IBDV野毒株的分子生物学鉴定

取3个分离于山东地区几个鸡场IBDV野毒株IBDV SD01、IBDV SD02、IBDV SD03,利用Trizol试剂提取IBDV RNA,设计特定的引物,通过RT-PCR和Nested-PCR,获得分离株的VP2基因高变区的特定序列,并对其进行克隆和序列分析结果表明,分离的3个野毒株在VP2高变区与超强毒株HK46有较高的同源性,关键氨基酸位点都符合超强毒株的特征,与一般的强毒株、变异株和疫苗株的亲缘关系较远。这些关键位点氨基酸的变化使vvIBDV能够逃脱低毒力抗原所产生抗体的捕捉,导致了免疫鸡的发病。     

基于荧光显色的环介导等温扩增技术(LAMP)检测禽呼肠孤病毒

建立了一种基于荧光显色的禽呼肠孤病毒(ARV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法.该检测方法使用针对ARV的p10基因8个区域的6条LAMP引物,能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低能够检出102个拷贝的病毒,敏感性比普通PCR高100倍,而对其他病毒检测结果为阴性.在荧光显色中分别应用SYBR Green Ⅰ和钙黄绿素作为显色剂,其结果与琼脂糖凝胶电泳一致.在对80份临床样本的检测中,使用LAMP和PCR检测出阳性样本的数量分别为68份和55份.因此,基于荧光显色的LAMP方法可以应用于ARV的快速检测,具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力.     

用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法，用该法检测20份人工感染鸡血清样品，抗体阳性率为100％，康复期鸡群血清抗体阳性率为43％，人工接种弱毒疫苗65d和170d鸡群血清抗体的阳性率分别为60％、70％。经反复试验，确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件，即抗原包被浓度10．8μg／孔，待测血清最佳稀释度为1：100。     

文蛤坎氏弧菌的分离鉴定

本文从江苏文蛤养殖区发病文蛤中分离到1株优势菌,人工感染显示菌株能引起供试文蛤发病,死亡率为68.75%,且发病症状与原发病症状相同,提示该菌是引起文蛤大面积死亡的主要致病菌。对其形态、生理生化特征致病性进行了初步研究。结果显示分离菌株为革兰氏阴性菌,直杆状,主要生理生化指标赖氨酸脱羧酶、硝酸盐还原、甘露糖、氧化酶为阳性,精氨酸脱羧酶、鸟氨酸酸脱羧酶、V.P为阴性。结合革兰氏染色、形态、生理生化特点,最后鉴定该分离菌株为坎氏弧菌。     

日粮添加亚油酸对断奶至2月龄肉兔生长性能、免疫指标及脂质代谢的影响

选用断奶伊拉肉兔200只,随机分成5组,每组40个重复,每个重复1只肉兔,分别饲喂添加0、0．3％、0．6％、0．9％和1．2％亚油酸（LA）的日粮。结果表明,在初始体质量无显著差异的情况下,日粮添加LA对平均日采食量、平均日增重和料重比影响不显著（P=0．9158,0．5747,0．9252）,对血清甘油三酯、高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白影响不显著（P=0．5998,0．5717,0．6603）,对血清总胆固醇影响显著（P=0．0258）,0．9％和1．2％添加组显著低于0和0．6％添加组（P〈0．05）,对血清低密度脂蛋白影响极显著（P=0．0006）,0．9％和1．2％添加组显著低于0和0．6％添加组（P〈0．05）;免疫器官肝、脾指数和血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM受日粮LA水平影响不显著（P〉0．05）;日粮LA水平对肝脏乙酰辅酶A羧化酶（ACC）mRNA表达量影响不显著（P=0．7433）,对肉碱脂酰转移酶1（CPT1）mRNA表达量影响极显著（P=0．0034）,其中0．9％和1．2％添加组极显著高于对照组（P〈0．01）。日粮添加I。A对断奶至2月龄肉兔生产性能及免疫指标无显著影响,主要影响机体的脂质代谢。     

迟缓爱德华菌人工感染斑马鱼的致病性及组织病理学变化

用迟缓爱德华菌真鲷分离株(E.t-CD)对斑马鱼进行人工感染试验,观察其发病、死亡以及相关病理学变化。结果表明,该菌对斑马鱼的半数致死浓度(LD50)为2.69×102 cfu/尾;感染发病鱼呈现岀血、溃疡、腹水、败血等症状;病理组织学检查以肝脏水肿变性,肝细胞萎缩、坏死、脱落;脾脏散在增生性结节、充血、水肿、淋巴细胞大量缺失等病变为主。结果表明,斑马鱼可作为研究迟缓爱德华菌致病性的动物模型。     

