控制猪场疫情。应用PCR方法从胎盘与胎儿组织中未检测出猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和布鲁菌。本研究报道了一起少见由多杀性巴氏杆菌引起的母猪流产和早产的疫病,应引起国内同行的重视。     

从吉林省发生先天性关节弯曲-脑积水综合征新生犊牛分离鉴定出阿卡班病毒

本研究针对吉林省多地发生的一种新生犊牛先天性畸形和脑积水,临床上以四肢关节弯曲呈蜷缩状、无法伸直、不久发生死亡为特征的疾病进行了流行病学调查及病原分离与鉴定。结果应用MDBK细胞从发病与病死动物体内分离出3株病毒,命名为JL-AKA-CC21-1株、JL-AKA-CC21-2株和JL-AKA-YJ21。电镜负染观察显示,分离病毒粒子大小为70～130 nm,与病料中观察的病毒粒子相同。病毒接种MDBK细胞可引起典型的细胞病变,病变细胞聚集、变圆与脱落。分子生物学鉴定结果表明,上述分离毒株均为阿卡班病毒(Akabane virus, AKAV)。本研究从发生新生犊牛先天性畸形和脑积水的病死牛体内分离出AKAV,该研究结果将对今后吉林省本病的防控提供理论依据。     

检测F种肠道病毒双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用

依据F种肠道病毒(enterovirus species F,EV-F) SD-S67毒株的基因组序列设计合成引物,RT-PCR扩增出该毒株的VP1基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的BamHⅠ/EcoRⅠ位点,表达出VP1重组蛋白。以纯化VP1重组蛋白为免疫原,制备兔源多克隆抗体,并以制备的抗体建立了检测F种肠道病毒的双抗体夹心ELISA方法,同时对山东和河南省部分地区牛群感染EV-F进行了初步的流行病学调查。结果显示,捕获抗体的最佳包被量为400 ng/孔,HRP酶标抗体的最佳稀释倍数为1∶400;确定的方法判断标准为样品的D₄₉₀>0.217时判定为阳性。建立的ELISA方法可以特异性检测出EV-F病毒抗原,而EV-E和BVDV病毒抗原检测结果均为阴性,表明方法具有较好的特异性。以建立的ELISA方法检测不同稀释倍数的阳性样品,结果稀释1 000倍后的样品检测结果仍为阳性,表明建立的方法具有较高的敏感性。应用建立的方法检测部分样品,组内变异系数为1.05%～9.24%,组间变异系数为1.39%～6.78%,说明该方法具有良好的重复性。同时...     

鉴别牛肠道病毒感染复合PCR方法的建立及初步应用

牛肠道病毒(bovine enterovirus, BEV)感染是国内近年来报道的一种临床上以消化道、呼吸道症状为特点的新发传染病,其病原体为小RNA病毒科肠道病毒属中的成员。目前,BEV分为EV-E和EV-F 2个病毒种,两者间的核苷酸序列差异很大,属于不同的血清型/基因型,常规血清学方法难以将其区别。为建立一种鉴别EV-E和EV-F病毒的方法,本研究根椐GenBank已发表的EV-E和EV-F肠道病毒的基因组序列,设计合成引物,建立了鉴别EV-E和EV-F的复合PCR方法,并确定了该方法的特异性、敏感性和重复性。同时,应用该方法检测吉林省长春地区疑似BEV感染样品。结果显示,建立的方法具有良好的特异性,只能检测出EV-E或EV-F肠道病毒,而牛细小病毒、牛病毒性腹泻病毒等病原检测均为阴性。敏感性试验结果显示,EV-E和EV-F最低检出量分别为3.67×10²,5.21×10³ 拷贝/μL。检测长春地区的32份牛粪便样品的结果显示,EV-E和EV-F病毒的检出阳性率分别为28.13%和34.38%,两种病毒混合感染率为15.63%,与间接E...     

宿主通过激活NLRP3信号通路抑制HY12肠道病毒的复制

采用Q-PCR、Western blot和ELISA的方法检测巨噬细胞感染HY12病毒后NLRP3、IL-1β和Caspase-1等蛋白的表达水平及细胞上清中IL-1β的表达量,以确定巨噬细胞感染病毒后NLRP3通路的变化情况。同时应用IL-1β预处理小鼠原代巨噬细胞与NLRP3敲除小鼠原代巨噬细胞系,检测HY12病毒感染后细胞中病毒结构蛋白的表达水平,探究了NLRP3通路激活刺激IL-1β分泌对病毒复制的影响,并以小鼠模型进行了验证。结果显示,巨噬细胞感染HY12病毒后激活了NLRP3炎性小体信号通路,上调NLRP3、IL-1β和Caspase-1等蛋白的表达,且表达水平呈现病毒剂量与时间依赖性。同时发现IL-1β预处理的巨噬细胞感染HY12病毒后,病毒结构蛋白表达显著下降;而NLRP3敲除的小鼠巨噬细胞感染HY12病毒后,相比正常巨噬细胞感染病毒后病毒的结构蛋白表达更高。此外,与野生型小鼠感染HY12病毒相比,NLRP3敲除小鼠感染后病毒的复制明显增强。结果表明,宿主在HY12病毒感染后通过激活NLRP3信号通路及刺激IL-1β的分泌,进而抑制病毒的复制。     

一例猫糖尿病酮症酸中毒的诊治

糖尿病酮症酸中毒(DKA)是糖尿病(DM)导致的肝内酮体的形成失控、代谢性酸中毒、严重的脱水、休克和具有死亡性的综合征,症状呈渐进性.临床上猫DKA的病例主要见于猫的糖尿病早期典型症状被忽视,未及时诊断和治疗.糖尿病加重并体内形成酮体,发生了代谢性酸中毒和并发的疾病,表现出全身性症状(嗜睡、厌食、呕吐)后来就诊.