实验鸡群暴发鸡痘并发细菌感染的诊断报告

鸡痘是危害养鸡业发展的一种严重的传染病,不分日龄大小均可发病,发病后成鸡一般不造成死亡,雏鸡死亡率较高,5%～30%不等,若混合感染或继发感染可造成更高的死亡率。粘膜型鸡痘症状较重,有时可引起较高的死亡率。本病一年四季都能发生,夏末和秋季最易流行,此时蚊虫多,经叮咬或破损的皮肤传播,多发生皮肤型鸡痘,其它季节易发粘膜型鸡痘。近年来鸡痘发病率及其造成的损失有增高趋势。本文报道了一起皮肤型鸡痘引起较高死亡率的病例,希望能够引起养殖业户的注意。一.发病鸡群山东省某实验鸡场于2002年9月购进500只海兰白商品代蛋公鸡。9日龄接种NDVIV系弱毒疫苗,同时接种新城疫油佐剂灭活苗皮下注射;14日龄接种IBDV弱毒疫苗;23日龄NDV进行第二次免疫。未接种鸡痘疫苗,其他按常规饲养管理方法进行。二.发病情况该鸡群于40日龄开始出现鸡痘发病率逐渐增加,50～60日龄达到高峰,至70日龄自然停止。发病鸡可见冠部、颜面部、颈部、背部、翅部(内外侧)、胸部、肛门周围等部位皮肤出现大面积痘疹,表面呈干硬结节,凸凹不平,有些相邻的痘疹互相融合,形成干燥、粗糙呈褐色的大的疣状结节,突出皮肤表面。发病率达到70%～80%,死亡率高达65....     

鸡源SAMHD1蛋白多克隆抗体的制备与鉴定

为制备鸡源宿主限制因子SAMHD1(chSAMHD1)的多克隆抗体,本试验根据chSAMHD1基因序列设计引物,扩增部分chSAMHD1片段,构建p ET-chSAMHD1原核表达质粒,并将其转化至BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导和镍柱亲和层析纯化获得重组chSAMHD1蛋白。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗chSAMHD1多克隆抗体,通过Westernblot和IFA测定多克隆抗体的反应性。结果显示,chSAMHD1重组蛋白的相对分子质量约为75.0 k Da,与预期大小一致;重组蛋白以包涵体形式表达;所制备的chSAMHD1多克隆抗体效价达到1:512 000;IFA结果证实,本试验所制备多克隆抗体能够特异性识别DF-1细胞中过表达的chSAMHD1蛋白。以上结果表明,该研究成功制备了chSAMHD1蛋白多克隆抗体,从而为鸡源SAMHD1蛋白功能的深入研究奠定了基础。     

饲粮豆油添加水平对断奶至3月龄獭兔生长性能、营养物质消化代谢、血清生化指标及皮毛质量的影响

本试验旨在研究饲粮豆油添加水平对断奶至3月龄獭兔生长性能、营养物质消化代谢、血清生化指标及皮毛质量的影响。选用体重相近的200只断奶獭兔,随机分成5组,每组40个重复,每个重复1只。对照组獭兔饲喂基础饲粮,其余4组獭兔分别饲喂以1%、2%、3%、4%的豆油代替基础饲粮中相同比例玉米的试验饲粮。预试期7 d,正试期53 d。结果表明:在初始体重无显著差异(P>0.05)的情况下,饲粮添加豆油可极显著地降低獭兔的平均日采食量(P<0.01),但对平均日增重无显著影响(P>0.05)。饲粮豆油添加水平为3%时料重比最低,极显著低于对照组(P<0.01),与其他添加组相比差异不显著(P>0.05)。饲粮添加豆油可极显著地降低獭兔的食入总能、食入氮和粪氮(P<0.01),但对粪能、尿能、尿氮、可消化氮、沉积氮和氮利用率无显著影响(P>0.05)。能量代谢率和能量消化率,各添加组均高于对照组,但组间差异不显著(P>0.05)。随着饲粮豆油添加水平的增加,氮表观消化率先增加后降低,在添加水平为2%时达到最高,并显著高于对照组(P<0.05),与其他添加组差异不显著(P>0.05)。饲粮豆油添加水平对血清低密度脂蛋白胆固醇含量有极显著影响(P<0.01),对血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇含量无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,各添加组血清低密度脂蛋白胆固醇含量均极显著降低(P<0.01),但各添加组之间差异不显著(P>0.05)。饲粮豆油添加水平对皮张面积、皮张重量无显著影响(P>0.05),但极显著影响成纤维细胞生长因子5(FGF5)mRNA的表达量(P<0.01),且在添加水平为2%时FGF5 mRNA的表达量最高。综上所述,断奶至3月龄獭兔饲粮中豆油的适宜添加水平为2%～3%。     

灿烂弧菌和创伤弧菌的不同保存方法比较

比较了琼脂斜面、穿刺石蜡保存法和甘油冷冻冻存法保存灿烂弧菌和创伤弧菌的效果。结果表明,甘油冷冻冻存法和穿刺石蜡保存法的保存期显著比琼脂斜面法长,保存12月后各保存方法细菌的毒力都有不同程度的下降,甘油冷冻冻存法显著好于其它2种保存方法。